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1、模块检测卷（四）（教师独具）（时间：90分钟分数：100分）1.（8分）（2021山西长治六联）乳头瘤病毒（HPV）可导致人患宫颈癌，科研人员将 HPV某外壳蛋白A基因构建成表达载体，经包装或直接注入体内，表达出相应 抗原，诱导机体产生免疫反应。该方法获得的疫苗称为DNA疫苗。请回答下列 问题：获取A基因的方法：方法一：提取HPV的DNA,利用PCR技术扩增A基因时，至少经过 次循环才能获得该基因，此过程中利用的原料是。 方法二：从宿主细胞中提取总RNA,以与 互补的一段单链DNA作为引物，加入 酶获得cDNA,然后经PCR技术扩增获得大量的A基因。（2）构建基因表达载体时，常用不同的限制酶切
2、割质粒与目的基因，其具备的优 势是 o（3）DNA疫苗是预防性生物制品，与传统疫苗相比其具备的优点有 （至少一点），而单克隆抗体作为治疗性生物制品，具备的优点 是，制备单克隆抗体需要以 技术为基础。2.（8分X2021.宁夏统考）基因工程又称基因拼接技术或DNA重组技术，是以分子 遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段的技术。如图是 基因工程示意图，请据图回答下列问题:w + 载体DNA （已切开）w + 载体DNA （已切开）转基因生物（1）从基因文库中提取的目的基因通过PCR技术进行扩增时，所用的酶与细胞内 同类酶的差异在于该酶 o（2）进行过程时，需用 酶切开载体以插入
3、目的基因。若要使目的基因I切割。（5）图3中质粒上的抗生素抗性基因属于标记基因，其作用是筛选出含 有目的基因的受体细胞。（6）将转基因棉花种植在盐碱地中，观察其生长状况， 属于个体水平的检测。5 .（1）果实比较大、营养物质含量增加脱分化再分化（一定的）全能性（或形成 完整植株所需的全部基因）（2）分生区（如茎尖）部位核DNA进行抗病毒的接 种实验（3）分生（或分裂）（4）不能植物细胞外面有一层细胞壁，阻碍细胞间的 杂交（融合）解析（1）野生草莓往往是二倍体，而人工栽培的草莓往往是通过特殊技术培育 成的多倍体，这利用了多倍体植株的果实比较大、营养物质含量增加的特点；但 多倍体草莓的繁殖往往是无
4、性繁殖，即使外植体细胞经历脱分化与再分化过程成 为试管苗。该技术证明了已分化的植物细胞仍具有（一定的）全能性。（2）草莓植株 感染病毒后会出现结果减少，品质变劣。若要恢复其品质，可选取植物的分生区 （如茎尖）部位进行植物组织培养，获得脱毒苗。此外，也可将抗病毒基因成功导 入受体细胞细胞核中并培养出转基因抗病毒草莓植株。为了检测抗病毒基因是否 存在于该转基因植物的所有组织细胞中，需分别提取该转基因植物的所有组织细 胞中的核DNA与基因探针杂交；欲从个体生物学水平来鉴定抗病毒基因是否赋 予该植物抗病特性的操作是进行抗病毒的接种实验。（3）在植物组织培养过程中， 由于培养细胞一直处于分生（分裂）状态
5、，可以对植物的愈伤组织进行诱变处理, 促使其发生突变，再进一步培养筛选获得草莓新品种。（4）若想利用植物体细胞 杂交技术培养出马铃薯一草莓杂种植物以提高土地的利用率，不能把两物种细胞 直接融合，原因是植物细胞外面有一层细胞壁，阻碍细胞间的杂交（融合）。6 .（1）灭活的HPV或HPV的抗原蛋白 核糖体、内质网、高尔基体、线粒体 （2）无限增殖PEG、灭活的病毒、电激杂交瘤细胞不一定使每个孔内的细胞不多于一个，从而达到克隆化培养 的目的解析 制备抗HPV的单克隆抗体时，给小鼠注入的抗原是灭活的HPV或HPV 的抗原蛋白。小鼠体内能产生抗体的细胞是浆细胞，浆细胞中参与抗体合成和分 泌的细胞器有核糖
6、体、内质网、高尔基体和线粒体。（2）小鼠骨髓瘤细胞具有无 限增殖的特点。B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合时，常用的诱导因素有PEG、灭活 的病毒、电激等。（3）在HAT培养基上能够连续增殖的细胞是杂交瘤细胞，该细 胞所产生的抗体不一定抗HPV,因为从小鼠体内获得的能产生抗体的浆细胞不 一定是专门针对HPV的，也有可能是其他抗原刺激后产生的，浆细胞产生的抗 体是否是抗HPV抗体，还需要进行检测。单克隆抗体是由单一 B细胞克隆产生 的、仅针对某一特定抗原的抗体，对抗HPV抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞进行 克隆化培养时，先将培养液中的细胞浓度稀释到310个/mL,然后在多孔细胞 培养板的每个孔中只能加入0.
