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1、实验六细菌的生理生化实验第1页，共13页，编辑于2022年，星期五微生物的生理生化反应v微生物细胞在酶的催化下进行各种各样的生理生化反微生物细胞在酶的催化下进行各种各样的生理生化反应应v把微生物细胞在一定的条件下培养，通过观察生理现象把微生物细胞在一定的条件下培养，通过观察生理现象和检查代谢产物，可以了解微生物的代谢过程和代谢的和检查代谢产物，可以了解微生物的代谢过程和代谢的特点特点v由于不同的微生物可能具有不同的酶，代谢途径和代由于不同的微生物可能具有不同的酶，代谢途径和代谢产物可能也有不同，生理生化反应是微生物分类鉴谢产物可能也有不同，生理生化反应是微生物分类鉴定的重要指标之一。定的重要指
2、标之一。第2页，共13页，编辑于2022年，星期五淀粉水解实验淀粉水解实验淀粉培养基+淀粉培养基+接种+变色圈，水解圈培养培养24h加卢哥氏碘液I-KI第3页，共13页，编辑于2022年，星期五v结果：结果：v 有水解圈有水解圈淀粉水解实验阳性，用淀粉水解实验阳性，用+表示；表示；v 无水解圈无水解圈淀粉水解实验阴性，用淀粉水解实验阴性，用-表示；表示；第4页，共13页，编辑于2022年，星期五糖发酵实验v原理：原理：v丙酮酸裂解生成乙酰丙酮酸裂解生成乙酰CoA与甲酸，甲酸在酸性条件下在甲与甲酸，甲酸在酸性条件下在甲酸氢解酶作用下可进一步裂解生成酸氢解酶作用下可进一步裂解生成H2和和CO2产酸
3、产气产酸产气v缺少甲酸氢解酶缺少甲酸氢解酶产酸不产气产酸不产气v步骤：配制糖发酵培养基步骤：配制糖发酵培养基接种接种培养（约培养（约24h)观观察结果察结果v结果：结果：v紫色无气泡，既不产酸也不产气用紫色无气泡，既不产酸也不产气用-表示；表示；v黄色无气泡，产酸不产气，用黄色无气泡，产酸不产气，用+表示；表示；v黄色且有气泡，产酸产气，用黄色且有气泡，产酸产气，用 0 表示。表示。第5页，共13页，编辑于2022年，星期五甲基红实验（甲基红实验（M.R实验）实验）v原理原理v微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸pH下降下降加入指示加入指示剂甲基红剂甲基红红
4、色红色v步骤：配制蛋白胨水培养基步骤：配制蛋白胨水培养基接种接种培养（约培养（约24h)加加入指示剂甲基红入指示剂甲基红12滴滴观察结果观察结果v结果：结果：v 红色红色M.R实验阳性，用实验阳性，用+表示；表示；v 不变色不变色M.R实验阴性，用实验阴性，用-表示；表示；第6页，共13页，编辑于2022年，星期五V.P实验第7页，共13页，编辑于2022年，星期五V.PV.P实验实验v步骤：配制蛋白胨水培养基步骤：配制蛋白胨水培养基接种接种培养（约培养（约24h)510d 40%KOH,510d 5%a-奈酚和少量肌奈酚和少量肌 醇醇 ，取出塞子，用力震荡，保温（，取出塞子，用力震荡，保温（
5、37度度1530min）观察结果观察结果v结果：结果：v 红色红色V.PV.P实验阳性，用实验阳性，用 +表示；表示；v 不变色不变色V.PV.P实验阴性，用实验阴性，用 -表示。表示。第8页，共13页，编辑于2022年，星期五实验内容实验内容v以组为单位进行淀粉水解实验、以组为单位进行淀粉水解实验、糖发酵实验、糖发酵实验、V.PV.P实验和实验和M.R实验。实验。v实验菌种：实验菌种：v淀粉水解实验、糖发酵实验：大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌淀粉水解实验、糖发酵实验：大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌vV.P实验和实验和M.R实验：大肠杆菌、产气杆菌实验：大肠杆菌、产气杆菌v注意事项：注意事项：v实验报告：
6、实验报告：v1、列表记录实验结果、列表记录实验结果v2、思考题：第、思考题：第4小题小题第9页，共13页，编辑于2022年，星期五四大类细胞型微生物菌落的鉴定四大类细胞型微生物菌落的鉴定v初步鉴定初步鉴定v确证：显微镜观察确证：显微镜观察第10页，共13页，编辑于2022年，星期五微生物菌落特征的记录和描述微生物菌落特征的记录和描述v菌落形态：形状，边缘情况菌落形态：形状，边缘情况v大小：大小：v表表面面状状况况：湿湿润润、粘粘稠稠或或干干燥燥，隆隆起起或或扁扁平平，厚厚或或薄薄，是否粉末状是否粉末状v质地：致密或疏松质地：致密或疏松v蔓延程度：蔓延程度：v与培养基结合程度与培养基结合程度v颜
7、色（正面、反面、边沿、中心）颜色（正面、反面、边沿、中心）v气味气味第11页，共13页，编辑于2022年，星期五示例 将菌株在查氏琼脂平板上将菌株在查氏琼脂平板上25 25 培培养养7d 7d 后菌落直径后菌落直径181819mm 19mm，圆圆形，边缘齐整不蔓延，表面丝绒形，边缘齐整不蔓延，表面丝绒状并具放射状沟纹，较厚，中央状并具放射状沟纹，较厚，中央稍凸起，菌丝初为浅黄褐色近稍凸起，菌丝初为浅黄褐色近于淡粉红色，老后颜色变深，有于淡粉红色，老后颜色变深，有黄色渗出液，背面呈黄褐色。黄色渗出液，背面呈黄褐色。第12页，共13页，编辑于2022年，星期五第13页，共13页，编辑于2022年，星期五