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1、限制性核酸内切酶第1页，共13页，编辑于2022年，星期三第2页，共13页，编辑于2022年，星期三剪切剪切拼接拼接导入导入表达表达（一）获得目的基因（一）获得目的基因（二）形成重组（二）形成重组DNA分子分子（三）将重组（三）将重组DNA分子导入受体细胞分子导入受体细胞（四）目的基因的检测和表达（四）目的基因的检测和表达第第2 2节节 基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术1 1、筛选含有目的基因的受体细胞、筛选含有目的基因的受体细胞2 2、目的基因的表达、目的基因的表达第3页，共13页，编辑于2022年，星期三步骤一步骤一 获得目的基因获得目的基因人工合成人工合成u利用利用PCRPCR技
2、术扩增技术扩增已知序列：已知序列：从基因文库获得从基因文库获得未知序列：未知序列：(DNA library)(DNA library)聚合酶链式反应聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)(Polymerase Chain Reaction)第4页，共13页，编辑于2022年，星期三氢键断裂，形成单链氢键断裂，形成单链DNADNA。引物与引物与DNADNA模板结合，形模板结合，形成局部双链。成局部双链。在酶的作用下，不断延伸，在酶的作用下，不断延伸，合成双链合成双链DNADNA。多次循环，获得大量双多次循环，获得大量双链链DNADNA分子。分子。uP PC CR R
3、技技术术扩扩增增第5页，共13页，编辑于2022年，星期三鸟枪法：散弹射击法供体细胞DNA限制酶许多DNA片段载入运载体导入受体细胞扩增产生特定性状分离目的基因从基因文库获得第6页，共13页，编辑于2022年，星期三目的基因的mRNA逆转录单链DNA合成双链DNA（目的基因）蛋白质氨基酸序列推测mRNA的核苷酸序列推测结构基因的核苷酸序列化学合成目的基因人工合成法人工合成法逆转录法根据已知氨基酸序列直接合成DNA第7页，共13页，编辑于2022年，星期三步步骤骤二二 形形成成重重组组D DN NA A分分子子第8页，共13页，编辑于2022年，星期三步步骤骤三三 将将重重组组D DN NA A
4、分分子子导导入入受受体体细细胞胞第9页，共13页，编辑于2022年，星期三1.1.基因工程中常用的受体细胞有哪些？基因工程中常用的受体细胞有哪些？2.2.导入过程如何？导入过程如何？大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞和动植物细胞借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径受体细胞：细菌CaCl2细胞壁的通透性增大重组质粒进入受体细胞目的基因随受体细胞的繁殖而复制第10页，共13页，编辑于2022年，星期三步骤四步骤四 目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达1 1、筛选含有目的基因的受体细胞、筛选含有目的基因的受体细胞2 2、目
5、的基因的表达、目的基因的表达通过检测标记基因的有无，来判断目的基因是否导入受体细胞。目的基因导入受体细胞后，受体细胞必须表现特定的性状。第11页，共13页，编辑于2022年，星期三练习练习2 2 2 2有关基因工程的叙述正确的是有关基因工程的叙述正确的是 ()()()()A.A.A.A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用限制性内切酶只在获得目的基因时才用限制性内切酶只在获得目的基因时才用限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B.B.B.B.重组质粒的形成在细胞内完成重组质粒的形成在细胞内完成 C.C.C.C.质粒都可以作为运载体质粒都可以作为运载体 D.D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D1.1.有关基因工程的叙述中，错误的是有关基因工程的叙述中，错误的是 （）A A、DNADNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B B、限制性核酸内切酶用于目的基因的获得、限制性核酸内切酶用于目的基因的获得 C C、目的基因须由载体导入受体细胞、目的基因须由载体导入受体细胞 D D、人工合成目的基因不用限制性内切酶、人工合成目的基因不用限制性内切酶A第12页，共13页，编辑于2022年，星期三第13页，共13页，编辑于2022年，星期三