常用细菌生化反应试验.ppt

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1、常用细菌生化反应试验,糖醇类代谢试验,糖发酵试验 甲基红试验 V-P试验 葡萄糖氧化发酵试验(O/F试验) 七叶苷水解试验 半乳糖苷渗透酶试验,糖发酵试验,原理 多糖单糖丙酮酸酸性产物(或产酸产气)pH 指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现) 培养基:糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管 试剂:酚红、溴甲酚紫等 结果:培养基呈酸性变色 应用:观察细菌对糖度的 分解情况,常用于肠道杆菌的鉴定,糖发酵试验结果判断,甲基红试验,原理:细菌分解糖,产生丙酮酸,进一步生成大量混合酸,使培养基pH维持在4.4以下,加入甲基红后,使甲基红呈现红色反应。此为甲基红试验阳性。 培养基:葡萄糖蛋白胨水 试剂:甲基红

2、试剂 结果:加入试剂后,培养基呈现红色:+ 培养基不变色: 应用:是肠道杆菌常用的生化反应试验,主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌,伏普试验(V-P试验),原理:细菌发酵葡萄糖,产生丙酮酸,丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇,在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合,生成红色化合物。 培养基:葡萄糖蛋白胨水 结果:加入试剂后,培养基呈现红色:+ 培养基不变色: 应用:是肠道杆菌常用的生化反应试验,主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌,葡萄糖,丙酮酸,大量混合酸,pH降至4.4以下,甲基红试剂,培养基变红,甲基红试验,葡萄糖,丙酮酸,乙酰甲基甲醇,二乙酰,V-P试剂,培养

3、基变红,VP试验,脱酸,葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径,葡萄糖,丙酮酸,大量混合酸,pH降至4.4以下,甲基红试剂,培养基变红,乙酰甲基甲醇,二乙酰,V-P试剂,培养基变红,脱酸,蛋白质类代谢试验,靛基质试验 硫化氢试验 苯丙氨酸脱氨试验 尿素酶试验,靛基质试验,原理:细菌产生色氨酸酶,可分解蛋白胨中的色氨酸,生成靛基质(吲哚),靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰靛基质。 培养基:蛋白胨水 试剂:靛基质试剂(含对二甲基氨基苯甲醛) 结果:加入试剂后,培养基出现红色液面:+ 培养基液面为黄色: 应用:用于肠道杆菌的鉴定,靛基质试验原理,色氨酸酶,色氨酸,靛基质 (吲哚),玫瑰靛基

4、质 (玫瑰吲哚),对二甲基氨基苯甲醛,硫化氢试验,原理:细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸,生成硫化氢,硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色络合物。 培养基:含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基 结果:培养基 变黑 为阳性,不变黑为阴性 应用:常用于肠道杆菌的鉴定,苯丙氨酸脱氨实验,原理:细菌的具有的苯丙氨酸脱氨酶,可使培养基中的苯丙氨酸脱氨,形成苯丙酮酸,后者与三氯化铁作用,形成绿色化合物。 培养基:苯丙氨酸琼脂 试剂:10三氯化铁 结果:加入试剂后培养基呈现绿色为阳性 应用:多用于肠道杆菌的鉴定,苯丙氨酸脱氨试验原理,苯丙氨酸,苯丙氨酸脱氨酶,苯丙酮酸,10三氯化铁,绿色化合物,尿素酶试验,原理:产生

5、脲酶的细菌,能水解尿素生成氨和CO2,氨使培养基呈碱性变色。 培养基:尿素培养基 试剂:酚红指示剂 结果:培养基变红:+ 培养基不变色 应用:肠杆菌科属间鉴定,尿素酶试验原理,尿素,尿素酶,氨+CO2,培养基pH升高,酚红呈碱性变色,枸橼酸盐利用试验,原理:某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源,也能利用其中的铵盐 作为唯一碳源,细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨,使培养基变碱,是指示剂呈碱性反应。 培养基:枸盐酸盐培养基 试剂:溴麝香草酚蓝(pH6.0以下呈黄色,pH7.6以上呈蓝色) 结果:培养基变蓝:+ 培养基不变色: 应用:肠杆菌科属间鉴别,枸橼酸盐利用试验原理,枸橼酸盐,铵盐,碳酸盐,氨,培养基pH下降,溴麝香草酚蓝 呈碱性变色,培养基变蓝,培养基,糖发酵试验,甲基红试验,靛基质试验,血清学试验,血清学鉴定: 用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原 血清学诊断: 用已知抗原检测血清中的特异性抗体,血清学鉴定,试剂(诊断血清) :含抗体 检测对象:特异性抗原 方法:直接凝集试验(玻片法)、荚膜肿胀试验,伤寒杆菌诊断血清 (含抗伤寒杆菌抗体),+ 待检测细菌,细菌凝集,玻片凝集试验:阳性,报告:检出伤寒杆菌,血清学诊断,试剂:含已知抗原 应用:检测待检者血清中有无相应的抗体以及抗体的效价,

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