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1、开题报告告：辅酶Q110抗脂脂质过氧氧化作用用对SHHR大鼠鼠高血压压的防治治研究02级法法文班徐呈 兰兰晓曦 庞文璟璟 解轶轶声 林林盟菲 孟晋 方原 吴贻明明指导老师师：李稻稻实验目的的：探究、比比较单用用辅酶QQ10以以及辅酶酶Q100与拉贝贝洛尔协协同作用用对SHHR大鼠鼠的血压压升高的的抑制或或降压的的作用，并并对辅酶酶Q100的降压压作用机机制进行行初步探探讨。实验意义义：高血压是是一种常常见、多多发病，原原发性高高血压的的病因不不详，但但与遗传传因素和和环境因因素密切切相关，所所以对高高血压高高危人群群的防治治工作尤尤为重要要。新近近发现脂脂质过氧氧化反应应可能参参与了高高血压发
2、发生和发发展的病病理过程程9。但也也有报道道认为，辅辅酶Q110具有有较好的的抗脂质质过氧化化的作用用8。本实实验利用用血压未未达平台台期的SSHR大大鼠模拟拟高血压压高危人人群，并并初步研研究辅酶酶Q100以及辅辅酶Q110与拉拉贝洛尔尔协同作作用对高高血压防防治的效效果，探探索临床床用药的的新途径径。技术路线线：SHR大鼠测血压、心率取血，冷冻保存配对分组实验组大鼠：CoQ10对照组大鼠：生理盐水15天后肌肉注射拉贝洛尔，测血压、心率处死动物，取血，测指标，心脏称重数据分析、讨论结果实验动物物：大大鼠（雄雄性，110周龄龄，只，随随机分为为：对照照组和实实验组）动物来源源：中国国科学院院动
3、物实实验中心心实验器材材：1B型RRBP大大鼠血压压计、ii-STTAT型型血气电电解质分分析仪、7725型型分光光光度计、880-22台式离离心机、旋旋涡混匀匀器、水水浴箱、研研磨器、分分析天平平（0.1mgg）、可可调式EEppeendoorf移移液器、鼠鼠台、量量筒、试试管、注注射器、常常用手术术器材、保保鲜薄膜膜等。检测试剂剂盒：丙二醛（MMDA）测测定试剂剂盒 （南南京建成成生物工工程研究究所）超氧化物物歧化酶酶（SOOD）测测试盒 （南京京建成生生物工程程研究所所）一氧化氮氮（NOO）测试试盒 （南京京建成生生物工程程研究所所）实验药品品：生理盐水水：作为为安慰剂剂，上海海第二医医
4、科大学学病生教教研室提提供辅酶Q110胶囊囊：上海海信谊制制药公司司拉贝洛尔尔：江苏苏天禾制制药公司司无水乙醇醇、冰醋醋酸用量：辅辅酶Q110：220mgg/daay服服用155天。拉贝洛尔尔：小剂剂量 具体用用量在预预实验后后确定。实验方法法与操作作步骤： 12只大大鼠稳定定两天，每每天测一一次血压压（1BB型RBBP大鼠鼠血压计计），使使大鼠习习惯。根根据大鼠鼠血压配配对后随随机分成成两组。（随随机数法法） 两天后，眼眼球取血血1.55l于于试管。静静置后离离心（330000rpmm10mmin）取取上层血血清，再再一次离离心（550000rpmm5miin）取上清清液，-20CC冷冻待待
5、用。 实验组大大鼠灌胃胃辅酶QQ10（220mgg/daay）115天，对对照组大大鼠灌胃胃安慰剂剂（生理理盐水）115天。灌灌胃溶液液自行于于灌胃当当天调配配，灌胃胃液为220mgg/3mml生理理盐水。 每隔5天天测量并并记录血血压、心心率。 第15天天，测完完血压、心心率后，肌肉注射拉贝洛尔（剂量待定），于30min后测量并记录血压和心率。 乙醚麻醉醉动物，处处死动物物，称重重。用大大剪刀开开胸，即即刻用注注射器从从心脏抽抽血，将将针头对对准电极极板注血血口，注注入全血血到标准准刻度，盖盖上小盖盖，插入入i-SSTATT血液分分析仪器器，分析析并记录录血液中中钾离子子。最后后再取血血1.
