2022年植物组培复习总结.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 第一章 植物细胞组培：在离体条件下利用人工培育基对植物器官、组织、细胞原生质体 等进行培育,使其长成完整株体；类型 1 器官培育 2 茎尖分生组织培育3 愈伤组织培育 4 细胞培育 5 原生质体培育植物组培特点 :1 培育条件可认为掌握 2 生长周期短,繁衍率高 3 治理便利,利用工厂化生产和自动化掌握 植物细胞全能性：每个植物体细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因,因此 在肯定条件下培育都可发育成一个与母体一样的植株；植物细胞变现全能性必需经过的步骤 : 成熟细胞分生细胞胚状体完整植株 成熟细胞愈伤组织出根出芽完整植株 愈伤组织 :原本指植

2、物受伤后在表面形成的一团薄壁细胞；植物组培中特指人工培 养基上形成的很多生长的薄壁细胞；脱分化：已经完全分化定型的细胞,经过诱导成为重新复原分裂才能的细胞的过 程；诱导细胞脱分化是处于抑制的,需要外接条件刺激,在各条件中,激素起重要作用；4 类植物 1 有些植物只需生长素2 有些仅需细胞兴奋素 萝卜 大豆IAA 吲哚乙酸 NAA 萘乙酸 2,4-D 如菊苣3 须加细胞兴奋素和生长素 烟草 胡萝卜 马铃薯4 不需加任何激素 烟草愈伤组织再分化：植物成熟细胞经过脱分化后（形成愈伤组织后）,由愈伤组织再形成完整植株的过程；植物组培过程 取组织形成愈伤组织幼胚植物幼体成熟植株脱分化 再分化* 以高度分

3、化的动物体细胞的细胞核具有全能性原理植物组培动物组培植物细胞全能性细胞增殖培育基性质固体培育基液体培育基培育基特有成分蔗糖、植物生长调剂剂葡萄糖、动物血清培育结果植物植株细胞系、细胞株培育目的快速繁衍、培育无病毒植获得细胞或细胞分泌物株等植物组培进展简史名师归纳总结 探究阶段施莱登 施旺 创立细胞学说提出理念第 1 页,共 29 页细胞学说要点1 动植物均由细胞组成- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 2 全部细胞来自其他细胞3 卵和精子是细胞4 单个细胞可分裂形成组织5 细胞遗传全能性；组培技术哈勃兰特 胜利培育出植物 供应理论基础奠基阶段 怀特 配制出

4、培育基 熟悉到维生素和植株激素在植物组培中的重要作用崔徵 用不同种类和比例植物激素处理离体培育的烟草茎段和髓 发觉腺嘌呤和生长素的比例是掌握芽和根形成的主要条件之一斯图尔特证明哈波兰特50 年前理论正确性植物遗传转化体细胞无性系变异快速进展阶段 MS 培育基 PEG 原生质体融合法人工种子植物组培应用1 增加遗传变异性,改良作物2 繁衍植物无性系：组培中从一个单细胞、一块愈伤组织、一个芽等器官都可获得无性系；无性系就是用植物体细胞繁衍所得的后代；植物组培的无性系 5 种原球茎 经原球茎形成植物 兰花愈伤发生型 细胞或愈伤组织 通过不定芽形成植株 烟草愈伤组织胚状体发生型 细胞或愈伤组织 通过胚

5、状体 胡萝卜体细胞培育器官型 离体茎 花芽等直接产生小植株 百合无菌短枝扦插 腋芽,连同短枝经灭菌后 在无菌条件下培育,使其生根3 有用化合物的工业化生产培育物低温贮藏和种质库的建立生物科学的进展三大成就生苦克隆技术基因工程干细胞技术植物基因工程技术进展对植物育种影响核心 DNA 重组技术 T-DNA 转化原理 植物细胞全能性通过揭示 T-DNA 转化原理,改造 胞分化；进展最快领域；Ti 质粒并构建植物表达载体系统,诱导转基因细克隆 广义 一个细胞个体无性繁衍 产生的后代基因克隆 是指基于大肠埃希菌的 DNA 片段（或基因）的扩增过程 目标 DNA 的获得、重组载体的构建、受体细胞的转化以及

