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1、促进成骨细胞增殖的中成药 摘要目的：探讨血管惊慌素（angiotensin，Ang）对创面愈合中成纤维细胞增殖的影响及不同浓度Ang对创面作用的差异。方法：采纳不同浓度Ang作用于小鼠簇新创面，应用流式细胞仪检测相同面积创面中S（DNA合成期）期成纤维细胞所占的比例。结果：与比照组相比，Ang可有效促进创面中成纤维细胞的增殖，从而促进创面肉芽组织生长，使创面愈合加快。结论：Ang可促使局部创面成纤维细胞增殖，从而加快创面愈合,且呈浓度依靠性。 关键词成纤维细胞；血管惊慌素；创面愈合 中图分类号R619 文献标识码A 文章编号1008-6455（2011）04-0602-03 Effects o
2、f angiotensin on proliferation of fibroblast in wound healing HAN Xi-li,LI Hong-guang,ZHANG Bao-lin (The First Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,Shanxi,China ) Abstract:Objective To study the effects of angiotensin（Ang）on accelerating proliferation of fibroblast in wound healing a
3、nd the difference of Ang of different concentrations in different wounds. Methods Ang of different magnitude concentrations effect on the fresh wounds of mice, then the flow cytometry detects the proportion of S（ DNA synthesis）phase fibroblasts of wounds in the same area.ResultsCompared with the con
4、trol group, Ang can effectively promote the proliferation of fibroblasts in wound healing, thus contribute to the growth of granulation, so that the wounds heal much faster. Conclusion Ang can promote the fibroblasts proliferation, thus speeding up the rate of wound healing,and the wounds healed wit
5、h Ang dose-dependently. Key words:fibroblasts; angiotensin ; wound healing 创伤修复过程由细胞、细胞因子、细胞外基质等共同参加完成，并在机体调控下呈现高度有序性、完整性和网络性。创伤愈合的主要病理表现为瘢痕修复，而瘢痕的主要成分是增殖的成纤维细胞和细胞外基质的积聚，其机制尚未完全阐明。目前探讨证明，细胞因子在创伤愈合中起着重要作用。Ang是肾素一血管惊慌素系统(rennin-angiotensin system，RAS)主要的生物活性肽。多年来，人们都习惯认为Ang只是一种血管活性物质。然而，近年来已有越来越多的探讨显示
6、Ang 还是一种多效应生长因子影响细胞的增殖、分化和凋亡，并在组织损伤修复和纤维化中起重要作用1。因此，我们推想Ang可作用于局部创面而促进创面的愈合。通过视察在创伤愈合过程中高剂量组、中剂量组、低剂量组以及比照组皮肤全层缺损致伤模型伤口愈合的状况，利用荧光染料碘化吡啶（propidium iodide，PI）作为DNA的鉴定标记物，应用流式细胞仪检测合成器细胞所占比例，探讨不同浓度的Ang对创伤愈合过程中成纤维细胞增殖的影响，为Ang作为一种促进创面的愈合药应用于临床供应理论依据。 1材料和方法 1.1 试验用动物：SD雄性大鼠10只，体重175200g，由山西医科高校生理教研室动物中心供应
