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1、维生素 C 的测定方法郑世豪摘要：维生素维生素 C C 亦称抗坏血酸，亦称抗坏血酸，具有氧具有氧化还原功能，化还原功能，广泛参与细胞间质的合成广泛参与细胞间质的合成及及解解毒毒过过程程等等作作用用，它它能能帮帮助助减减低低臭臭氧、氧、 二氧化碳等空气污染毒性抑制膳食二氧化碳等空气污染毒性抑制膳食中有致癌作用的亚硝胺的合成，中有致癌作用的亚硝胺的合成， 还具有还具有降低血铅浓度的作用，降低血铅浓度的作用， 既能保持皮肤弹既能保持皮肤弹性，性，延缓衰老，延缓衰老， 又有助于消除人体不可又有助于消除人体不可缺少的营养素之一，缺少的营养素之一， 故许多人把它作为故许多人把它作为防病治病的灵丹妙药，防病
2、治病的灵丹妙药， 殊不知应用合理殊不知应用合理与否，会产生不同的作用。与否，会产生不同的作用。关键词 ： 维生素维生素 C C测定原理、测定原理、检测方法检测方法引言维生素维生素 C C 是可溶于水的无色结晶，是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。是一种分子结构最简单的维生素。维生维生素素 C C 有防治坏血病的功能，有防治坏血病的功能， 所以在医药所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。上常把它叫做抗坏血酸。 维生素维生素 C C 在水在水溶溶液液中中易易被被氧氧化化，在在碱碱性性条条件件下下易易分分解解，在在弱弱酸酸条条件件中中较较稳稳定定，维维生生素素 C C开始氧化为脱氢型抗坏血
3、酸开始氧化为脱氢型抗坏血酸( (有生理作有生理作用用) )。维生素。维生素 C C 能保持巯基酶的活性和能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。其其广广泛泛存存在在于于植植物物组组织织中中，新新鲜鲜的的水水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、子叶、猕猴桃、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为柑橘等食品中含量尤为丰富。丰富。准确测定维生素准确测定维生素C C 的含量，的含量，对饮对饮食健康、食健康、医疗保健都具有十分重要的意医疗保健都具有十分重要的意义。义。 本文总结近年来的文献报道维生素本文总结近年来的文献报道维生素
4、C C 测定方法主要有滴定法、荧光法、光测定方法主要有滴定法、荧光法、光度分析法、高效液相色谱法。度分析法、高效液相色谱法。滴定法测定维生素 C测定原理2 2，6 6 一二氯靛酚法和碘量法是较一二氯靛酚法和碘量法是较常见的滴定测定维生素常见的滴定测定维生素C C 的方法。的方法。还原还原型抗坏血酸还原染料型抗坏血酸还原染料2 2， 6 6 一二氯靛酚，一二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，该染料在酸性中呈红色， 被还原后红色被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原消失。还原型抗坏血酸还原2 2，6 6 一二一二氯氯靛靛酚酚后后，本本身身被被氧氧化化成成脱脱氢氢抗抗坏坏血血酸。酸。在没有杂质干扰时，在没
5、有杂质干扰时， 一定量的样品一定量的样品提取液还原标准提取液还原标准2 2， 6-6-二氯靛酚的量二氯靛酚的量与样品中所含维生素与样品中所含维生素C C 的量成正比。的量成正比。碘量法的原理：碘量法的原理：维生素维生素 C C 包括氧化包括氧化型、型、还原型和二酮古乐糖酸三种，还原型和二酮古乐糖酸三种，当用当用碘滴定维生素碘滴定维生素C C 时，时， 所滴定的碘被维生所滴定的碘被维生素素 C C 还原为碘离子，还原为碘离子，随着滴定过程中维随着滴定过程中维生素生素 C C 全被氧化，全被氧化，所滴入的碘将以碘分所滴入的碘将以碘分子子形形式式出出现现。碘碘分分子子可可以以使使含含指指示示剂剂（淀
