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1、 淋病的实验室诊淋病的实验室诊断断 淋病的实验室诊断培训主要内容标本采集与运送常用检测方法卫生行业标准WS268-2019增减内容培训目标为工作的规范性提供依据 什么是淋病？由淋球菌感染泌尿生殖系统、肛门直肠、咽部等所致的，以化脓性炎症为主要特征的一种性传播疾病传染病分类：按照传染病法的划定属于乙类传染病。淋病作为法定报告病例，是我国目前重点防控的性传播疾病之一。淋球菌概述 淋病奈瑟菌简称淋球菌，革兰染色阴性，呈肾形或球形，成对排列，两球菌接触面平坦，形似一对黄豆。抵抗力极弱，对干燥、寒冷、热、常用消毒剂 均敏感，经干燥12小 时或者加热555分钟即 死亡。淋病的诊断依据流行病学史不安全性行为
2、史性伴感染史多性伴史新生儿患者的母亲有淋病史 临床表现潜伏期无合并症的淋病有合并症的淋病泌尿生殖道外的淋病实验室检查涂片革兰染色淋球菌培养核酸检测标本的采集取材部位男性 异性恋者:采集尿道标本，有口交史者加取咽部标本；同性恋者:采集尿道、直肠及咽部标本.女性 采集宫颈标本，必要时从尿道、直肠、咽部、前庭大腺和尿道旁腺取材；幼女 采集阴道分泌物；新生儿眼炎患者 采集眼结膜分泌物，对其母亲采集宫颈、尿道及直肠标本。标本的采集和运送取材方法尿道男性患者 有症状患者可挤出脓性分泌物，用取样拭子蘸取脓液作涂片或培养。对挤压后无明显分泌物时，采用男用取材拭子插入尿道 23cm，稍用力转动，保留5-10秒再
3、取出，以采集到粘膜上皮细胞。女性患者 可抵着耻骨联合轻轻按摩尿道口，挤压出分泌物。如果无明显分泌物，可用同男性相似的上述方法取材。注意：采集尿道拭子的患者应至少注意：采集尿道拭子的患者应至少2 2小时没有排尿小时没有排尿标本的采集和运送取材方法宫颈 取材前用温水或生理盐水湿润扩阴器，应避免使用有防腐剂和润滑剂的扩阴器，因为这些物质对淋球菌有抑制作用。仔细检查阴道壁和宫颈，如果宫颈口外面的分泌物较多，先用无菌棉拭清除过多的宫颈粘液。将一取样拭子插入宫颈管内12cm，稍用力转动，保留510秒后取出。标本的采集和运送取材方法其他标本 直肠拭子 将取样拭子插入肛门23cm，从紧靠肛环边的隐窝中取材。避
4、免接触粪便。阴道拭子 青春期前女孩可采集阴道标本。将取样拭子置于阴道后穹窿1015秒，采集阴道分泌物。咽拭子 从咽后壁或扁桃体隐窝取材 眼结膜拭子 翻开下睑取材 尿液 清晨首次尿或禁尿后2小时，取前段尿10-20ml标本的采集与运送运送 淋球菌的抵抗力弱，对热敏感，不耐干燥。取材后立即接种到选择性培养基上，若不能立即接种则需采用运送系统。置于非营养型运送培养基中的标本应在12小时内送到实验室，再接种于选择性培养基，分离阳性率可达90%以上。超过24小时则分离阳性率下降。实验室检查涂片革兰染色涂片固定染色镜检结果观察细胞类型病原体染色特性、形状、位置观察要点实验室检查涂片革兰染色实验室检查涂片革
5、兰染色实验室检查涂片革兰染色结果报告实验室检查涂片革兰染色临床价值：敏感性和特异性取决于标本的类型男性淋菌性尿道炎的尿道分泌物标本，其敏感性及特异性可高达9599，具有诊断价值宫颈标本、无症状男性尿道拭子及取自直肠标本时，其敏感性仅为4070，应采取分离培养方法鉴定直肠和咽部标本：不推荐用涂片染色的方法做诊断如果在多形核白细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证实验室检查淋球菌分离培养常用培养基：T-M培养基 GC血液琼脂培养基 非营养运送培养基 实验室检查淋球菌分离培养接种标本取材后标本应尽可能及早接种。培养基应先置于室温中预温。将取材的拭子转动涂布于平皿的上1/4范围，然后用接