7、。 1.2 试验材料及主要仪器：血管惊慌素、碘化吡啶（PI）、胰蛋白酶、脱氧核糖核酸酶（Ribonuclease，RNase）： 美国Sigma公司；磷酸缓冲盐溶液（Phosphate buffer solution，PBS）：北京中山生物公司；流式细胞仪；一般光学显微镜；低温离心机。 1.3动物全层皮肤缺损模型制备：全部试验鼠单笼喂养，自由饮水与摄食。试验当日禁食，麻醉后背部净毛；碘伏消毒，在脊柱两侧各旁1.0cm处以专用打孔器致伤，4个圆形创面，每个创面直径1.5cm，深至皮下。 1.4 动物分组与给药：将10只SD大鼠共40个创面，每只四个创面随机应用：NS阴性比照组；110-9mol/
8、ml Ang（低剂量）组；110-8mol/ml Ang（中剂量）组；110-7 mol/ml Ang（高剂量）组。每个创面按分组分别滴加相应浓度物质0.2ml，粘性媒介羧甲基纤维素、无菌纱布包扎，此后换药1次/日，直至伤后第5天的取样分析。 1.5 全层皮肤组织细胞周期及DNA含量分析：伤后第5天于每个创面边缘（创面与正常组织交界处）取1.0cm1.0cm大小皮肤组织，去除皮下脂肪，剪碎，经筛网过滤、胰蛋白酶消化，加入PBS缓冲液，制成单细胞悬液。酒精固定,4下过夜，光学显微镜下将细胞浓度稀释到约106个/ml。加入RNase在37温箱30min，避光加入DNA特异性染料PI于04下避光染色
9、1h，经流式细胞仪测每个样品中S期细胞所占比例。 1.6 统计学分析：采纳SPSS13.0统计软件进行分析，全部数据用xs表示, P Ang是RAS中最重要的效应肽，被认为是一个应激激素，在维持血压和水电解质平衡中起重要作用。近年来探讨发觉局部组织中存在Ang，它在组织损伤修复及纤维化中发挥重要作用5-7。Ang1型受体(Angiotensintype 1 respector,AT1R)组织分布广泛，且在整个生命期均有表达，在靶器官，AT1调整Ang的绝大部分作用，如细胞生长、细胞外基质沉积等。2型受体(Angiotensintype 2 respector, AT2R)在胚胎期广泛表达，诞生
10、后快速下降，维持在一个很低的水平，在某些病理状况下(如血管损伤、皮肤损伤等) AT2R的表达明显上升。最近国外学者报道了独立于血浆源性的Ang系统，即皮肤组织存在Ang及其受体，皮肤的角质形成细胞能够合成Ang1。国内最近也报道了人皮肤角质形成细胞表达血管惊慌素转化酶(Angiotensin-con verting enzyme，ACE)，在增生性瘢痕中ACE的表达强度和Ang产生明显增加8，提示Ang可能在创伤愈合过程中发挥作用，然而Ang局部应用促进创面愈合中成纤维细胞的分裂、增殖未见文献报道。 本探讨采纳流式细胞仪测定法证明Ang局部应用可促进创面中成纤维细胞的分裂、增殖而达到愈合目的，
11、且随Ang浓度的上升，处于S期的成纤维细胞所占比例越大，峰值出现也越早。本探讨有可能为Ang在临床创面愈合的应用供应理论依据。但Ang最适浓度及应用时间还不清晰，仍需进一步深化探讨。 参考文献 1De Gasparo M,Catt KJ,Inagami T,et a1International Union of pharmacologyXXThe Angiotensin ReceptorsJ.Pharmacol Rev,2000,52(3):415-472. 2陆树良. 烧伤创面愈合机制与新技术M. 北京:人民军医出版社,2003:56-59. 3廖红,董志,傅洁民,等. 壳聚糖对大鼠 度烧伤
12、创面 EGF和 PDGF表达的影响J.中国药理学通报，2006,22(11):1375-1378. 4陈建坤,陈超.度烧伤创面愈合的机制J.广东医学,2009,30(11):1752-1754. 5Lim D,Lutucuta S,Bachireddy P,et al. Angiotensin blockade reverses myocardial fibrosis in a transgenic mouse model of huam hypertrophic cardiomyopathyJ. Circulation,2001,103(6):781. 6Li Q,Zhang GY,Li X
13、H. Ang and hepatic fibrosisJ. World Clin J Digestol,2003,11(3):334. 7Ishidoya S,Morrissey J,McCracken R,et al.Angiotensin receptor antagonist ameliorates renal tubulointerstitial fibrosis caused by anilatcral ureternal obstructionJ.Kidney Int,1995,47:1285. 8刘雄伟,程飚. 血管惊慌素受体与皮肤组织损伤后的修复J.中国临床康复,2005,9(34):127. 收稿日期2010-10-26 修回日期2011-02-10 编辑/张惠娟