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1、关于实验型高血压现在学习的是第1页，共23页一、高血压动物建模方法分类1、肾性高血压模型2、内分泌性高血压模型3、神经原性高血压模型4、遗传性高血压模型5、环境型高血压模型现在学习的是第2页，共23页（一）、肾性高血压模型1、肾血管性高血压模型（肾动脉狭窄性高血压模型）分类：（1）两肾一夹型（两侧肾完好，一侧肾动脉狭窄）（2）一肾一夹型（一侧肾切除，另一侧肾动脉狭窄）（3）两肾两夹型(两肾均完好，两侧肾动脉狭窄）原理：狭窄肾动脉可以造成肾脏缺血，导致肾脏内肾 素合成和分泌增多，进而增高血管紧张素的含量，使血压升高。现在学习的是第3页，共23页 肾血管性高血压模型的操作步骤：肾血管性高血压大鼠的
2、制备：150200g大鼠，用安定 5mg/kg和氯胺酮50mg/kg，麻醉，仰卧位固定，剪去腹部手术野毛，皮肤消毒后于剑下1.5cm沿腹中线切开皮肤及肌层，找到肾脏，将肾脏轻轻挤出，用眼科镊分离肾动脉，在近主动脉端用U形银夹套上，然后缝合切口。随后血压将逐渐升高，45周后70%的大鼠形成持续性高压，收缩压160mmhg。现在学习的是第4页，共23页2、肾外包扎性高血压模型（肾外压迫性高血压模型)分类：（1）两肾一扎型（两侧肾完好，一侧肾包扎）（2）一肾一扎型（一侧肾切除，另一侧肾包扎）（3）两肾两扎型（两侧肾完整，两侧肾包扎）原理：肾外异物包扎，可致肾周围炎在肾外形成纤维素性鞘膜，压迫肾实质，
3、造成肾组织缺血，使肾素形成增加，进而是血管紧张素含量增多，血压升高。现在学习的是第5页，共23页 肾外包扎性高血压模型操作步骤：150 200g大鼠，用安定5mg/kg和氯胺酮50mg/kg，ip麻醉，仰卧位固定，剪去腹部手术野毛，皮肤消毒后于剑下1.5cm沿腹中线切开皮肤及肌层，找到肾脏，将肾脏轻轻挤出，小心的将肾与周围组织剥离，将自制的双层乳胶薄膜剪成“X”形，绕开肾门交叉包扎，同法对右肾进行包扎，缝合手术切口，皮下注射2万单位青霉素，约20天即可约有70%以上大鼠出现持续性高血压，收缩压一般可升高50%以上。现在学习的是第6页，共23页（二）、内分泌性高血压模型1、DOC盐性高血压模型
4、原理：去氧皮质酮（DOC）为盐皮质激素，具有明显的水钠潴留作用，使细胞外液增加，血压升高。大鼠一侧肾切除后皮下注射DOC和附加饮用1%氯化钠溶液可形成持续高血压。现在学习的是第7页，共23页DOC盐性高血压模型制作步骤：大鼠100150g，用安定5mg/kg和氯胺酮50mg/kg ip麻醉，腹部正中切口进行左肾切除。术后大鼠用醋酸去氧皮质酮（DOCA）50mg/kg，sc，qd，每周给药5天，共五周，同时饮用1%氯化钠溶液，停药后改饮普通水。给药一周后约50%大鼠血压升高，给药五周停药后70%大鼠形成持久性高血压，收缩压21.3kpa 者用作实验。现在学习的是第8页，共23页2、肾上腺素再生性
5、高血压模型 幼年大鼠左侧肾和肾上腺素切除，右侧肾上腺包膜用小刀切一小口，用弯头无头眼科镊轻压肾上腺将髓质和大部分皮质剔除。术后饮用1%氯化钠溶液。术后两周动物血压和血浆DOC含量明显升高，术后714周血浆DOC下降到正常水平，但血压仍维持高血压水平。现在学习的是第9页，共23页（三）、神经原性高血压模型 1973 年Jannetta 在手术观察基础上提出脑干左侧，颅神经根入脑区（REZ）被血管压迫是原发性高血压的原因，即“神经源性高血压”假说。在此基础上，许多学者从临床及实验研究证实了Jannetta 的假说。最初采用脉动球囊法，即有大小两个橄榄球囊，中间细管相连，内充液体，大囊置于主动脉内，
6、小囊置于延髓左侧来建立高血压动物模型。现在学习的是第10页，共23页（四）、遗传性高血压模型、选择性近亲繁殖高血压模型 遗传性高血压大鼠有多种品系，如：遗传性高血压大鼠（GH）自发性高血压大鼠（SHR）Dahl 盐敏感大鼠（DS）里昂株高血压大鼠（LH）蒙特斯种高血压大鼠（SHM）米兰种高血压大鼠（MHS）其中具有使用价值，应用较广泛的是日本学者培育的突变系-自发性高血压大鼠（SHR）及其亚系，它们是目前国际上公认的最接近人类原发性高血压的动物模型。现在学习的是第11页，共23页2、基因工程高血压模型 1990 年德国科学家首先将一个高血压候选基因（小鼠DBA/2JR-2 肾素基，Ren-2）
7、转入大鼠的生殖细胞而制备携带该候选基因的转基因大鼠（TGR），由此而建立了一种新的高血压大鼠模型：TGR，该模型4 周龄时血压升高，9周时达199.5259.4 mmHg（对照组119.7129.7 mmHg）。血浆活性肾素（PRA）和血管紧张素（Ang）水平正常或降低，肾脏的肾素合成明显受抑，但肾上腺等肾外组织的肾素合成却显著增强。现在学习的是第12页，共23页（五）、环境性高血压模型 研究发现正常大鼠暴露于5 的环境中3周即可形成高血压并且伴有心肌肥厚。如果暴露7 周，去除冷环境后4周内其血压都不会恢复正常。故推测，暴露时间更长将会形成不可逆转的高血压动物模型。现在学习的是第13页，共23