6、55ml于于试管中中，血液液静置后后离心取取上层血血清，将将15天天前冰冻冻的血清清取出，化化冻，两两份血清清一起做做丙二醛醛、SOOD、NNO检测测（方法法详见试试剂盒说说明书）并并记录结结果。 取出心脏脏，清理理、称重重，计算算：心重重（g）/体重（gg）。 运用配对对T检验验的方法法，对数数据进行行统计学学分析。预期结果果：1服药药15天天后， 对照组组和实验验组大鼠鼠平均血血压有明明显差异异，说明明辅酶QQ10对对SHRR大鼠有有降压作作用，推推迟其血血压达平平台期的的时间（统统计学上上有意义义）。Control Group Study GroupBP服用药物15天后，实验组对照组大鼠
7、平均血压、心率比较（n=6)HRControl Group Study Group2拉贝贝洛尔+辅酶QQ用药时时，可降降低拉贝贝洛尔的的剂量，达达到降压压效果，或或延长药药效维持持时间。Study GroupBP15天后，肌注拉贝洛尔后，实验组对照组大鼠平均血压变化(n=6)0Control Group 3血清清中MDDA浓度度：服用用辅酶QQ10后后明显下下降；SSOD浓浓度：服服用辅酶酶Q100后不变变；NOO浓度：服用辅辅酶Q110后明明显升高高。证明明辅酶QQ10的的降压机机制为抗抗脂质过过氧化。Study GroupStudy GroupStudy GroupStudy GroupC
8、ontrol Group Control Group Control Group Control Group SODCMDANOK+DBA实验组对照组大鼠血清生化指标(n=6) 辅酶Q10实验组与对照组心重/体重值比较（XSD） Heart Weight（g) Body Weight(kg) Heart Weight（g)/Body Weight(kg)Study GroupControl Group4.实验验组和对对照组由由于血压压不同而而使心脏脏负荷不不同，导导致心肌肌增生程程度不同同，表现现为心重重不同。可能遇到到的困难难和问题题及解决决的措施施1经费有有限，无无法做大大样本量量的药效效
9、试验，为为使实验验结果有有统计学学意义，我我们将动动物数量量控制为为12只只，并进进行配对对，尽最最大可能能使结果果有说服服力。2小组成成员对实实验操作作经验不不足，对对于大鼠鼠灌胃、测测血压等等操作比比较陌生生。但在在动物房房老师的的耐心指指导帮助助下，将将会顺利利完成实实验计划划，并对对动物实实验的基基本技术术有感性性认识。附录：辅酶Q110的国国内外研研究现状状辅酶Q (CooQ)，22,3-二甲氧氧-5-甲基-6-多多异戊二二烯-苯苯醌 (2,33-diimetthoxxy-55-meethyyl -6-mmulttiprrenyyl-bbenzzoquuinoone)。CooQ不但但
10、存在于于线粒体体，还存存在于浆浆膜和微微粒体、溶溶酶体、高高尔基体体中。CCoQ在在细胞的的生命过过程中具具有多方方面的功功能，在在细胞中中大都以以还原型型存在。辅酶Q有有许多亚亚型，人人体中的的存在的的亚型称称为辅酶酶Q100，（22,3-二甲氧氧-5-甲基-6-癸癸异戊烯烯-1,4-苯苯醌），存存在于日日常饮食食中，并并可在人人体组织织细胞中中生物合合成，是是一种氧氧化还原原酶，在在电子转转移和氧氧化磷酸酸化藕联联机制中中起作用用。辅酶酶Q100浓度的的高低，在在呼吸链链和ATTP合成成中起了了关键作作用11。上世纪770年代代，在日日本人就就已经发发现了辅辅酶Q110对于于高血压压有一定
11、定的治疗疗意义。YYamaagammi等人人2研究了了辅酶QQ10对对于经去去氧皮质质酮（ddeoxxycoortiicossterronee）或盐盐水溶液液(saalinne)诱诱导的继继发性高高血压大大鼠的作作用，发发现经过过六周的的给药后后，其对对于两者者收缩压压均有一一定的降降低作用用；但是是，不论论是对照照组、灌灌注辅酶酶Q100组还是是正常组组的外周周血管阻阻力均无无显著差差异。此此后，各各国科学学家都开开始关注注于辅酶酶Q100的降压压作用。Folkers K3通过研究高血压病人服用辅酶Q10后的各项指标变化，提出辅酶Q10降低血压的机制是由于外周阻力的自我调节（autoregu
