《第四章药物定量分析与分析方法验证课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第四章药物定量分析与分析方法验证课件.ppt（24页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、第四章药物定量分析与分析方法验证第1页，此课件共24页哦 第四章第四章 药物定量分析与分析方法验证药物定量分析与分析方法验证定量分析样品前处理方法定量分析样品前处理方法 定量分析方法特点定量分析方法特点 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证1 12 23 3第2页，此课件共24页哦一、定量分析样品前处理方法一、定量分析样品前处理方法 Pretreatment of sample used in quantitative analysis定量分析样品前处理方法定量分析样品前处理方法 概概 述述12第3页，此课件共24页哦IIICOOHCH3COHNNHCOCH3泛影酸泛影酸IIICH
2、2CHCOOHNH2C2H5碘番酸碘番酸CH3HCICOOC2H5CH28碘苯酯碘苯酯 概概 述述第4页，此课件共24页哦 概概 述述BrBrBrBrHOOHOOSSOONaNaOOOO磺溴酞钠磺溴酞钠CH3CH3OHCCl3C12H2O三氯叔丁醇三氯叔丁醇第5页，此课件共24页哦OCCHCHCOOOOO-OOOSbSbO-CHOCCHCO2K+3H2OHCCOOCCH OOFe酒石酸锑钾酒石酸锑钾富马酸亚铁富马酸亚铁 概概 述述第6页，此课件共24页哦 概概 述述含金属有机药物含金属有机药物OAsHOOHNHCONH2卡巴胂卡巴胂金属有机药物金属有机药物第7页，此课件共24页哦定量分析样品前
3、处理方法定量分析样品前处理方法直接测定法含金属或直接测定法含金属或C-MC-M不牢固的有机金属不牢固的有机金属经水解后测定法卤素联脂肪碳链（溶于适当溶剂再水解）经水解后测定法卤素联脂肪碳链（溶于适当溶剂再水解）直接回流后测定直接回流后测定 碱化回流后测定碱化回流后测定 硫酸水解后测定硫酸水解后测定经氧化还原后测定法卤素联芳环牢固（一般用于测碘）经氧化还原后测定法卤素联芳环牢固（一般用于测碘）碱性还原后测定法如泛影酸碱性还原后测定法如泛影酸 酸性还原后测定法如碘番酸酸性还原后测定法如碘番酸 利用药物中可利用药物中可游离游离的金属离子的氧化性测定含量的金属离子的氧化性测定含量不经有机破坏不经有机破
4、坏的分析方法的分析方法:第8页，此课件共24页哦经有机破坏经有机破坏的分析方法的分析方法湿法破坏湿法破坏 HNO3-HClO4 HNO3-H2SO4 H2SO4-MSO4 金属以高价态存在金属以高价态存在干法破坏：无水碳酸钠或氧化镁，注意温度干法破坏：无水碳酸钠或氧化镁，注意温度氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法第9页，此课件共24页哦空心空心A.燃烧瓶燃烧瓶 B.铂丝网铂丝网 C.D.盛固体样品滤纸及其折叠法盛固体样品滤纸及其折叠法 E.F.G.称取液体样品方法称取液体样品方法7mm50mm30mm尾部尾部7mm13mm20mm25mm35 6mm16 6mm滤纸滤纸滤纸滤纸AGFEDCB氧瓶燃烧装置及称
5、样方法氧瓶燃烧装置及称样方法第10页，此课件共24页哦氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法 样品样品 吸收液吸收液 测定方法测定方法含含氟氟有机药物有机药物 H2O pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟蓝茜素氟蓝 分光光度法分光光度法含含氯氯有机药物有机药物 NaOH溶液溶液 银量法银量法 汞量法汞量法 分光法分光法含含溴溴有机药物有机药物 H2O2-NaOH液液 或或NaOH液液-银量法银量法 分光法分光法 硫酸肼饱和液硫酸肼饱和液含含碘碘有机药物有机药物 NaOH液液-银量法银量法 碘量法碘量法 硫酸肼饱和液硫酸肼饱和液 汞量法汞量法 分光法分光法第11页，此课件共24页哦碘苯酯含量测定碘苯
6、酯含量测定 取本品约取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用NaOH T.S.2ml与与H2O 10ml为吸收液，待吸收完全后，加为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溴醋酸溶液溶液10 ml，密塞，振摇放置数分钟，加，密塞，振摇放置数分钟，加甲酸甲酸约约1ml，用水洗涤瓶口，并通入空气，用水洗涤瓶口，并通入空气流约流约35min，以除去剩余的溴蒸气，加，以除去剩余的溴蒸气，加KI 2g，密塞，摇匀，用，密塞，摇匀，用Na2S2O3液液(0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝
7、色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫代硫酸钠液的硫代硫酸钠液(0.02mol/L)相当于相当于1.388mg的的C19H29IO22HIO3+10KI+10CH3COOH6I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6第12页，此课件共24页哦二、药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证p 指导原则指导原则p 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证p 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则指导原则p 药物稳定性试验药物稳定性试验指导原则指导原则p 缓释、控释制剂缓释、控释制
