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1、复肝宁对免疫性肝纤维化大鼠的影响:肝纤维化指标正常值 摘 要：目的：通过大鼠肝纤维化动物模型，探讨中药复方复肝宁治疗肝纤维化的效果及部分作用机制。方法：采纳猪血清诱导免疫性肝纤维化动物模型。70只大鼠随机分6组：正常组，模型组，秋水仙碱治疗组，复肝宁低、中、高剂量治疗组。造模6周后，各组大鼠赐予相应的药物或生理盐水灌胃。试验第10周末，处死动物，并采集肝组织标本。测定肝组织羟脯氨酸(HYP)含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性，通过光镜视察肝病理组织学变更。结果：与正常组比较，模型组大鼠肝组织HYP含量明显上升(P 1.2方法动物适应1周后按体重编号，依据随机数字表法分为6
2、组：正常组、模型组、秋水仙碱治疗组、复肝宁低、中、高剂量治疗组。正常组10只，其余各组均为12只，雌雄各半。试验选用猪血清诱导免疫损伤性HF模型。除正常组外，其余各组均参照于世瀛等1的方法制造HF病理模型，采纳未灭活猪血清腹腔注射，每周2次，每次0.5mL/只，连续10周。6周后即可形成HF。各治疗组于造模6周后给药，1次/日，每天同一时间灌胃，连续4周，分别依据大鼠详细体重确定药量，每34日称体重量后调整剂量1次。用药剂量：复肝宁低、中、高剂量治疗组分别按3.85、7.70、15.40g/kg灌胃治疗；秋水仙碱治疗组按0.1mg/kg体重灌胃给药；模型组和正常组每日予蒸馏水灌胃1次，2mL/
3、次。试验10周后结束，均于末次给药后24h，禁食12h，动物断颈处死。肝组织匀浆制备：取右叶部分肝组织，用冰生理盐水冲洗，冰浴中制成10%肝组织匀浆，离心3000r/min10min，待测。肝组织制备：光镜：取右侧肝叶，用10%中性福尔马林液固定，石蜡包埋和HE染色。 1.3 视察指标及方法肝组织HYP含量、SOD活力、MDA含量测定：均应用比色法测定，按试剂盒说明书操作，其中HYP含量用g/g表示，SOD含量用表示U/mg，MDA含量用nmol/mg表示。肝组织形态学：肝组织经梯度酒精系列脱水、浸蜡、石蜡包埋、切片、HE染色、视察肝脏组织学变更并照相。肝纤维化分级参照文献分为4级：“-”汇管
4、区无明显纤维组织；“+”汇管区有较多的纤维组织，局限性；“+ +”汇管区有大量纤维组织增生，呈窄带状，并向肝小叶四周伸展；“+ + +”汇管区有大量纤维组织增生，呈宽带状，并伸展包绕肝小叶，且可见中心静脉偏位。 1.4 统计处理计量资料采纳单因素方差分析，两两作Tukey-t检验，用均数标准差（s）表示；等级资料各组间比较采纳非参数秩和检验。P值0.05)，但以高剂量组降低HYP含量的效果最佳。 2.2各组大鼠肝组织SOD MDA的改变 见表2。 从表2可见，与空白组相比较，模型组中SOD活力显著下降(P0.05)；秋水仙碱组SOD活力上升(P0.05)。 2.3 病理形态学视察 正常组：肝组
5、织由多数个肝小叶组成，肝小叶中心为中心静脉，肝板以中心静脉为中心呈条索状向四周放射状排列，板间有不规则肝窦，仅于汇管区和中心静脉有少许胶原纤维存在。模型组：多数正常小叶结构破坏或消逝，肝脏广泛纤维组织增生，尤以汇管区为重，同时向肝小叶内增生，将肝小叶分割包绕形成大小不等的假小叶，假小叶内肝细胞变性，肝细胞索排列紊乱，中心静脉四周肝细胞肿胀明显，肝细胞浆中可见较多大小不等空泡，肝窦受压，中心静脉偏位或缺如，增生的纤维间有较多的炎性细胞浸润。各药物治疗组：与模型组比较，肝小叶结构改善明显，多呈放射状分布，汇管区纤维组织增生显著削减，纤维条索疏松变窄，纤维间隔显著变薄、削减，肝细胞坏死，炎性细胞浸润
6、少见，病理损伤有不同程度的减轻，且尤以高剂量组明显。各组大鼠肝纤维化程度分级详细状况见表3。 从表3可见，模型组HF程度显著高于正常组(P0.05)。 3探讨 中国人群发生HF的主要缘由是病毒性肝炎，笔者认为HF多属嗜酒好醴者或情志抑郁者，素常饮食不洁或常怀愤郁之气，正气内应，外感湿热疫毒之邪，邪毒阻滞肝经，气滞血瘀，继则肝病传脾，脾失健运，肝脾不和，脏腑机能失调，气血结而不畅，血脉失养，久而酿成积之根。本病病程较长，进展缓慢，邪毒久羁不除，日久渐渐耗伤正气，终致正虚邪恋，本虚标实之证。依据慢性肝炎肝纤维化的病因病机，结合临床阅历，周语平教授提出以活血化瘀、益气健脾为主，兼清热利湿、疏肝解郁的
7、治法，并自创新方复肝宁，用于治疗慢性肝炎肝纤维化以瘀血阻滞肝脉、脾气虚弱为主，兼见湿热未尽、肝郁气滞为主要病机的患者，疗效显著。依据现代药理学探讨表明，复肝宁中多味中药被公认为具有爱护肝细胞，改善肝脏微循环，促进肝功能复原，调整免疫，促进肝细胞再生等功能，符合中药多途径、多环节、多靶点发挥抗HF作用。 目前已公认HSC是HF时ECM过多产生和沉积的主要细胞来源，它的激活和增生在HF过程中起主要作用2-3。氧化应激及氧自由基触发的脂质过氧化是导致肝细胞损伤及激发HSC活化、胶原基因表达的重要机制4-5。活性氧、超氧阴离子在体内产生的自由基通过脂质过氧化作用损伤、破坏肝细胞，产生脂质过氧化物，促进HSC合成胶原，并通过激活KC释放细胞因子，刺激HSC转化、增殖、合成ECM，同时抑制ECM降解，导致HF形成6。MDA为脂质过氧化的最终产物，可严峻破坏细胞膜结构，导致细胞肿胀、坏死，其含量反映了组织过氧化损伤的程度。SOD则具有清除氧自由基的作用，肝脏病变时其解毒功能降低，缺血、缺氧，即可引起SOD合成削减，导致氧自由基增多7。因此，抑制脂质过氧化则是抗HF的重要环节。 本试验结果表明，与模型组比较，经复肝宁治疗后，高、中剂量组大鼠肝组织SOD活性上升，MDA含量则降低，且以高剂量组效果更明显(P