7、1mL细胞稀释液，不能多加，因为多于0.1mL的 细胞稀释液中可能含2个或更多个细胞，这样每个孔内的细胞就不是一个，就达 不到克隆化培养的目的。7 .（1）动物细胞培养发育培养液（2）显微注射维持稳定和表达（3）滋养层 DNA分子杂交技术（4）自我调节 整体性解析（1）动物细胞培养是动物细胞工程的基础，在培育转基因克隆绵羊过程中， 应用到的细胞工程技术有动物细胞培养和核移植。核移植后的受体细胞利用物理 或化学方法被激活后，应移入发育培养液中继续培养，以检查其发育能力，为后 续的培养做准备。（2）将目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射技术，使 目的基因进入受体细胞，并且在受体细胞内维持稳定和
8、表达的过程，称为转化。 若要鉴别XY型性别决定的动物胚胎的性别，通常在该种动物囊胚期，提取 其滋养层细胞DNA,然后用丫染色体上特异性DNA作探针，与滋养层细胞DNA 混合进行检测，以确定待检的滋养层DNA中是否含有Y染色体上特异性的DNA, 该技术称为DNA分子杂交技术。（4）人们为了摄取omega3,过度捕杀深海鱼， 同时环境污染等问题也严重破坏了海洋生态系统，导致海洋生态系统的自我调节 能力下降。为了改善海洋环境，实现海洋渔业可持续发展，建造海底人工鱼礁， 不仅需要对破坏的生态环境进行恢复，还要考虑当地人的经济发展和生活需要， 经济和生态治理两不误是生态工程的整体性原理的核心内容。8 .
9、（1）垂直（2）阳光（或光照强度）（3）影响种群繁衍（4）间接价值直接解析（1）生态浮床上的植物可供鸟类筑巢，下部根系形成鱼类和水生昆虫的栖 息环境，表现为垂直分层现象，属于群落的垂直结构。（2）藻类植物的正常生长 要进行光合作用，浮床能遮挡阳光，下方阳光较弱从而抑制藻类繁殖，防止水华 发生。（3）夏季，湖泊中的蛙声是求偶信息，体现了生态系统的信息传递具有影 响种群繁衍作用。（4）生物多样性的间接价值也叫生态功能，生态浮床净化水质、 防治水华的作用属于生物多样性的间接价值；生物多样性的直接价值指对人类有 食用、药用和工业原料等实用意义的，以及有旅游观赏、科学研究和文学艺术创 作等非实用意义的价
10、值，生态浮床美化环境的价值属于生物多样性的直接价值。 9.（1）物质循环生态环境（2）协调与平衡生产另一种产品的原料（或另一种产 品的投入）（3）分解 秸秆不直接焚烧，而用于培育食用菌、生产沼气（合理即可） 解析（1）生态农业的建设是一种生态工程，生态工程建设的目的就是遵循自然 界物质循环的规律，充分发挥资源的生产潜力，防止环境污染，达到经济效益和 生态效益的同步发展。（2）在进行生态工程建设时，要考虑环境承载力，处理好 生物与环境的协调与平衡，这体现了生态工程的协调与平衡原理。这种生产模式 对环境的污染小，因为生产一种产品时产生的有机废物变成了生产另一种产品的 原料。（3）沼气池中的微生物通
11、过分解作用分解了粪便，从而产生沼气。秸杆燃 烧能量利用效率低，而秸秆用于培育食用菌、生产沼气可以提高能量利用效率， 从而使能量需求一定时二氧化碳释放减少。10 .（1）限制性核酸内切酶（限制酶）Cas9-sgRNA复合体（2）sgRNA（是单链）可与特定（靶）核甘酸序列发生碱基互补配对（答出互补配对即 可，sgRNA是单链不作要求）维持培养液的pH具有（发育的）全能性（4）（动物体细胞）核移植技术该器 官的遗传物质与原机体基本相同，进入机体后，不会成为抗原，不会发生免疫排 斥（答出遗传物质与原机体基本相同即可）解析（l）DNA重组技术主要用到的工具酶包括DNA连接酶和限制性核酸内切 酶（限制酶