6、重组细胞的挑选和繁衍植物遗传转化：将外源基因转移到植物体内稳固的整合、表达与遗传的过程名师归纳总结 先决条件建立稳固高效的转化体系第 2 页,共 29 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 主要方法农杆菌法 基因枪法 花粉管通道法显微注射法电击法 聚乙二醇法基因组学：最早指基因组作图和测序；后来经进展科学家定义为讨论生物基因组 的结构和功能的科学；分为结构基因组学和功能基因组学两大部分；DNA 分子标记直接分子水平检测DNA 差异 DNA 水平上遗传变异的直接反应现在有数十种 对植物育种影响 挑选分子标记,构建分子标记遗传图普,为植物育种,特殊是数 量性

7、状遗传育种供应参考 其次章 基本设备：超净工作台 植物组培用具 培育基配置用具烧杯 容量瓶 量筒 移液器 培育用具试管 三角瓶 培育皿 封口膜 接种用具酒精灯 镊子 喷雾器 解剖刀用具洗涤洗涤剂酸洗 转基因废弃物必需灭菌用具灭菌干热灭菌酒精灼烧过滤 0.2um 干燥灭菌箱离心机 电冰小型器具分注器血球计数器移液器 过滤灭菌器常用仪器酸度计天平 磁力搅拌器高压蒸锅灭菌器箱 摇床 培育箱 显微镜 培育室 干净 培育架 植物生长专用灯 25 70%-80% 湿度培育室和接种室灭菌 2% 新杰尔敏擦洗 75% 乙醇喷雾 UV 照耀 20MIN （紫外）器皿和接种工具灭菌 解剖刀 镊子 剪刀等采纳干热灭

8、菌法 烘箱灭菌 120 1H 外植体灭菌原就：充分灭菌 不损耗外植体 不同外植体灭菌要求不一样常用方法 75% 乙醇（无毒 潮湿植物）氯化汞（有残毒）次氯酸钠（无害）培育基灭菌方法 高温高压蒸汽灭菌 过滤灭菌植物组织培育基主要成分：水 无机成分 大量元素 N P K Ca （平稳体内离子）Mg S 微量元素 铁 硼 猛 锌 铜 钼 钴 氯有机物质 硫胺素 VB1 盐酸吡哆醇 VB6 烟酸 VB3 泛酸钙 VB5 肌醇 Inositol （促进胚状体生成）水解酪蛋白 CH 水解乳蛋白 LH 麦芽提取物 ME 酵母浸出物 YE 碳源 作用：养分物质 掌握渗透压 类型 蔗糖 果糖 山梨醇等浓度 2%

9、-5% 低的原生质体 高的胚和花药固化剂 琼脂用量 7-10g 即 0.7%-1% 对植物有用 少了培育基软 多了太硬 不同品牌对植物反应不同GELRITE 脱乙酰吉兰糖胶 成分稳固培育基 PH 值 5.5 6.0 名师归纳总结 6.0 硬化 PH 降低会产生有机酸影响N 利用- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - PH 调整方法 1N HCL 或 NAOH 在加入 agar 前先调剂测定方法 PH 试纸 PH 计植物激素：生长素 细胞伸长 细胞分裂 诱导愈伤 促进生根 IAA NAA 2,4D 细胞分裂素：促进细胞分裂兴奋素 玉米素 6- 苄基腺嘌呤赤霉素

10、 植物生长 开花 结果 脱落酸 促进组织成熟 调剂气孔开闭 生长素 溶于 95% 乙醇溶液或 0.1molNAOH KOH 细胞分裂素 0.5 或 1molHCL 微热 赤霉素 溶于水 PH5.7 不稳固 用 95% 乙醇溶解 配比模式 生长素 / 细胞分裂素 高 有利于根形成和愈伤组织形成 适中 有利于根芽的分化 低 有利于芽的形成 一般用 mg/l 表示 生长素 0.5-1 细胞分裂素 0.5-1 MS 培育基 广泛用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培育,成效良好 B5 培育基 White 培育基 N6 培育基 小麦水稻 花药培育 KM-8P 培育基 广泛用于原 生质融合的培育 培育及挑

