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1、细菌鉴定中常用的生理生化反应 一、实验目的1.1.了解细菌生理生化反应原理了解细菌生理生化反应原理2.2.掌握细菌鉴定中常用的生理生化掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；反应的测定方法；3.3.了解细菌在不同培养基中的不同了解细菌在不同培养基中的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义菌中的意义三、实验器材三、实验器材3737恒温培养箱、接种环、酒恒温培养箱、接种环、酒精灯、试管架、记号笔等精灯、试管架、记号笔等待测菌待测菌甲基红试剂、甲基红试剂、V VP P试剂、吲哚试剂、吲哚试剂、格里斯试剂试剂、格里斯试剂(硝酸盐利用硝酸盐利用试验试验)培养基培养基n
2、糖发酵培养基，用于糖类发酵试验糖发酵培养基，用于糖类发酵试验n葡萄糖蛋白胨水培养基，用于甲基红和葡萄糖蛋白胨水培养基，用于甲基红和V VP P试验试验n蛋白胨水培养基，用于吲哚试验蛋白胨水培养基，用于吲哚试验n柠檬酸铁铵或醋酸铅的半固体培养基，用柠檬酸铁铵或醋酸铅的半固体培养基，用于硫化氢试验于硫化氢试验n柠檬酸钠培养基，用于柠檬酸盐利用试验柠檬酸钠培养基，用于柠檬酸盐利用试验三、实验方法及原理三、实验方法及原理 细菌生化试验细菌生化试验 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力不一样，因而代谢产物营养基质的分解能力不一样，因而代谢产物也不一样，可
3、用生化试验的方法检测细菌对也不一样，可用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢产物，从而鉴别细菌的种各种基质的代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。属，称之为细菌的生化反应。糖糖(醇醇)类发酵试验类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同糖不同的细菌含有发酵不同糖(醇醇)的酶，的酶，因而发酵糖因而发酵糖(醇醇)的能力各不相同。其产生的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溴甲酚来判定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫紫pH5pH52(2
4、(黄色黄色)一一6 68(8(紫色紫色)，当发酵，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。无气泡来证明。糖糖(醇醇)类发酵试验类发酵试验（1 1）编号）编号 在各试管上分别标明各种糖在各试管上分别标明各种糖名称，所接种的菌名和组号，下同。名称，所接种的菌名和组号，下同。（2 2）接种）接种 （3 3）培养）培养 将已接种好的培养基置将已接种好的培养基置3737温箱中培养温箱中培养24h24h。（4 4）观察结果）观察结果 （4 4）观察结果：）观察结果：被检细菌若能发酵培
5、养基中的糖被检细菌若能发酵培养基中的糖时，使培养基的时，使培养基的pHpH降低，培养基中的降低，培养基中的指示剂为指示剂为黄色黄色；若发酵培养基中的糖产酸产气，若发酵培养基中的糖产酸产气，则培养基不仅显则培养基不仅显黄色黄色，并且在培养基，并且在培养基中倒置的小玻璃管中倒置的小玻璃管(杜氏小管杜氏小管)中中有气有气体体。若被检细菌不分解培养基中的糖，若被检细菌不分解培养基中的糖，则培养基则培养基不发生变化不发生变化。实验结果实验结果糖发酵实验糖发酵实验 甲基红甲基红(MethylredMethylred)试验试验(简称简称MRMR试验试验)某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，某些细菌分解葡萄糖产生丙
6、酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的酸等，使培养基的pHpH降低到降低到4 42 2以以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色范围是因甲基红指示剂变色范围是pH4pH44(4(红色红色)pH6pH62(2(黄色黄色)。方法方法 将待检菌分别接种到葡萄糖将待检菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，蛋白胨水培养基中，3737培养培养 48h48h，加甲基红指示剂数滴，观察加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。黄色者为阴性。伏一普二氏试验(VP试
7、验)某些细菌分解丙酮酸，丙酮酸某些细菌分解丙酮酸，丙酮酸再被分解，变为乙酰甲基甲醇；乙再被分解，变为乙酰甲基甲醇；乙酰甲基甲醇，其在碱性条件下氧化酰甲基甲醇，其在碱性条件下氧化成为二乙酰，二乙酰和蛋白胨中精成为二乙酰，二乙酰和蛋白胨中精氨酸胍基起作用产生粉红色的化合氨酸胍基起作用产生粉红色的化合物，此为物，此为VPVP试验。试验。方法方法 将被检菌接种到葡萄糖蛋白胨水培养基将被检菌接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，中，3737培养培养48h48h，取出，加入取出，加入4040KOH 5KOH 51010滴，然后再加入等量的滴，然后再加入等量的5 5 一萘酚溶液，一萘酚溶液，用力振荡，再放入用力振荡
8、，再放入3737温箱中保温温箱中保温151530min30min，以加快反应速度。若培养物呈现红色，为以加快反应速度。若培养物呈现红色，为伏伏普反应阳性。普反应阳性。靛基质靛基质(吲哚吲哚)试验试验 某些细菌能分解蛋白质中的色氨某些细菌能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质酸，产生靛基质(吲哚吲哚)，靛基质与对，靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质靛基质(红色化合物红色化合物)。方法：方法：将被检菌接种到胰蛋白胨水培将被检菌接种到胰蛋白胨水培养基中，养基中，3737培养培养24h24h48h48h后，后，沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培沿试管壁滴加数滴吲哚试
9、剂于培养物液面，观察结果。养物液面，观察结果。结果：结果：出现红色者为阳性出现红色者为阳性 出现黄色者为阴性。出现黄色者为阴性。硫化氢试验硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸某些细菌能分解含硫的氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸等胱氨酸、半胱氨酸等)，产生硫化，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。菌。方法 将待检菌以接种针穿刺接种到醋酸铅或柠檬酸铁氨培养基中，37培养24h，观察结果，若有黑色出现者为阳性。柠檬酸盐利用试验柠檬酸盐利用试验 柠檬
10、酸盐培养基中柠檬酸钠为碳的唯柠檬酸盐培养基中柠檬酸钠为碳的唯一来源。有的细菌能利用柠檬酸钠为碳源，因一来源。有的细菌能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸钠，使培养基变为碱性。此时培盐后产生碳酸钠，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色（变色范围：色（变色范围：pH6.0pH6.0 pH7.6pH7.6）。）。不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌，在该培养不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌，在该培养基上不生长，培养基不变色。基上不生长，培养基不变色。方法方法 取少量被检菌接取少量被检菌接种到柠檬酸盐培养基种到柠檬酸盐培养基上，上，3737培养培养24h24h后，后，观察结果。培养基变观察结果。培养基变深蓝色者为阳性。培深蓝色者为阳性。培养基不变色，则继续养基不变色，则继续培养培养7 7天，培养基仍天，培养基仍不变色者为阴性。不变色者为阴性。谢谢大家！