12、）；图中Cas9 sgRNA复合体可以充当限制酶。（2）Cas9sgRNA复合 体能够精确识别某核甘酸序列的原因可能是sgRNA能与特定的核甘酸序列发生 碱基互补配对。（3）重组细胞体外培养需要一定的02和CO2, CO2的主要作用是 维持培养液的pH；胚胎干细胞的功能特性是具有发育的全能性，在培养液中加 入分化诱导因子，可以诱导胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化。（4）由题意 知，将病人的体细胞核放入去核的卵母细胞中，让重组细胞发育为早期胚胎，利 用胚胎干细胞诱导分化为特定的器官，该过程的核心技术是动物体细胞核移植技 术。由于该器官的遗传物质与原机体基本相同，该器官进入机体后不会成为抗原，不
13、会发生免疫排斥反应，故利用这种方法获得的器官移植时不会发生免疫排斥反 应。11 .（1）减数第二次分裂中（MH中）（2）磷酸二酯键平（3）发育培养液维持培 养液的pH胚胎移植（4）如图所示体细胞核去核卵体细胞核去核卵Z症跺猴的核移植后重组代孕z症 的细胞胚胎琳猴除猴母细胞解析（1）采集的卵母细胞需在体外培养到减数第二次分裂中期才能与获能的精 子受精。（2）由题意可知,Cas9蛋白能在特定部位切割SHANK3基因，使SHANK3 基因特定部位的两个核甘酸之间的磷酸二酯键断开；由图分析可知，SHANK3 基因在Cas9蛋白的作用下产生了具有平末端的DNA片段。（3）精子与卵子在体 外受精后，应将受
14、精卵移入发育培养液中继续培养，以检查受精状况和受精卵的 发育能力。该过程通常需要维持一定的CO2浓度，C02的作用是维持培养液的 pHo丙表示的过程是胚胎移植。（4）由以上技术获得的Z症欷猴，可通过体细胞 核移植技术得到克隆Z症猫猴，其基本程序如图：体细胞核去核卵Z症琳猴的核移植后重组代孕Z症 的细胞胚胎舜猴跺猴母细胞在受体细胞中表达，需要通过表达载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原 因是（答出两点即可）。若图中宿主细胞为大肠杆菌，一般情况下过程不能直接用未处理的大肠杆 菌作为受体细胞，原因是;已转化 的宿主细胞（大肠杆菌）指的是。（4）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞内表达时，表达
15、出的蛋白质可能会被 降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用 的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加 的抑制剂。3 .（8分X2021江西临川一中模拟）为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序,科学家 研制出基因工程乙肝一百白破（rHB DTP）四联疫苗，经各项检测均通过rHB- DTP四联疫苗制检规程的标准。四联疫苗的有效成分是乙肝病毒表面抗原、百 日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风杆菌的四种类毒素。请分析回答下列问题：为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应 ,在 酶的作用下合成双链cDNA片段，获得的cDNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列（填“相同”或“不同”）。由于