8、剂指导原则指导原则p 微囊、微球与脂质体制剂微囊、微球与脂质体制剂指导原则指导原则p 细菌内毒素检查法应用细菌内毒素检查法应用指导原则指导原则第13页，此课件共24页哦第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求 效能指标：评价分析方法的尺度评价分析方法的尺度 效能指标包括:精密度精密度,准确度准确度,检测限检测限,定量限定量限,选择性选择性,线性与范围线性与范围,耐用性耐用性第14页，此课件共24页哦(1)(1)准确度准确度（accuracyaccuracy）：）：测量值与真实值接近的程
9、度测量值与真实值接近的程度 表表 示示:回收率回收率 测定方法：回收试验测定方法：回收试验 加样回收试验加样回收试验第15页，此课件共24页哦(2)精密度精密度（precision precision）：）：定定 义义:同一样品多次测量值之间相互接近的程度同一样品多次测量值之间相互接近的程度表表 示：示：标准偏差标准偏差(s),相对标准偏差相对标准偏差(RSD)重复性重复性:同一实验室同一实验室,同一人多次测定的精密度同一人多次测定的精密度中间精密度中间精密度:同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性重现性:不同实验室，不同人测定的精密度不同实验
10、室，不同人测定的精密度第16页，此课件共24页哦(3)(3)专属性专属性（specificityspecificity）:指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性被测物的特性)。第17页，此课件共24页哦(4)检测限检测限（limit of detection，LOD）：）：药物能被检出的最低浓度药物能被检出的最低浓度(g/ml)测测 定定:信噪比法信噪比法(S:N=3:1)(5)定量限定量限（1imit of quantitation，LOQ）：）：药物能被定量测出的最低浓度药
11、物能被定量测出的最低浓度(g/ml)测测 定定:信噪比法信噪比法(S:N=10:1)第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 -性能指标性能指标第18页，此课件共24页哦(6)(6)线性与范围线性与范围（linearity and rangelinearity and range）：）：待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围 线性关系：线性关系：Y=a+bx Y=a+bx （r=0.9999)r=0.9999)线性程度：相关系数线性程度：相关系数 (7)(7)耐用性耐用性（robustnessrobustness）:测定条件稍有变动时
12、，对测定结果的影响程度测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度 影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pHpH，商品，商品柱的品牌，柱温等柱的品牌，柱温等YXab第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 -性能指标性能指标第19页，此课件共24页哦检验项目和验证内容：检验项目和验证内容：项目内容项目内容鉴别鉴别杂质测定杂质测定含量测定及溶出含量测定及溶出量测定量测定定量定量限度限度准确度准确度精密度精密度重复性重复性中间精密度中间精密度 专属性专属性检测限检测限 定量限定量限线性线性范围范围耐用性耐用性 已有重现性已有重现性验
13、证，不验证，不需验证中需验证中间精密度间精密度 如一种方法不如一种方法不够专属，可够专属，可用其他分析用其他分析方法予以补方法予以补充充 视具体情况视具体情况予以验证予以验证第20页，此课件共24页哦第四节第四节 生物样品分析的基本步骤生物样品分析的基本步骤1.药物从蛋白结合或缀合物中释出药物从蛋白结合或缀合物中释出 蛋白变性：如应用三氯醋酸、蛋白变性：如应用三氯醋酸、HClO4、有机溶剂、有机溶剂(乙醇、丙乙醇、丙酮、乙腈酮、乙腈)使蛋白沉淀使蛋白沉淀 盐酸水解盐酸水解 酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一种细菌性蛋一种细菌性蛋白分解酶，可在白
14、分解酶，可在pH 7.011.0使肽键降解使肽键降解)第21页，此课件共24页哦 MS UVHPLC UV CC)CC(UV PC)TLC(.3ODS2XAD-.2.Chromatogr Column电电化化学学检检测测、荧荧光光、：、荧荧光光洗洗脱脱液液：比比色色、普普通通荧荧光光、洗洗脱脱液液：比比色色、洗洗脱脱原原位位测测定定或或测测定定、型型树树脂脂、活活性性炭炭、凝凝胶胶换换树树脂脂、氧氧化化铝铝、固固相相提提取取柱柱法法：离离子子交交剂剂溶溶剂剂提提取取加加盐盐或或其其他他试试净净化化第22页，此课件共24页哦定量分析方法的验证定量分析方法的验证 -生物样品分析生物样品分析（一）特
15、异性（一）特异性内源性物质不得干扰原药、代谢物内源性物质不得干扰原药、代谢物（二）标准曲线（二）标准曲线r0.9900，至少，至少5个浓度，不许外延个浓度，不许外延（三）精密度和准确度（三）精密度和准确度RSD15、20相对回收率相对回收率85115（80120）第23页，此课件共24页哦（四）最低定量限（四）最低定量限LOQLOQ3535倍倍t t1/21/2，或，或1/101/101/201/20倍倍C Cmaxmax（五）样品稳定性（五）样品稳定性室温、冻融、冰冻长期室温、冻融、冰冻长期（六）提取回收率（绝对回收率）（六）提取回收率（绝对回收率）一般低于一般低于100100，须稳定，须稳定（七）质控样品（七）质控样品已知浓度样品均匀放入待测生物样品序列中，以确保定已知浓度样品均匀放入待测生物样品序列中，以确保定量测定的准确度量测定的准确度定量分析方法的验证定量分析方法的验证 -生物样品分析生物样品分析第24页，此课件共24页哦