8、页二、高血压药物的研究方法1、辛伐他汀对高血压大鼠的作用研究方法、辛伐他汀对高血压大鼠的作用研究方法2、阻断环氧化没、阻断环氧化没-2对高血压大鼠的作用研究方法对高血压大鼠的作用研究方法现在学习的是第14页，共23页（一）、辛伐他汀对高血压大鼠的作用研究方法 1、实验材料 （1）实验动物：8周龄健康雄性wistar大鼠40只，体重180220g （2）试验药物：辛伐他汀：40mg/片 卡托普利：12.5mg/片 2、主要试剂及仪器 血管紧张素II 放射免疫分析试剂盒、NO含量检测试剂盒、羟脯氨酸含量检测试剂盒、8-iso-PGF2a检测试剂盒、TC、TG、LDL-C检测试剂盒，MD100-1电
9、子分析、BX51型光显微镜、HX-II型为套式小动物血压测量仪、分光光度计、-4到-70摄氏度冰箱现在学习的是第15页，共23页 3、实验方法（1）建模：建立两肾一夹肾性高血压大鼠模型。并选用收缩压超过150mmHg,并且在原来基础上升20mmHg以上者位高血压大鼠建模成功，备用。（2）分组：选用健康雄性8周龄的wistar大鼠40只，体重180-220g，适应性喂养1周后，随机取7只作为假手术组，其余33只进行两肾一夹手术造模。造模组及假手术组均喂养4周，选取造模成功的大鼠并重新分组：高血压组（H组，n=6）、辛伐他汀治疗组（S组，n=8）、卡托普利组（C组，n=6)、合用组（C+S组，n=
10、8）。另设假手术组为对照组（sh组，n=6）。一组一笼，每笼的大鼠用苦味酸标记，以便饲养，观察和记录数据。现在学习的是第16页，共23页 (3)给药：a、卡托普利组：25mg卡托普利溶于3.75ml双蒸水内，一天一次，每次1.5ml/100g。药物剂量100mg/kg.d。b、辛伐他汀组：8mg辛伐他汀溶于60ml双蒸水中，一天一次，每次1.5ml/100g。药物剂量2mg/kg.d c、卡托普利+辛伐他汀组：辛伐他汀2mg和卡托普利100mg溶于16ml双蒸水内，一天一次，每次1.5ml/100g,药物剂量：辛伐2mg/kg.d、卡托普利：100mg/kg.d。d、假手术组与高血压组在同样的
11、时间内每日同一时间灌双蒸馏水一次，每次1.5ml/kg.d （4）血压测量：用HX-II型尾套是小动物血压测量计测定大鼠血压，并且应当在一定时间内，完成所有操作，一般固定于每天上午的8点至12点。血压测定重复测定3次，求三次的均值作为测压结果。现在学习的是第17页，共23页（5）相关数据的采集 检测NO和血脂含量、血浆和心肌AngII的测定、血浆8-异前列素F2a 的测定（6）相关结构及生理变化的检测 左室质量指数的测定、心肌组织羟脯氨酸龙都的测定 （7）统计学分析 注：方法来源于山西医科大学硕士论文 现在学习的是第18页，共23页（二）、阻断环氧化没-2对高血压影响的研究方法 1、实验动物的
12、来源于分组：（1）实验动物的来源：8周龄雄性大鼠10只 （2）药物来源与分组：COX-2选择性抑制剂塞来昔布胶囊，增加盐负荷的效果，本研究选择低盐饮食与高盐饮食进行对比。大鼠随机分组（n=5）：低盐饮食组、高盐饮食组。现在学习的是第19页，共23页 2、实验方法：实验前大鼠置于大鼠笼中饲养3天，所有大鼠给予低盐饮食（含0.04%NaCl）同时给予celecoxib（25mg/kg.d)灌胃5天。第6天开始，低盐实验组给予celecoxib灌胃及低盐饮食，高盐饮食组改为给予celecoxib灌胃及高盐饲料（含8%NaCl），连续三天。实验过程中称量每日投放量及回收量，计算每日盐摄入量 现在学习的
13、是第20页，共23页 3、结果 （1）一般情况：体重、肾功能及肾脏组织学检测、尾动脉收缩压、钠摄入量、血钠浓度、24H尿量（UV）及尿钠排泄 （2）改变盐负荷后UV的每日变化情况 （3）改变盐负荷后尿钠每日变化情况 （4）不同COX的分布于表达（cox-1、cox-2、肾脏髓质COX-2）（5）血、24h尿醛固酮的变化 注：方法来源于复旦大学硕士学位论文现在学习的是第21页，共23页总结：1、从以上实验也可以看出动物造模是实验室研究药物作用的基础，造模的成功与否以及造模类型直接影响到实验的成功与否。2、通过以上两个实验的研究方法，首先，我们可以发现高血压药物在实验室的研究多以动物实验为主，通过药物与阳性对照药的药物作用比较得出结论，其次，实验者多是通过宏观现象来判断药物是否有效，再通过微观物质的鉴定，以及对肾脏组织的鉴定和对血液的检测来判断其作用机理。现在学习的是第22页，共23页感谢大家观看现在学习的是第23页，共23页