6、粉）（淀粉）的溶液产生蓝色，的溶液产生蓝色， 即为滴定终即为滴定终点。点。测定操作2 2，6 6 一二氯靛酚法：取适量的样一二氯靛酚法：取适量的样品可食部，加入品可食部，加入100 mL 2%100 mL 2% 草酸溶液，草酸溶液，制成匀浆。取同一样品匀浆制成匀浆。取同一样品匀浆10g10g，加入，加入1%1%草酸溶液草酸溶液 20 mL20 mL ， 摇匀，摇匀， 用滤纸过滤，用滤纸过滤，取取 5mL5mL 过滤液于锥形瓶中，用过滤液于锥形瓶中，用2 2，6 6 一一二二 氯氯 靛靛 酚酚 钠钠 盐盐 溶溶 液液 滴滴 定定 (1(1mLmL mgVitC)mgVitC) ，以淡红色存在，以
7、淡红色存在30 s30 s 内不褪色内不褪色为滴定终点。记录为滴定终点。记录2 2，6-6-二氯酚靛酚钠二氯酚靛酚钠盐溶液的消耗量，盐溶液的消耗量， 根据结果计算出样品根据结果计算出样品中维生素中维生素 C C 含量含量(mg/100 g)(mg/100 g) 。碘量法的原理：碘量法的原理：维生素维生素 C C 包括氧化包括氧化型、型、还原型和二酮古乐糖酸三种，还原型和二酮古乐糖酸三种，当用当用碘滴定维生素碘滴定维生素C C 时，时， 所滴定的碘被维生所滴定的碘被维生素素 C C 还原为碘离子，还原为碘离子，随着滴定过程中维随着滴定过程中维生素生素 C C 全被氧化，全被氧化，所滴入的碘将以碘
8、分所滴入的碘将以碘分子子形形式式出出现现。碘碘分分子子可可以以使使含含指指示示剂剂（淀粉）（淀粉）的溶液产生蓝色，的溶液产生蓝色， 即为滴定终即为滴定终点。点。荧光法测定维生素 C测定原理：DeutschDeutsch 和和 WeeksWeeks 曾经报道过一种曾经报道过一种检测维生素检测维生素C C 的荧光分析法的荧光分析法 (OPDA)(OPDA) ，并被指定为维生素并被指定为维生素C C 的经典荧光分析的经典荧光分析法。法。在该方法中，在该方法中， 维生素维生素 C C 先被活性炭先被活性炭(Norit)(Norit) 氧氧化化为为脱脱氢氢抗抗坏坏血血酸酸(DHAA)(DHAA) ，DH
9、AADHAA 再再与与荧荧光光底底物物邻邻苯苯二二胺胺(OPDA)(OPDA)结合生成荧光产物，结合生成荧光产物， 通过对该荧光产物通过对该荧光产物的检测实现对维生素的检测实现对维生素C C 的定量分析。的定量分析。孙孙振艳等振艳等 11提出了一种新的测定维生素提出了一种新的测定维生素C C 的荧光分析方法。基于维生素的荧光分析方法。基于维生素C C 被被Cu2+Cu2+氧化为氧化为 DHAADHAA，DHAADHAA 进一步与苯进一步与苯甲甲酸酸及及十十六六烷烷基基三三甲甲基基溴溴化化铵铵产产生生荧荧光协同增敏作用，光协同增敏作用， 通过对体系荧光强度通过对体系荧光强度的测定进行维生素的测定
10、进行维生素C C 的定量分析。的定量分析。测定操作：荧光分析法荧光分析法 (OPDA)(OPDA) 的测定方法：的测定方法：称称取一定量样品，取一定量样品， 研磨后用水浸泡，研磨后用水浸泡， 取清取清液加入适量液加入适量 1%1%草酸溶液，草酸溶液，振摇约振摇约 3min3min，加入加入 0.2g0.2g 已处理好的活性炭再充分振已处理好的活性炭再充分振摇约摇约 3min3min 后过滤，后过滤，滤液加于两个滤液加于两个25mL25mL比色管再加入缓冲溶液比色管再加入缓冲溶液, ,，其中一管加，其中一管加入硼酸溶液入硼酸溶液 ( (即空白即空白 ) )摇匀，放置摇匀，放置 15min15mi
11、n后，两管均加入邻苯二胺溶液后，两管均加入邻苯二胺溶液10mL10mL，避光放置避光放置30min30min 待测。样品荧光强度待测。样品荧光强度减减去去空空白白荧荧光光强强度度值值即即为为样样品品相相对对荧荧光强度值。光强度值。孙振艳等的荧光分析法：孙振艳等的荧光分析法： 在在 25 mL25 mL 比色比色管中依次加入管中依次加入0. 6 mL CuSO40. 6 mL CuSO4溶液，溶液， 2. 02. 0mLmL 十六烷基三甲基溴化铵溶液，十六烷基三甲基溴化铵溶液，2. 2. 0 0mLmL 苯甲酸溶液，一定体积的维生素苯甲酸溶液，一定体积的维生素C C标准溶液，标准溶液，5. 5.