16、乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小，且序列已知，因此获得目的基因 可采用 方法合成，然后通过 大量扩增，此技术的前提是，以便合成引物。研究发现，如果利用蛋白质工程将白喉杆菌类毒素第20位和第24位的氨基 酸改变为半胱氨酸，免疫效果更好。此种技术的基本途径：从预期的蛋白质功 能出发；设计预期的蛋白质结构；;找到相对 应的脱氧核甘酸序列。4 .（8分）（2021江苏南京一模）径柳匙叶草是一种泌盐植物，科研工作者将径柳匙叶 草液泡膜Na+/K+逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到棉花细胞内，获得了转 基因耐盐棉花新品种。图1是获取的含有目的基因的DNA片段，Sa3A 1、EcoRI BamH I
17、为三种限制酶，图中箭头所指为三种酶的酶切位点；图2是三种限 制酶的识别序列与酶切位点示意图；图3是土壤农杆菌中用于携带目的基因的 Ti质粒结构示意图。请分析回答问题：Bam H I A I Bam H I.EcoRBam HSu3A 1 目的基因EcoR IEcoR ISaw3A抗生素抗性基因图3-GAATTC-CTTAAG-I tGGATCC-CCTAGGI trGATCCTAG t图2若图1所示DNA片段是利用径柳匙叶草的DNA直接获得的，则该获取目的 基因的方法为。不能在径柳匙叶草根尖分生区细胞中获得TaNHX2基因的mRNA,其原因(3)若用BamH I切割图1所示的DNA片段，获得目
18、的基因，则需选用切割图3所示质粒，以便构建基因表达载体，该方案的缺陷是 。故切割图1所示DNA片段的最 佳方案是选用。(4)用上述最佳方案构建基因表达载体，所得重组质粒(填“能”“不能” 或“不一定能)被痴nH I切割。图3中，质粒上的抗生素抗性基因的作用是 o(6)为了检测技术成果，科研工作者将转基因棉花种植在盐碱地中，观察其生长 状况，这属于 水平的检测。5.(8分)(2021广东惠州调研)草莓芳香浓郁，营养丰富。请回答下列与草莓栽培有 关的问题。(1)野生草莓往往是二倍体，而人工栽培的草莓往往是通过特殊技术培育成的多 倍体，这利用了多倍体植株 的特点；但多倍体草莓的繁殖往往是无性繁殖，即
19、使外植体细胞经历 与 过程，成为试管苗。该技术证明了已分化的植物细胞仍具有 o草莓植株感染病毒后会出现结果减少，品质变劣。若要恢复其品质，可选取 植物的 进行植物组织培养，获得脱毒苗。此外，也可将抗病毒基因成功导入受体细胞细胞核中并培养出转基因抗病毒草莓植株。为了检测抗病毒基因是 否存在于该转基因植物的所有组织细胞中，需分别提取该转基因植物的所有组织 细胞中的（填“蛋白质”“总RNA”或“核DNA”）与基因探针杂交； 欲从个体生物学水平来鉴定抗病毒基因是否赋予该植物抗病特性的操作是 在植物组织培养过程中，由于培养细胞一直处于 状态，可以对植物 的愈伤组织进行诱变处理，促使其发生突变,再进一步培
20、养筛选获得草莓新品种。 （4）若想利用植物体细胞杂交技术培养出马铃薯一草莓杂种植物以提高土地的利 用率，（填“能”或“不能”）把两物种细胞直接融合，理由是6.（8分）（2020广西南宁二诊）人乳头状瘤病毒（HPV）与宫颈癌的发生密切相关，抗 HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV,从而及时监控宫颈癌的发生。回答下 列问题：某种淋巴细胞 （产生特异抗体）将特定的抗 原注入小鼠小鼠骨髓瘤细胞:.（不能在HAT培选育出产生 特异性强的 抗体的细胞选育出产生 特异性强的 抗体的细胞杂交痛 细胞分开培养“养基上生长）混合并进 行细胞融合，转到杂交瘤 HAT培养细胞生长 基上培养（1）制备抗HPV的单克隆
