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1、抗生素效价微生物检定法,赵永成 生工1001 4104100139,1.概述,一、抗生素的概念及抗生素的生物检定 抗生素是由微生物所产生的极微量便具有选择性地杀死或抑制其他病原微生物生长的一类天然有机化合物。 抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗菌效力作为效价的衡量标准。,一、抗生素的效价和单位 抗生素的含量用效价和单位表示。该词有时不加区别统称为效价单位。 效价（otency），指检品的实际单位数与其标示量的比值。常表示为效价的百分数。 单位（unit,u）单位是衡量抗生素有效成分的具体尺度。,、重量单位 以抗生素的生物活性部分重量作单位 微克（）单位，毫克单位。 、类似重量单位 以特定的
2、纯粹抗生素盐类的重量作为单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）微克（）单位，毫克个单位。这是根据国际使用习惯而来的。 、质量折算单位 以特定的纯抗生素盐的质量为单位而加以折算。青霉素0.6ug为1单位 、特定单位 以特定的抗生素标准品的某一质量定为一单位。,微生物发的分类,稀释法 浊度法 双碟法,2、浊度法系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的种方法。,3、管碟法：是利用抗生素在含敏感试验菌的琼脂培养基中的球面扩散渗透作用，从而形成一定的抑菌圈。 通过琼脂培养基
3、，可观察并测量出抑菌圈的大小。,管碟法测定抗生素效价原理和方法,一 原理 在一定的抗生素浓度范围内，对数剂量(浓度)与抑菌圈的表面积或直径成正比，可以得出一条曲线。 抗生素浓度换算成对数，则抑菌圈直径与抗生素对数成直线关系,管碟法的材料,一，仪器 菌种 培养基 培养皿 牛角杯 陶瓦圆盖 二，试剂 无菌生理盐水 ph6.0的磷酸缓冲液 青霉素标准品储备液 青霉素标准品使用液,管碟法测定操作,1. 试验用菌液 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在3537培养20h到22h，；临用前用水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备用,2 供试品及标准品的配制,标准品与
4、样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。称量最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。 标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平，样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平中的干燥加入剂应保持经常注意更换。 称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液，定容至刻度，过滤并稀释。,双碟的制备： 取内径90mm、高1617mm的平底双碟； 注入加热融化的培养基20ml，使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。 另取培养基适量加热融化后，放冷至4850（芽孢可至60），加入规定的试验菌悬液适量（能得清晰的抑
5、菌圈为度。） 二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在 1824 mm。,（二）抑菌圈的形成,在平板底部四边，分别对角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”标记 将不锈钢小管(俗称为牛津杯)放置在含敏感试验菌的琼脂培养基上。,th,sl,uh,以无菌滴管分别在每个牛津杯内加入相应的抗生素溶液至满但不溢出管外 且四杯内液面高度相同，盖上平皿盖，静置30分钟。,将培养基置入适宜试验菌生长的培养箱中，琼脂培养基中的试验菌开始生长。,抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关； 比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。,计算检品的效价,求出W和V W=（SH+TH）-（SL+TL） V=（TH+TL）-（SH+SL） TH供试品高剂量的抑菌圈 TL供试品低剂量的抑菌圈 SH标准品高剂量的抑菌圈 SL标准品低剂量的抑菌圈,求出=D log（IV/W） 供试品和标准品的效价比 D标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1 I 高低剂量之比的对数，即log2或log4 Pr = Ar Pr供试品实际单位数 Ar供试品标示量或估计单位,