11、选和配制 MS 最基本 高浓度 N K NH 4 +详细参照试验 外植体 外植体选取 基因型 草本 木本 双子叶 单子叶 来源 茎尖等生长旺盛组织 幼嫩组织幼苗 消毒剂 分子式 浓度 时间 /min 排除 毒性 次氯酸钙 10% 5-30 易 次氯酸钠 20% 5-30 易 双氧水 10-12% 5-15 易 硝酸银 1% 5-30 难 氯化汞 0.1-1% 2-10 难 剧毒 抗生素 4-50mg/l 30-60 难 酒精 70-75% 0.2-2 易 外植体培育 严格无菌条件 外植体褐变 基因型,木本植物严峻（丹宁酚类物质）部位及生理状态（幼嫩组织）表面消毒损害 培育基（无机盐浓度过高,激

12、素使用不当）培育条件不合适 外植体褐变预防 外植体挑选及预处理（幼嫩组织,预培育）适合的培育条件 褐变抑制剂,吸附剂（VC 活性炭）培育条件名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 29 页精选学习资料 - - - - - - - - - 温度 25光照（暗培育,利于愈伤组织和细胞增殖）光照（器官分化需要光）通气（低氧利于体细胞胚发生,高氧利于生根）湿度（容器内是饱和的）继代培育固体培育：一般4 周继代一次液体培育：一般1-2 周继代一次培育所需环境 光强 前期 1000-4000lx 后期 10000lx 光照时间 不同的不同 光质 一般采纳日光灯 温度 25 第三章植物器官组

13、培建立在植物细胞全能性理论上,在植物组织器官水平开展讨论,实现植物细胞全能性,完成植物生命周期的过程；分为养分器官和繁衍器官培育；愈伤组织的形成启动期外界条件刺激下蛋白质核酸合成代谢加强生长素的作用细胞代谢变化：呼吸作用加强 ;多聚核糖体增加；蛋白质合成加快,酶活性加强；分裂期：细胞快速分裂无特定结构质地疏松分化期：分生组织瘤状结构及纤维组织的形成,不同组织形状颜色不同；愈伤组织分化与生长收对数期与指数期的影响；外植体到小植株形成过程 腋芽萌发 侧芽雏哨,侧芽萌发,从芽；草莓快繁 不定芽发生 芽原基及分生组织,大量不定芽,萌发成苗 体细胞胚胎发生：胚性细胞分化,形成胚状体 影响愈伤组织的主要因

14、素外植体：被子 裸子双子叶 单子叶草本 木本培育基： MS N6 NLN B5 激素组合：高浓度生长素+ 低浓度细胞分裂素利于诱导愈伤组织影响器官分化主要因素 生长素 / 兴奋素作用模式：兴奋素导致芽的分化及发育；生长素类抑制芽形成 碳源的影响蔗糖 2-3% ,NLN 13-20% 麦芽糖禾本科植物雄核发育诱导环境条件光照：叶绿素形成温度： 25 接近自然换将湿度：玻璃化现象* 玻璃化现象叶片结构,叶绿体,气孔等细胞器差异导致玻璃苗组织结构和生理功能反常名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 29 页精选学习资料 - - - - - - - - - 因此难分化、增殖、生根、移栽

15、成活 是组培中待解决的一大难题 体细胞胚胎发生 自然界植物胚胎发生：受精作用完成后始于合子的胚胎发生过程；体细胞胚胎发生,形成二倍体植株 花粉胚胎发生,形成单倍体植株 植物体细胞具有成胚才能特点两极性内部细胞分布不均发育成根端芽端基因表达产物分布不均形成的尽心梯度导致的结果遗传稳固性胚状体源于细胞或细胞团结构稳固 不会再分化脱分化个体变异小遗传稳固 次级胚状体 发生数量大 增殖率高 生理隔离 体细胞与母体组织维管束系统无直接联系 途径 直接途径 外植体 -胚状体 间接途径 外植体 -愈伤组织 -胚状体 体细胞发生诱导机制（植物体细胞胚胎发生）：已分化的体细胞经激素诱导,再经过胚性细胞化过程,形