21、抗体时，给小鼠注入的抗原是 ，然后从小鼠体内获得能产生相应抗体的细胞，这种 细胞内参与抗体合成和分泌的细胞器有。制备单克隆抗体过程中用到了小鼠的骨髓瘤细胞，这是因为该细胞具有 的特点。B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合时，常用的诱导因素有 等。在HAT培养基上能够连续增殖的细胞是,该细胞所产生的抗体 （填“一定”或“不一定”）能抗HPV。对抗HPV抗体检测呈阳性的杂 交瘤细胞进行克隆化培养时，先将培养液中的细胞浓度稀释到310个/mL, 然后在多孔细胞培养板的每个孔中只能加入0.1 mL细胞稀释液，绝对不能多加, 原因是。7.（8分）（2020陕西榆林三模）某基因研究院培育出了转基因克隆绵羊，该绵羊能
22、合 成深海鱼体内富含的不饱和脂肪酸omega3。（1）在培育转基因克隆绵羊过程中，应用到的细胞工程技术有 和核移植。核移植后的受体细胞利用物理或化学方法被激活后，应移入 中继续培养，以检查其发育能力。科研人员将omega3合成酶的基因片段导入受体细胞常采用 技术,使目的基因进入受体细胞，并且在受体细胞内 的过程，称为转化。若要鉴别XY型性别决定的动物胚胎的性别可以获取该种动物囊胚的 细胞，并提取其DNA,用丫染色体上特异性DNA作探针检测，这种 技术称为。（4）目前，人们主要通过食用深海鱼肉摄取omega3,由于人们过度捕杀深海鱼， 同时环境污染等问题也严重破坏了海洋生态系统，使生态系统的 能
23、力下降。为了改善海洋环境，实现海洋渔业可持续发展，建造海底人工鱼礁，不仅需 要对破坏的生态环境进行恢复，还要考虑当地人的经济发展和生活需要，这主要 遵循了生态工程的 原理。生态浮床定期收割或不收 割形成自然浮床8.（8分）（2021江苏扬州中学模拟）生态浮床技术是一个综合了物理、化学、生物方 法的水环境原位生态修复过程，它利用水生植物及根系微生物吸收N、P元素, 同时可降解有机物和重金属，并以收获植物体的形式将其搬离水体，保护了水体 生态环境，实现了景观效益和生态功能的双赢。下图为某湖泊应用生态浮床技术 的示意图，请回答相关问题：遮蔽阳足抑制藻类生长根系富集的微生物 将污染物生化降解 浦类或氮
24、磷营养物根系吸收或吸附 /草食性鱼生态浮床上的植物可供鸟类筑巢，下部根系为鱼类和水生昆虫提供了栖息场所，这体现了群落的 结构。浮床下方水体中藻类植物的数量低于无浮床的水域，这主要是受（环境因素）的影响，因此，浮床在一定程度上能够抑制藻类的生长繁殖，防止水华发生。夏季，湖泊中”听取蛙声一片”，这体现了生态系统的信息传递具有 作用。（4）生态浮床既能净化水质、防治水华，又能美化环境，这体现了生物多样性的 、价值。9.（12分）（2021广东三校联考）生态农业是按照生态学原理和生态经济规律，因地 制宜地设计、组装、调整和管理农业生产和农村经济的系统工程体系。如图为某 地区建立的生态农业模式示意图。回
25、答下列问题：饲料家自食用菌沼渣沼液作肥料粘杆 沼气池沼气池农作物（1）生态农业的建设要遵循自然界 的规律，不但要重视对 的保护，更要注重与经济、社会效益的结合。该生态农业模式的建立不但要考虑到自然生态系统的规律，还要考虑到经济 与社会等系统的影响力，这体现了生态工程的 原理。这种生产模式对环境的污染小，因为生产一种产品时产生的有机废物变成了 0人和动物的粪便进入沼气池后，通过沼气池中微生物的 作用可以产生沼气。“低碳”指较低的温室气体（二氧化碳等）排放，请指出图中体现“低碳”的一个做法：O.（12分）（2021.广东惠州调研）人体移植器官短缺是一个世界性难题。但随着生物 技术的发展，人们逐渐有
