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1、第六章维生素的测定第1页，此课件共24页哦掌握学习目标生物监测指标；测定方法原理主要步骤和注意事项生物监测意义熟悉理化性质；代谢途径了解食物来源、缺乏及过量症状第2页，此课件共24页哦概述脂溶性（脂溶性（A、D、E、K）水溶性两类（水溶性两类（B族、族、C）维生素分类维生素分类：维生素（维生素（vitaminvitamin）：是生物体维持正常生命活动必须且无：是生物体维持正常生命活动必须且无法通过自身合成足够量，需要通过膳食摄取的一类有机化合物的统法通过自身合成足够量，需要通过膳食摄取的一类有机化合物的统称。称。第3页，此课件共24页哦第一节 维生素A和-胡萝卜素一、理化性质 维生素A，脂溶性
2、、主要有维生素A1（视黄醇，retinol）和维生素A3（3-脱氢视黄醇，retinol）两种形式。体内的主要活性形式是视黄醇。在空气中易氧化，加热和光照加速氧化，对酸不稳定。不溶于水，有荧光性，其无水乙醇、环己烷等在自我照射下发出绿色荧光。第4页，此课件共24页哦第一节 维生素A和-胡萝卜素一、理化性质 -胡萝卜素，植物天然色素，是视黄醇的二聚物和最具活性的维生素A前体。对热、酸碱稳定、易在紫外线和空气总氧化失活。第5页，此课件共24页哦二、代谢和生物监测指标维生素A来源膳食来源：肝脏、肉制品、乳制品、鱼肝油等维生素A与人健康的关系缺乏：过量：夜盲症、干眼症、角膜软化症肝损伤、骨异常、脱皮、
3、脱发、复视、呕吐及头痛、胎儿畸形第6页，此课件共24页哦二、代谢和生物监测指标我国血清视黄醇浓度世界粮农组织（FAO）正常参考值：儿童300g/L成人400g/L视黄醇含量、血浆视黄醇浓度、相对剂量反应血清-胡萝卜素 800g/L第7页，此课件共24页哦静脉血：时间-70，避光保存血清三、样品的采集和保存第8页，此课件共24页哦原理：血清经无水乙醇沉淀蛋白后，正己烷萃取视黄醇及-胡萝卜素，C18柱色谱分离，紫外检测器监测，保留时间定性，内标法标准曲线法定量。四、血清中维生素A及-胡萝卜素的测定第9页，此课件共24页哦样品处理：100L血清中加入100L内标乙醇溶液，混匀后加入1mL正己烷存取，
4、取上清，挥干，无水乙醇复溶测定。四、血清中维生素A及-胡萝卜素的测定仪器参考条件：色谱柱：C18色谱柱（150mm*4.6mm,5m）流动相 甲醇：水=98:2（临用前脱气）流速：1.0mL/minUV 波长：视黄醇325nm,-胡萝卜素450nm第10页，此课件共24页哦注意事项：四、血清中维生素A及-胡萝卜素的测定（1）内标物：维生素A乙酸酯（2）标准溶液领用标定（3）无水乙醇作为蛋白质变性剂（4）缩短保留时间可用该报表了有机溶剂洗脱（5）前处理可用分散液相微萃取第11页，此课件共24页哦第二节 维生素D、E、K一、理化性质 维生素E，有生育酚及生育三烯酚两类，有四种异构体。其中-生育酚（
5、-tocopherol）活性最强。在无氧条件下对热稳定，对碱了、紫外线、铁盐等均不稳定。极易被氧化，可保护其他物质不被氧化。第12页，此课件共24页哦二、代谢和生物监测指标维生素E来源膳食摄入：植物油、绿叶蔬菜吸收：分布：小肠尿液体内合成：少排泄：肝脏储存和代谢抗衰老、抗肿瘤、保护肝脏、促进受损细胞修复等生理功能：第13页，此课件共24页哦二、代谢和生物监测指标生物监测指标血清或全血维生素E第14页，此课件共24页哦静脉血：时间-70，避光保存血清三、样品的采集和保存第15页，此课件共24页哦四、高效液相色谱法测定全血中的维生素En方法方法 荧光光度法荧光光度法紫外紫外-可见分光光度法可见分光
6、光度法HPLCHPLCGCGC第16页，此课件共24页哦检出限：0.08g/mL 经肝素抗凝的全血样品，乙醇沉淀蛋白后正己烷萃取维生素E，高效液相色谱分离，紫外检测器检验。保留时间定性，外表标准曲线法定量。四、高效液相色谱法测定全血中的维生素E原理：第17页，此课件共24页哦样品处理：50L全血样品中加入200L无水乙醇，混匀后加入1mL正己烷涡旋混匀，离心取正己烷层800L，挥干，甲醇复溶测定。仪器参考条件：色谱柱：C8（150mm*4.6mm,5m）柱温：50流动相 甲醇：水=98:2 流速：1.0mL/minUV 波长：292nm,四、高效液相色谱法测定全血中的维生素E第18页，此课件共
7、24页哦注意事项：（1）正己烷易挥发，环境温度高是冰浴萃取。（2）可用C18柱更换，流动相可采用甲醇-乙醇=20：80（4）标准液可用-生育酚配制，临用标定（5）可同时检测维生素A四、高效液相色谱法测定全血中的维生素E第19页，此课件共24页哦第三节 维生素B一、理化性质 维生素B1，又称硫胺素（thiamine），抗神经炎维生素、抗脚气病维生素。白色结晶，溶于水，在酸性溶液中稳定，在pH5的溶液中不稳定。光和热可促其氧化，易被氧化为脱氢硫胺素，即硫色素。应避光、低温保存，不宜久贮。第20页，此课件共24页哦二、代谢和生物监测指标维生素B1来源膳食摄入：粮谷、豆类、干果、绿叶菜、动物内脏及蛋类
8、代谢：中枢神经系统肝代谢生成磷酸酯衍生物游离硫胺素、单磷酸硫胺素吸收：小肠红细胞、血浆焦磷酸硫胺素三磷酸硫胺素硫胺素评价指标：常以血液中三种形式含量之和作为指标排泄：超出储存阈值的硫胺素检疫原形或结合形式经尿排出体外，可通过负荷试验反映营养状况。第21页，此课件共24页哦血样：静脉血，肝素抗凝，-70保存。收集口服维生素片后四小时内排出的全部尿液，加草酸调节pH3，4避光保存。长期-20保存。三、样品的采集和保存尿样：第22页，此课件共24页哦四、硫胺素的检测n方法方法 荧光光度法荧光光度法HPLCHPLC第23页，此课件共24页哦 尿液经酸水解和酶解后，尿中有利硫胺素被碱性铁氰化钾氧化为具有荧光的硫色素，有利溶剂萃取后测定其荧光，标准曲线法定量。荧光光度法测定尿中的硫胺素原理：第24页，此课件共24页哦