16、成完整胚状体的过程 影响体细胞胚胎发生的因素外植体遗传背景胡萝卜柑橘易烟草难物种影响生理状态：生理年龄；幼年的易于启动植物激素：诱导蛋白质形成从而启动基因特定表达 促进 mRNA 合成,多核糖体的形成与活化细胞分裂素诱导蛋白质合成脱落酸 促进成熟激素 促进体细胞胚胎正常发育乙烯 促进成熟和衰老的激素 抑制植物体细胞胚胎发生金属离子 促进多氨合成 提高胚胎发生频率碳源及有机物 NH4+ 比 NO3-利于胚胎诱导胚培育意义组织胚挽救提高种子萌发率打破种子休眠克服株心胚干扰诱导胚状体和胚性愈伤种子生活力快速测定有讨论价值产生混倍体非整倍体胚乳培育意义被子植物 中心极核精核离体授粉：人工掌握下是离体陪

17、住完成授粉,受精形成种子的过程克服植物受精不育障碍胚珠试管受精子房离体受精雌蕊离体授粉植物器官组织叶培育植物叶培育：以离体的植物叶片器官为外植体进行培育,再生植株的过程；培育过程：愈伤组织诱导；不定芽分化；无菌苗增殖及生根名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 29 页精选学习资料 - - - - - - - - - 愈伤组织诱导：诱导接种的叶片脱分化形成愈伤组织的过程 不定芽的分化：由脱分化的愈伤组织细胞分化出不定芽和不定根的过程不定芽的增殖和生根：分化不定芽切下后接种于增值培育基中促进不定芽增殖之后产生的无根苗放于生根培育基中产生根 植物器官组织培育根段培育 以植物的根切段

18、作为外植体培育,再生完整植株的过程；过程：愈伤组织诱导不定芽分化无菌苗的增殖与生根植物器官组织培育茎尖培育 对植物的带有定芽或不定芽的外植体进行离体培育,再生完整植株的过程；快繁主要途径 易培育 变异小 性状匀称 繁衍速度快 植物器官组织培育种子培育 定义：对受精后发育不全的未成熟种子和发育完全的成熟种子进行离体培育的技 术用途：打破种子休眠缩短生活周期挽救远缘杂种提高杂种种子萌发率要求：成熟种子要求简洁未成熟种子需肯定的养分成分和生长调剂剂人工种子：通过植物组培获得具有完整结构的植物胚状体 再用适当方法包裹起来代替自然种子组成：胚状体 人工种皮 人工胚乳制备：胚状体的诱导与同步化人工种子的包

19、埋人工胚乳的制作人工种皮的制作人工种子贮藏等步骤胚状体同步化或挑选：促使全部培育的细胞或发育中的细胞团块进入同一分裂时期 只有同步化才能成批产生成熟胚胎化学方法：饥饿法 阻断法物理方法：低温处理法 过滤挑选法 渗透压分别法 密度梯度离心法包埋：材料 海藻酸钠 液胶包埋法 干燥包裹法 水凝胶法人工种子有点 解决作物繁衍才能差等问题工业化生产 提高自动化程度有养分物 提高作物产量用其播种节约成本第四章植物细胞培育技术：在细胞水平上对离体植物细胞或原生质体进行的一系列生物名师归纳总结 工艺学操作包括分别、培育、再生等一系列相关操作第 7 页,共 29 页- - - - - - -精选学习资料 - -