26、了新的解决思路：I .寻求可替代器官剔除猪的某些基因，用猪的器官作为供体。目前科学家借助CRISPR/Cas9基因 编辑技术能够剔除猪的某些相关基因，如图为Cas9蛋白依据sgRNA片段切割Cas9蛋白sgRNA靶核酸分子DNA的示意图（不同的sgRNA可以识别不同的DNA序列），请回答下列问题:自发组复合体白发J找结令 a切割靶核酸分子 Cas9sgRNA复合体（l）DNA重组技术主要用到的工具酶包括DNA连接酶和,图 中充当该酶的物质是 O（2）Cas9-sgRNA复合体能够精准识别某核甘酸序列的原因可能是。H.自体器官培养大体思路是：将病人的体细胞核放入去核的卵母细胞中，让重组细胞发育为
27、早期 胚胎，利用胚胎干细胞诱导分化为特定的器官。重组细胞体外培养需要一定的02和CO2,CO2的主要作用是胚胎干细胞的功能特点为 o该过程的核心技术是 o这种方法获得的器官移植时不会发生免疫排斥反应，这是因为 O10 .（12分）（2021云南昆明诊断）科学家利用CRISPR/Cas9基因编辑系统成功改造 了骄猴基因组中与某病症（Z症）相关的SHANK3基因，制备出Z症非人灵长类动 物模型，为该病的研究和治疗奠定了重要基础。操作过程如图：将精子注入将CRISPR/Cas9注入代孕琳猴Z症琳猴进行甲过程前，采集的卵母细胞需在体外培养到 期才能与获能的精子受精。将CRISPR/Cas9基因编辑系统
28、注入受精卵后，Cas9蛋白能在特定部位切割 SHANK3基因（下图虚线所示），使该基因特定部位的两个核甘酸之间的 断开，经其切割后产生具有 末端的DNA片段。TGGCCTCAT;TGTrrGTGCAACCGGAGTAjACAACACGI,ir G G C C r C A T T G T T G T G C A ACCGGAGTA ACAACACGT（3）乙过程应将受精卵移入 中继续培养,该过程通常需要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是 o丙表示的过程是 O（4）由以上技术获得的Z症舜猴，可通过体细胞核移植技术得到克隆Z症称猴， 请写出基本程序（用流程图表示）。参考答案1 .（1）3四种游离的
29、脱氧核昔酸（dNTP）A基因的mRNA（或A基因转录出 的mRNA）逆转录（或反转录）可避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接（3）作用时间长、更安全、结 构简单、更容易保存 特异性强、灵敏度高，可大量制备 动物细胞培养和动物 细胞融合解析（1）方法一：根据PCR技术的特点，至少需要3次循环才能获得目的基 因；PCR技术的实质是DNA体外复制过程，因此需要四种游离的脱氧核甘酸为 原料；方法二：利用逆转录方法获得目的基因，应以RNA为模板，以与目的 基因的mRNA碱基互补的一段单链DNA为引物，在逆转录酶（或反转录酶）的作 用下获得cDNA,再在酶的作用下进行扩增。（2）同种限制酶切割的黏性末端
30、 相同，易发生目的基因与质粒间的任意连接及目的基因与质粒的自身环化现象, 用不同限制酶可防止以上现象的发生。（3）DNA疫苗具有作用时间长、更安全、 结构简单、更容易保存等特点；单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高，可大量制 备等特点；一般情况下制备单克隆抗体需以动物细胞培养和动物细胞融合技术为 基础。2 .（1）耐高温（或具有热稳定性）（2）限制（或限制性核酸内切）目的基因无复制原点、目的基因无表达所需的启动 子、目的基因无表达所需的终止子（3）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力弱 已导入目的基因并且目的 基因能稳定遗传和表达的细胞（4）蛋白酶缺陷型蛋白酶解析（1）利用PCR技术扩增目