6、种环分区划线，以保证获得较纯的单个菌落。实验室检查淋球菌分离培养实验室检查淋球菌分离培养培养条件：361，含5%10%CO2，湿润（70%湿度）的环境。CO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。问题：淋球菌是厌氧菌还是需氧菌？实验室检查淋球菌分离培养结果观察：有菌落 进一步鉴定培养24小时 有菌落 无菌落 继续培养至72小时 无菌落 丢弃实验室检查淋球菌分离培养实验室检查淋球菌分离培养 初步鉴定菌落特征圆形、凸起、湿润、光滑半透明或灰白色通常有黏性氧化酶实验试剂：盐酸四甲基对苯二胺及盐酸二甲基对苯二
7、胺，前者更敏感革兰染色取单个可疑菌落制备涂片 做 革兰染色，在 油 镜下检查实验室检查淋球菌分离培养氧化酶实验淋球菌具有氧化酶，能将氧化酶试剂氧化成醌类化合物，出现颜色反应。溶液与纸片挑菌落的接种环不能用含铁接种环（铁与氧化酶试剂发生反应，造成假阳性）实验室检查淋球菌分离培养实验室检查淋球菌分离培养氧化酶实验的临床意义淋球菌的氧化酶实验是阳性，如果氧化酶试验为阴性，一般可以排除淋球菌氧化酶反应并非特异性试验。所有奈瑟菌属细菌及许多其他细菌包括多数弧菌、布氏菌属、绿脓杆菌及嗜血杆菌属等氧化酶反应亦呈阳性实验室检查淋球菌分离培养 问题做完初步鉴定，就可以出具阳性报告了吗？哪种情况需要做进一步的鉴定
8、？实验室检查淋球菌分离培养取自泌尿生殖道的标本 可诊断为淋球菌取自泌尿生殖道以外的标本来自低危人群（如儿童）的分离株 确证鉴定涉及医疗法律案件 的分离株 （糖发酵实验）实验室检查淋球菌分离培养 糖发酵试验奈瑟球菌属的糖发酵特征 葡萄糖葡萄糖麦芽糖麦芽糖 乳糖乳糖 蔗糖蔗糖淋球菌+-脑膜炎球菌+-乳酰胺奈瑟菌+-灰色奈瑟球菌-布兰汉卡他球菌-淋球菌分离培养-糖发酵试验临床意义糖发酵试验的特异性为99100某些淋球菌菌株尤其是AHU-分离株反应弱，可呈现阴性葡萄糖反应，需用另外的试验加以鉴定。麦芽糖阴性的脑膜炎球菌也会被误鉴定为淋球菌，对泌尿生殖道外的分离株最好采用一种以上的鉴定方法淋球菌实验室诊
9、断-核酸检测基本情况：检测淋球菌核酸的试剂盒有DNA和RNA检测，检测技术为PCR-荧光探针法或荧光PCR。有单独检测淋球菌，也有同时检测沙眼衣原体、淋球菌的试剂盒。特点：不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运送条件；仅适合尿道或宫颈标本，以及尿液（PCR/LCR）；不能进行抗生素敏感性试验 用于判愈试验需在治疗后至少3 周以上进行 淋病的实验室检测现状 药物敏感性检测药物敏感性检测 有待普及有待普及 2019版诊断标准涂片革兰染色 分离培养 核酸检测 淋病防治国家重点工作 现阶段完善淋球菌耐药监测网络 遏制细菌耐药国家行动计划（2016-2020年及全国细菌耐药监测网络技术方案（2016版）提
10、出建立覆盖全国二、三级医疗机构的广泛的细菌、耐药性监测网络，为淋球菌耐药监测提供重要的和可持续的基础和平台。我国淋病防治面临的挑战美国中国存在问题问题1：选择涂片染色镜检方法对女性患者进行诊断建议：对女性和无症状男性采用涂片染色方法，其敏感性极低，不能采用。应选择正确的淋球菌培养法进行诊断。诊断标准上已说明。问题2：目前淋病的检查对象全部来源于皮肤性病科。建议：考虑到女性淋病病人对本人疾病症状和流行病学史的不明确，较多到妇产科就诊，造成漏检的状况应引起足够重视。存在问题问题3：仅常规开展淋球菌涂片检查 建议：医疗机构应常规开展淋球菌革兰染色涂片和淋球菌分离培养，有条件的医疗机构可开展淋球菌核酸检测。问题4：使用快速试剂或淋球菌血清抗体检测用于淋病诊断。建议：应参照淋病的诊断与报告根据卫生部卫生行业标准淋病诊断标准（WS2682019）进行。问题5：取女性阴道分泌物进行淋球菌培养。建议：由于淋球菌的好发部位在宫颈1-2cm柱状上皮处，应规范采集有效样本。