20、 - - - - - - - 就化合物生产来说,主要是无菌条件下通过悬浮培育植物细胞生产有用化合物的 过程 细胞培育：将植物单细胞或细胞团直接在培育基中进行培育的一种培育方式特点：操作简洁重复性好群体大 用于突变体挑选遗传转化有用化合物生产单个植物细胞在液体培育下,可发生类似受精卵发育成胚的过程,然后再生成小 植株；少数植物可以再愈伤组织上直接发育出花器官；器官发生和形状建成在试管培育 中,通过植物激素配比调控实现；兴奋素 KT 细胞分裂素 6-BA 诱导芽分化 吲哚乙酸 IAA 诱导根发生 因此可通过细胞培育讨论植物器官发生和形状建成的调控因素和发育机制 单细胞分别 机械法 机械研磨 过滤

21、低俗离心 特点 无酶损害 无需质壁分别 但不易获得大量细胞 利用细胞壁降解酶,出去植物细胞壁,猎取原生质体 酶解法 常用的降解酶 纤维素酶 果胶酶 半纤维素酶 离析酶特点：可从几乎全部植物器官猎取大量细胞酶制剂含核酸酶蛋白质酶过氧化物酶酚类物质 影响分别的原生质体活力蜗牛酶：是从蜗牛的嗦囊和消化道中制备的混合酶,含纤维素酶,果胶酶,淀粉酶,蛋白酶等20 多种酶很有价值用于酵母细胞壁破裂因此也用于细胞生物学和基因工程学讨论 由完整植物器官分别细胞 机械法 酶解法 由愈伤组织分别单细胞 悬浮细胞液过滤 离心 酶解法 单细胞培育 培育方法 平板培育法：镶嵌于 0.6-1% 琼脂培育基中 看护培育法：

22、利用生长的愈伤组织产生的物质培育单细胞 微室培育法：人工制造微室,将单细胞培育与于少量培育基内,让其分裂成细胞 团 纸桥培育法：培育物不易干燥 细胞悬浮培育：将游离的单细胞或细胞团按肯定细胞密度悬浮于液体培育基中进行培育的方法；可用于工业化生产 分批培育法：将肯定量细胞或细胞团分散在肯定量液体培育基内,建立单细胞培名师归纳总结 养物,一般用100-250 毫升密闭的三角瓶；第 8 页,共 29 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 连续培育法：利用特质培育容器进行大规模细胞培育的方式；不断注入氧气与新 鲜培育基,保持内部养分物质充分；培育基 不同物种使用

23、不同培育基 悬浮培育的震荡 愈伤组织破裂 分散 气体交换 在植物细胞培育中培 培育中加 CO2 目的：植物能非光和固定 CO2 影响植物生长养液充分混合的同时,氧气与 细胞悬浮培育的同步化CO2 达到某一平稳,植物才能很好的生长物理方法 细胞或细胞团大小掌握 环境条件掌握 化学法 使细胞遭受特定养分饥饿（饥饿法、磷酸盐胁迫）,或加入特定生化抑制 剂组织细胞完成分裂周期（DNA 合成抑制剂）细胞增殖测定 细胞鲜重 细胞干重： 60-80 烘干 36-48H 细胞密实体积： 2000-4000rpm5min 密实体积 /总体积 细胞计数：血球板计数 影响单细胞培育只要因素碳源 葡萄糖对细胞数细胞团

24、大小、干重增加最有效激素 生长素利于薄壁细胞生长 细胞分裂素利于诱导细胞分裂,细胞数增加 乙烯诱导细胞壁加厚；内源乙烯是产生旺盛分裂细胞的特点,受生长素促进 突变体挑选：从培育的植物细胞再生出来的新植株表现出高度的遗传变异,这种 现象称为“ 体细胞的无性系变异” ；可从这些变异系中挑选有益农艺性状的作物；细胞突变体的诱变与挑选：在培育基中加NACL 或加病原体的毒蛋白细胞水平上的挑选：以单个细胞为处理对象,经胚胎再生获得完整植株,得到单 细胞起源体,稳固遗传的非嵌合体；一单个细胞为对象 节约空间 高效率挑选 诱变周期短,不受季节环境限制 用生物化学方法挑选诱变体的有点：诱变数量大,诱变几率高；