12、 0 0 mLNaOH-mLNaOH- 邻苯二甲酸邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液，用蒸馏水定容，摇匀。氢钾缓冲溶液，用蒸馏水定容，摇匀。在在 3535恒温水浴中加热恒温水浴中加热3030 minmin，将溶，将溶液液流流水水冷冷却却至至室室温温，激激发发波波长长为为 308308nmnm，在发射波长，在发射波长 408nm408nm 处，测量荧光处，测量荧光强度强度 F F，以不含维生素以不含维生素C C 的试剂空白为的试剂空白为F0F0，计算，计算 F=F-FF=F-F 。光度分析法测定维生素 C测定原理2 2，4-4-二硝基苯肼法和钼蓝比色法是二硝基苯肼法和钼蓝比色法是常见测定维生素常见测定维生素
13、C C 的一种光度分析法。的一种光度分析法。2 2，4-4-二硝基苯肼法的原理是总维生素二硝基苯肼法的原理是总维生素C C 包包括括还还原原型型、脱脱氢氢型型和和二二酮酮古古乐乐糖糖酸，酸， 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与化为脱氢抗坏血酸，再与2 2，4-4-二硝基二硝基苯肼作用生成红色脎，苯肼作用生成红色脎， 脎的含量与总抗脎的含量与总抗坏血酸含量成正比，坏血酸含量成正比， 进行比色测定。进行比色测定。 钼钼蓝蓝比比色色法法是是测测定定果果蔬蔬中中还还原原型型维维生生素素C C 含量的一种常用方法，含量的一种常用方法， 因偏磷酸和钼因偏磷酸
14、和钼酸酸铵铵反反应应生生成成的的磷磷钼钼酸酸铵铵经经还还原原型型的的维生素维生素 C C 还原后生成亮蓝色的络合物，还原后生成亮蓝色的络合物，通通过过分分光光比比色色可可以以测测定定样样品品中中还还原原型型维生素维生素 C C 的含量。的含量。测定操作2 2，4-4-二硝基苯肼法：取适量的样品二硝基苯肼法：取适量的样品可食部，加入可食部，加入 100 mL 2%100 mL 2% 草酸溶液，制草酸溶液，制成匀浆。取匀浆成匀浆。取匀浆2020 g g ( (含含 1212 mgmg 抗坏抗坏血酸血酸) )置入置入 100100 mLmL 容量瓶中，用容量瓶中，用1%1%草草酸溶液定容，混匀后过滤
15、。取酸溶液定容，混匀后过滤。取2525 mLmL过滤液放入有过滤液放入有 2 g2 g 活性炭的活性炭的 25 mL25 mL 比色比色管中，管中，振摇振摇 1 min1 min ，过滤。过滤。然后取然后取 10 mL10 mL此氧化提取液，加入此氧化提取液，加入1010 mLmL 2%2%硫脲溶硫脲溶液，混匀。按照液，混匀。按照GB12392-90GB12392-90 中呈色反中呈色反应方法，应方法，用分光光度计进行比色，用分光光度计进行比色， 根据根据结果计算出样品中抗坏血酸含量。结果计算出样品中抗坏血酸含量。按下按下式计算样品中式计算样品中VcVc 的含量的含量 :X=c:X=cVmVm
16、F F10010001001000 。X X样品中总抗坏血酸含量，样品中总抗坏血酸含量，mg/100gmg/100g ；c c由由标标准准曲曲线线查查得得或或回回归归方方程程算算得得“样品氧化液”“样品氧化液” 总抗坏血酸的浓度，总抗坏血酸的浓度， g/mLg/mL ；V V试样用试样用1%1%草酸溶液定容的体积，草酸溶液定容的体积，mLmL；F F样品氧化处理过程中稀释倍数；样品氧化处理过程中稀释倍数；mm试样质量，试样质量， g g。钼蓝比色法：准确称取钼蓝比色法：准确称取100100 g g 样品，样品，加入草酸加入草酸 EDTAEDTA 溶液，溶液，经捣碎后移经捣碎后移入入 10010
17、0 mLmL 容量瓶，定容，过滤，吸容量瓶，定容，过滤，吸取取 2 mL2 mL上清液于上清液于50 mL50 mL容量瓶中，容量瓶中，加入加入 1 mL1 mL 的偏磷酸醋酸溶液，的偏磷酸醋酸溶液，5 5的硫酸的硫酸2 20 mL0 mL，摇匀，摇匀，加入加入 4 mL4 mL 钼钼酸铵，以去离子水定容至酸铵，以去离子水定容至5050 mLmL，2020minmin 后测定吸光度。后测定吸光度。参考文献:1.1.陈晓红陈晓红, , 碘量法测定维生素碘量法测定维生素C C含量微型实验研究含量微型实验研究. . 广东微量元素科学广东微量元素科学, 2007(03)., 2007(03).2.2.
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23、光度 法测定维多康法测定维多康 中维生素中维生素 C C的含的含 量量. . 食品食品 科学科学 , ,2004(11).2004(11).18.18.王云霞王云霞, , 张会轻与郭磊张会轻与郭磊, , 滴定法测定维生素滴定法测定维生素C C含量含量. . 河北化工河北化工, 2008(08)., 2008(08).19.19.杨新斌杨新斌, , 维生素维生素C C含量的测定含量的测定. . 四川化工与腐蚀控制四川化工与腐蚀控制, 2001(02)., 2001(02).20.20.谢志方谢志方, , 氢氧化钠两点电位滴定法测定维生素氢氧化钠两点电位滴定法测定维生素C C含量含量. . 广州化工广州化工, 2011(15)., 2011(15).