31、的基因需要特殊的耐高温的DNA聚合酶。（2）在 构建基因表达载体时，需用限制酶将载体切开，以便目的基因的插入；无复制原 点、无表达所需启动子和终止子的目的基因直接导入受体细胞是无法表达的，只 有构建成基因表达载体才能在受体细胞中表达。（3）经钙离子处理成为感受态细 胞的大肠杆菌，吸收外源DNA的能力强；已转化的宿主细胞（大肠杆菌）指的是 已导入目的基因并且目的基因能稳定遗传和表达的细胞。（4）真核生物基因（目的 基因）在大肠杆菌细胞内表达时，表达的蛋白质可能会被降解，为防止蛋白质被 降解，可以选用不能产生该蛋白酶的缺陷细菌以及使用能够抑制该蛋白酶活性的 药物，因此在实验中应选用蛋白酶缺陷型的大
32、肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯 化的过程中应添加蛋白酶的抑制剂。3 .（l）mRNA逆转录不同（2）化学PCR技术要有一段已知目的基因的核 昔酸序列（3）推测应有的氨基酸序列解析（1）为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应 mRNA,在逆转录酶的作用下合成双链cDNA片段，获得的cDNA片段只包含 基因的编码区，没有非编码区，因此与百日咳杆菌中该基因碱基序列不同。（2） 如果基因比较小，核甘酸序列又已知，可以通过DNA合成仪用化学方法人工合 成；然后通过PCR技术大量扩增，PCR技术的前提是要有一段已知目的基因的 核甘酸序列，以便根据这一序列合成引物。（3）蛋白质工程的基
33、本途径：从预期 的蛋白质功能出发一设计预期的蛋白质结构一推测应有的氨基酸序列一找到相 对应的脱氧核甘酸序列。4 .从基因文库中获取（2）基因的选择性表达（或径柳匙叶草根尖分生区细胞中 的TaNHX2基因不能表达）（3）Sqn3A I会出现目的基因和质粒的自我环化、 目的基因在质粒上的连接方向不确定EcoR I和及zmH I （4）不一定能（5） 筛选出含有目的基因的受体细胞（6）个体解析（1）目的基因的获取方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工 合成。利用径柳匙叶草的DNA直接获得目的基因的方法为从基因文库中获取。 （2）径柳匙叶草根尖分生区细胞中TaNHX2基因不能表达，故不能在径
34、柳匙叶草 根尖分生区细胞中获得TaNHX2基因的mRNA。（3）由图2分析可知，用Sau3A I 与BamH I酶切后产生的黏性末端相同，故若用BamH I切割图1所示的DNA 片段获得目的基因，则需选用So”3A I切割图3所示质粒，以便构建基因表达 载体，该方案由于酶切后的目的基因和质粒两端的黏性末端相同，故容易出现目 的基因和质粒的自我环化、目的基因在质粒上的连接方向不确定的缺陷。为了防 止目的基因和质粒的自我环化以及目的基因反接，可选用EcoR I和及?根H I同 时切割图1所示的DNA片段。（4）用EcoR I和BamH I酶切图1所示DNA片 段，用Sa3A I、EcoR I酶切图3所示质粒，然后再用DNA连接酶连接在一起 形成的序列不一定还是amH I的识别序列，故所得重组质粒不一定能被