25、与种子 苗木 插条比,细胞水平的重复性、稳固性好 突变体的主要应用 为细胞杂交和基因导入供应挑选记号 白化苗 用于遗传讨论和代谢讨论（拟南芥）对农作物性状进行遗传改良 有用化合物生产名师归纳总结 高产细胞系建立愈伤组织诱导,愈伤组织特定结构松脆 快速生长第 9 页,共 29 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 细胞大量培育发酵罐,生物反应器 植物中含大量此代谢产物；可用于对抗疾病,但是自然生产慢,仍收外部环境制 约；人工栽培也不满意,因此提出工业化培育以供应人类需求 药用植物此生代谢产物：药用植物体内一大类化合物,是细胞生命活动或植物生 长发育正常运行

26、的非必需小分子 人参细胞培育：提取粗皂角苷 肉苁蓉：苯乙醇甙 药用植物细胞培育技术 次生产物代谢生产中,赐予体外生长的植物细胞肯定养分条件,使其生长,并 依据植物生长条件来猎取植物次生代谢产物的技术 优点： 可在完全人工掌握下进行,一年四季均可生产 通过转变培育条件增加植物产量 在无菌条件下进行,因此可排除病菌及虫害对药用植物的侵扰 第五章 原生质体的分别、培育和细胞杂交 植物原生质体：脱去细胞壁暴露的、有生活力的原生质团 特点：每个原生质体均含完整遗传信息,具有全能性遗传上同质性 克服性细胞不亲核障碍,进行远缘体细胞杂交 遗传转化抱负受体 原生质体培育：用酶消化细胞壁分别出原生质体,放入液体

27、或固体培育基内,再 生出细胞壁,并进行细胞分裂,生成愈伤组织,最终生成完整植株；原生质体分别 植物细胞壁组成 纤维素（ 25-50% ）半纤维素（ 53% ）果胶质（ 5% ）少量蛋白质 纤维素酶和果胶酶是分别植物原生质体必要的酶；崩溃酶是一种综合酶,包括纤维素酶、果胶酶、地衣多糖酶、木聚糖酶的活性（同时具有）酶最适 PH5-6 温度 40-50 考虑细胞承担力 一般 25-30 须采纳膜过滤 0.22 微米 不行高压高温灭菌 酶解条件 一般几小时,不超过一天 黑暗中,静止 / 轻摇叶片下表皮撕去 负压名师归纳总结 原生质体供应原生质体分别：双子叶 单子叶可获得大量原生质体第 10 页,共 2

28、9 页双子叶植物原生质体分别叶片为主 酶处理简洁- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 禾本植物从胚性愈伤组织 / 悬浮细胞原生质体火力强可以连续分裂保持较强器官分化才能组织学特点：细胞体积小近圆形 细胞质深厚液泡不发达草本 木本 幼嫩 成熟 猎取原生质体材料自然材料：田间植物盆栽植物试管无菌苗培育材料：愈伤组织悬浮培育细胞留意挑选具有形状分化潜力的细胞 易于得到大量原生质体 原生质体稳固性好,不易破裂 原生质体可连续分裂 基因型的差异 制备原生质体的起始材料的特性和状态 外植体来源的愈伤组织和悬浮液培育物,是植物原生质体讨论中最广泛使用的原生 质体来源的材

29、料；原生质分别 片表面消毒 去除表皮 漂浮在含有酶和渗透压稳固剂的溶液中 负压条件,原生质体沉到溶液底部 出去酶溶液 将原生质体移入清洗液,离心、清洗两次 重悬浮于养基 血球计计数、以合适密度重悬浮于培育基 原生质体培育：经分别纯化的原生质体在适当培育基和培育条件下,很快开头细胞壁再生和细胞分裂（2-7 天）,进一段时间（2-3 周）,再培育基上出演肉眼可见的愈伤组织,转移到分化培育基上,诱导芽和根,再生植株 原生质体活性试验 胞质环流作为代谢活跃指标 呼吸强度指标、光合活性指标 Evans 指标 FDA荧光素双醋酸酯 培育基 KM8P 原生质体分别后特别脆弱,需渗透压爱护剂知道生成细胞壁 针

