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1、内毒素培训,-吴贤锋,内毒素的基础知识,仪器试剂的简单介绍及实验原理,临床检验关心的问题,三大知识点,1892年,科学家Richard在研究霍乱弧菌的时候,发现革兰阴性菌细胞壁外膜中有一种不溶性成分,它能够引起人体发热、休克、器官损害等病理表现，因其毒性效应和性质与外毒素有显著差异，就用内毒素这一术语来描述该物质。随后多年对革兰阴性菌细胞壁外膜的超微结构技术和生物分析技术，证实内毒素是磷脂双分子层结构。,内毒素发现的历史,内毒素的组成,O特异性抗原,脂质A,核心多糖,内毒素的定义和危害,内毒素（Endotoxin）是革兰阴性菌细胞壁外膜的脂多糖（LPS）成分，是革兰阴性菌生长时释放或死亡后裂解
2、出来的毒性产物，其中起主要致病作用的是非结合的游离脂多糖（FLPS）。,内毒素能够直接作用于人体，激活组织内的炎性细胞和炎症因子，导致机体发热并产生全身性炎症反应，继而引起弥散性血管内凝血、休克、多脏器功能衰竭等严重的病理生理症状，危及生命。,定义,危害,内毒素的理化性质,可滤过性：能够穿透滤过膜,水 溶 性：LPS的O-特异性Ag呈亲水性,被吸附性：可被活性碳所吸附,易被强酸、强碱和强氧化剂破坏,耐 热 性：彻底灭活需250高温干烤一小时,人体内毒素的来源,内源性途径,外源性途径,注射药品及溶液,开放性创伤,烧伤,骨折,感染,休克,大手术术后,肝脏疾病,仪器试剂的介绍及实验原理,BET-24
3、A细菌内毒素分析仪 天津大学天大天发科技有限公司生产,人体液检测专用鲎试剂盒 湛江博康海洋生物制品有限公司生产,鲎,20世纪六十年代，人们发现一种古老的海洋生物，被称为“海洋活化石”的鲎，它的血液与内毒素接触后会发生特异性的凝集反应，人们经过大量研究和实验从它的血液中提取出了用来检测内毒素的“鲎试剂”。,鲎试剂的发明,1968年1月Jack Levin和 Frederik B.Bang教授在美国马塞诸塞州Wools Hole海洋生物实验室成功分离提取鲎血细胞并研制成能够检测细菌内毒素的鲎试剂，开辟了人类认识和检测内毒素的新纪元！,试剂盒特点,鲎试剂是唯一能够检测内毒素水平的生物试剂,采用更为准
4、确的动态浊度法进行检测,鲎试剂盒由鲎试剂、I号II号检测前处理液、除菌除热原试管和采血管、吸头及检测用水组成,精心设置血液前处理流程，有效去除血细胞和蛋白的干扰，准确评估待测样本中的内毒素水平,采用内毒素国家工作标准品进行质控测评，保证检测结果准确无误,采用国际通用的内毒素活性单位（EU/ml）来准确衡量待测样本中的内毒素致病效能,内毒素的单位EU/ml,实验原理,通过鲎试剂与内毒素溶液混合会发生凝集反应产生浊度变化，通过浓度时间反应曲线，得出待测样品的内毒素浓度；,实验原理,实验原理,鲎试剂与内毒素反应是特异性的“S”曲线，取光密度值为0.02点时作为反应终点时间，内毒素的浓度与反应时间成反
5、比,BET检测标本范围,腹腔积液,检测内毒素的方法,定性检测,凝胶法,定量检测,光度（浊度）法,显色（比色）法,动态浊度法,终点浊度法,动态显色法,终点显色法,几种检测方法的比较,凝胶法检测的特点 “限量”检测，是一种传统经典的检测方法； 凝胶法是以试管内反应物凝胶牢固程度为判断标准，易受人为因素影响； 限量检查的最低检测限仅为0.035EU/ml，因供试品稀释倍数所限，容易被供试品干扰，误差大。因此，凝胶法不适合在临床用于体液的细菌内毒素检查；,显色法检测的特点 显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法，根据产物颜色判断内毒
6、素浓度。 此法试剂较昂贵，操作较复杂，在一定范围之内灵敏度、特异性较高，但检测范围窄；,动态浊度法检测的特点,动态浊度法检测的特点,利用细菌内毒素在与鲎试剂形成凝胶过程中浊度动态变化定量测定细菌内毒素水平,动态浊度法法检测范围宽，检测范围为 0.005EU/ml 100EU/ml，应用范围广,对样本的内毒素含量可以定量检测，标准化程度高，适合用于临床体液细菌内毒素引起发热及重症疾病的早期诊断检测,发热原因的快速辅助诊断（ 1小时）,内毒素定量检测的临床意义,早期判断革兰阴性菌的感染情况,（G菌所致）重症疾患的早期诊断,帮助临床医生快速合理筛选适当的抗生素,判断抗感染治疗效果及预后,肠源性内毒素
7、血症的预判及评估,恶性肿瘤,感染,结缔组织,G,G+,发热,发热原因的快速辅助诊断,病毒,真菌等,细菌,帮助临床医生快速筛选合理抗生素,G,内毒素,氨基糖甙类,第82回日本泌尿器科学会 1994.4,内毒素检测与微生物培养的关系,内毒素与血培养的结果比较,内毒素超标,血培养阳性,内毒素与痰培养的结果比较,BET和PCT(降钙素原)的区别,PCT本身无致病作用，而LPS能直接导致人体发热及产生炎症反应,PCT也是在以LPS为首的炎症因子作用下刺激机体靶细胞产生,PCT仅能判断是否是细菌感染，BET能判断是否为G菌感染，检测更精准,对于某些肿瘤患者、新生儿及接受移植手术患者而言，如感染则检测PCT有制约，而BET对此毫无制约,分段区间的解释,00.035EU/ml 无明显内毒素血症,0.035 0.1EU/ml 临床观察期,0.1 1.0EU/ml 内毒素血症,大于1.0EU/ml 重度内毒素血症,BET测得值的影响因素有那些,外源性的内毒素侵入,患者肝功能,血细胞及免疫系统,患者肠道的屏障功能,G感染及使用抗生素杀灭G内毒素的释放,内毒素血症的预防和治疗,总体原则： 减少吸收、促进排泄、治疗原发病、增强免疫力,针对病原菌合 使用敏感抗生素,尽量避免减少肠源性内毒素血症的发生,拮抗内毒素治疗,抗氧自由基及炎性因子治疗,保护肝脏治疗,积极治疗原发病及改善微循环,谢谢,