12、lation），并且认为辅酶Q10本身并无药理活性，而是在转录水平上增长辅酶Q10酶。Danysz A.等人4的实验（先给SHR大鼠喂养一定时间的辅酶Q10再注射普通剂量的尼群地平/氨氯地平，分析血压变化）则揭示了辅酶Q10不会增大最大降压幅度，但是能够延长药物对血压控制的时间（延长两倍），因此提出辅酶Q10的使用可以降低其他降压药的使用频率。而Rosenfeldt F.5也提出将辅酶Q10作为一种治疗高血压的辅助药。在我国，关关于辅酶酶Q100的研究究还比较较少，但但是也已已经有人人6得出了了贝那普普利（血血管紧张张素转换换酶抑制制剂）联联用辅酶酶Q100治疗原原发性高高血压比比单用贝贝那普
13、利利效果好好的结论论。另外，纵纵观其他他的文献献，还能能得出以以下结论论：Q100对正常常大鼠没没有降压压作用。在不同的高血压动物模型中，口服辅酶Q10对抑制血压升高或降低血压有效，但即便服用Q10，血压仍比同类正常动物高20到30mmHg。Q10的降压作用表现在长期反复服药之后，在急性实验中即使用量高达100mg/kg单剂量服用后也无效果。SHR大鼠模型中，服用（10mg/kg）Q10对收缩压180mmHg的大鼠无降压作用，但对血压更高的大鼠有明显作用。300mg辅酶Q10的摄入量对人体无毒性作用。此外，CCoQ110有抗抗脂质过过氧化的的作用，能能对细胞胞产生保保护作用用7。其可可能的机机
14、制为8：（1）CCoQHH2与ADDP-pperfferrryl ionn 作用用 ADDP-FFe3+O2-+ CCoQHH2 ADDP-FFe2+ + H2O2 + CoQQ (2 ) CCoQHH2直接清清除O2-2 O22-+ CooQH22 H2O2 + OO2 + CCoQ (3 ) CCoQHH2脂自由由基或脂脂过氧基基反应 2LL+ CooQH22 2LLH + CooQ 2LLOO+ CooQH22 2LLOOHH + CoQQ氧自由基基能攻击击生物膜膜磷脂中中的多不不饱和脂脂肪酸(PUFFA)引引发脂质质过氧化化作用，并并形成脂脂质过氧氧化物（LLPO），继继而分解解成一系
15、系列复杂杂产物，其其中包括括丙二醛醛(MDDA)。脂脂质过氧氧化作用用及其产产物能够够对细胞胞产生损损害。而而超氧化化物歧化化酶（SSOD）是是清除自自由基的的酶。研研究表明明9，氧自自由基损损害内皮皮细胞后后，会导导致内皮皮细胞功功能受损损，表现现为血管管舒张因因子（一一氧化氮氮）分泌泌的减少少。也有有证据表表明超氧氧阴离子子使NOO失活有有关，既既氧化作作用加强强导致NNO损伤伤，氧自自由基是是NO损损伤的诱诱导剂，超超氧阴离离子及氧氧化型LLDL使使内源性性舒张因因子NOO失活，而而使内皮皮细胞受受损110。以以上两者者相互作作用，使使NO含含量减少少，收缩缩因子-舒张因因子的平平衡被打
16、打破，血血管在收收缩因子子的作用用下发生生收缩，使使外周阻阻力升高高，诱发发高血压压9。辅酶酶Q100作为一一种抗氧氧化剂，能能够对内内皮细胞胞进行保保护，其其降低血血压的机机制可能能就与此此有关。本本实验目目的即是是想就此此进行探探讨。参考文献献：1EErnssterr L.Faccts andd iddeass abboutt thhe ffuncctioon oof ccoennzymme QQ10 in mittochhonddriaa. IIn:FFilkkerss K,Yammamuura Y,eeds.Bioomeddicaal aand Cliiniccal Asppectts
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