30、对不同讨论对象,培育基中生长素和细胞分裂素水平做适当调整 培育方法名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页,共 29 页精选学习资料 - - - - - - - - - 液体基质培育法 半液体基质培育法 固体基质培育法 原生质体分别培育的意义可摄入外援DNA 细胞器 细菌病毒颗粒这些特性与植物细胞全能性结合为高等植物遗传饰变打下基础 获得无性系和选育突变体的优良起始材料 体细胞杂交：体细胞完全不经过有性过程,只通过体细胞融合制造杂种的方法 原生质体融合方法 自发融合 不同细胞间胞间连丝的扩展和粘连 诱发融合（ NANO3 处理,高 PH-高浓度 CA 离子处理, PEG处理,电融合

31、）PEG融合：将两种不同原生质体以肯定比例混合,用 之后将原生质体用培育基逐步清洗即可培育28-58% 溶液处理 15-30min ,机理（不确定）：PEG分子有负极性,可与正极性的蛋白质,碳水化合物等形成氢键；当 PEG分子量足够大时,在相邻原生质体表面可起到分子桥的作用,发生粘连有点：双核异核体形成频率高重复性好毒性低无特异性电融合：将两种原生质体混合,在交变电流下,使原生质体沿电场方向排列形成串珠状,给以瞬时高强度电脉冲,是原生质体膜局部破旧从而融合特点：融合快速,同步性好,大量融合,融合体含 贵2-3 个原生质体,无毒,仪器昂融合产物额培育：与原生质体培育相像；通常无法挑选时,培育出植

32、株再挑选 杂种细胞的挑选系统 细胞系互补挑选方法：叶绿素缺失互补,养分缺陷互补,抗性互补；每个亲本细胞 奉献一个等位基因,订正对方缺陷,是下一代更优良 物理特异性挑选：大小、颜色、漂浮密度 依据生长特性差异：植株再生性,杂种优良生长 体细胞杂种的鉴定：利用杂种植物与双亲表型差异分析；抗性性状指标 经典细胞学鉴定法 通过对染色体数目、形状等细胞学观看来鉴定 分子细胞学鉴定法用 NDA 探针与染色体上 利用其特点进行检测 同工酶鉴定法DNA 杂交,在染色体上直接进行检测的分子标记技术功能相同酶的多重分子形状,是特意基因产物；体细胞杂种内酶往往是双亲酶的总 和,同时表现双方特有酶带,同时表现新生杂种

33、带名师归纳总结 - - - - - - -第 12 页,共 29 页精选学习资料 - - - - - - - - - 体细胞杂种的核型 体细胞杂种染色体倍性水平变异可能由于原生质体自发融合,或由供体细胞的细 胞学状态造成的；培育细胞比原本细胞更易变异 分子生物学鉴定法遗传特性RFLP RAPD AFLP SSR SNP 共显性显性显性 / 共显显性显性 / 共显多态性低中等性高性高低检测基础分子杂交随机 RCP 转移 PCR 专一 PCR 专一 PCR 检测基因组单/ 低拷贝整个基因组整个基因组重复序列区整个基因组部位技术难度难易易易易DNA 含量高低低低低DNA 用量5-10ug 50ng

34、50ng 50ng 暗培育）,外植体生理状态（活跃生长茎尖培育在育种中的应用 :由于茎尖遗传稳固,茎尖培育技术成熟,多用于常规方法 繁衍有困难的物种,杂合性以及有性不亲和基因与不育基因型的繁衍,新杂交种快 繁,繁衍大批遗传性状一样的亲本供大规模杂交制种；茎尖组织中的突变体挑选、多倍体、混倍体突变；物理射线处理,诱发突变体 优点：培育方法简洁,繁衍快速,茎尖遗传性状稳固,易保持植株优良性状 步骤：无菌培育的建立芽的诱导生根培育试管苗的移栽（遗传变种）茎尖组织培育的方法 材料：带叶原基的茎尖 易于培育 成苗快 时间短 无病毒植株获得,理论上茎尖越小 越好, 0.1mm 以下不带病毒；实际用时,切取

35、 0.1-1mm 茎尖 材料的消毒：表面消毒,无菌苗的使用名师归纳总结 - - - - - - -第 14 页,共 29 页精选学习资料 - - - - - - - - - 茎尖组织的分别：解剖镜；茎尖越小,脱毒成效越好,越难分别 培育基： MS 培育基较适合,加适当细胞分裂素和生长素 培育条件： 25,光照利于茎尖培育 无病毒植株的生产：种子快繁植株,由于种子不带病毒,随植物世代交替除去病毒；马铃薯 大蒜 草莓 葡萄 兰花等生长受病毒影响大 园艺作物连坐障碍严峻,加重土传病毒危害,杀菌剂、抗生素无效 热处理病毒：特定病毒人不稳固性,使病毒钝化,失活（播种前烫种）茎尖培育脱毒：茎尖分生组织尚未

36、感染病毒 重要情愿花卉采纳此方法得到大量无毒苗；去除病毒后,植株生长势强,花朵变大,色泽明艳,抗逆性强产花数量上升,养分繁衍：茎尖组织培育可在严格掌握和调解相宜的养分、激素、温度、光照等条 件,使很多常规条件下难生长的和繁衍的植物材料顺当扩繁（兰花工业）植物离体繁衍技术：果树离体繁衍技术 蔬菜离体繁衍技术 观看植物离体繁衍技术 药材植物离体繁衍技术体细胞无性系的变异：变异来源 组织细胞培育中发生的：发生频率与培育时间成正比 起始外植体预先存在变异的：嵌合体发生 染色体数目变异 染色体结构变异 雄核发育诱导植株中的倍性变异：多数为正常的二倍体和单倍体；也有多倍体,混 倍体和各种非整倍体植株 体细

37、胞无性系变异应用：生化代谢途径的讨论 体细胞杂交的挑选标志（硝酸仍原酶缺陷突变体,不能有效利用硝酸盐；两个突变 体的互补作用,产生的体细胞杂种复原了硝酸仍原酶活性）作物遗传改良： 雄性不育突变体 抗氨基酸及氨基酸类似物突变体 耐盐突变体（大部分生理适应） 抗除草剂突变体 抗病突变体（利用病原分泌的毒素做培育基）种质离体储存：种质资源是遗传育种物质基础；种质储存是资源讨论的基础；利用自然或人工制造相宜环境储存种质资源,使个体所含有的遗传物质储存遗传完整性,有高活力,能通过繁衍将遗传特性传递下去；植物种质资源离体储存是采纳组织培育技术,储存已建立再生体系的植物细胞组织 培育物,如单细胞、原生质体、

38、愈伤组织、花粉、分生组织、愈伤苗等名师归纳总结 - - - - - - -第 15 页,共 29 页精选学习资料 - - - - - - - - - 超低温储存：低于-80 低温,主要指液氮（-196 ）及液氮蒸汽条件超低温储存特点：活物质的代谢及生长完全停止 保持生物材料遗传完整性 保持生物材料形状发生潜能,细胞形状发生才能 防止积存性突变的发生 储存不稳固性培育物,如单细胞 去病毒种质的储存,防种质衰老 延长花粉寿命,解决杂交困难 抗旱新材料的突变挑选 便于种质交换；基本建设投资较小 超低温储存原理：降温冷冻和化冻过程易引起植物损害；细胞内结冰（冰晶刺破细胞膜）细胞内溶质的浓缩（细胞脱水）防冻剂的使用：二甲基亚砜 聚乙二醇 甘油 提高溶液粘滞性,降低冰晶形成和增长速度 增加细胞膜透性,防止细胞内结冰 削减组织内溶质浓度的上升 超低温储存的方法 :材料预备预处理（低温锤炼）加入冷冻爱护剂冷冻种植储存（-