《临床样本的采集运输和保存及核酸提取.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床样本的采集运输和保存及核酸提取.ppt（63页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、现在学习的是第1页，共63页研究背景研究背景一、样本的采集、处一、样本的采集、处 理、保存及运输理、保存及运输现在学习的是第2页，共63页现在学习的是第3页，共63页（一）、样本的采集（一）、样本的采集地贫检测样品采集：地贫检测样品采集：l 外周血外周血: 5mLl 脐带血脐带血: 0.51mLl 羊羊 水：水：2030mLl 绒绒 毛：毛：15mgl 唾唾 液液l 组组 织织现在学习的是第4页，共63页现在学习的是第5页，共63页现在学习的是第6页，共63页现在学习的是第7页，共63页现在学习的是第8页，共63页现在学习的是第9页，共63页现在学习的是第10页，共63页研究背景研究背景 二、
2、核酸的提取二、核酸的提取现在学习的是第11页，共63页现在学习的是第12页，共63页现在学习的是第13页，共63页现在学习的是第14页，共63页细胞破碎方法细胞破碎方法 应用应用 机械法机械法1.1.匀浆法匀浆法机体软组织机体软组织2.2.捣碎法捣碎法动物韧性组织动物韧性组织3.3.研磨法研磨法细菌、酵母细菌、酵母 物理法物理法1.1.超声法超声法细胞混悬液细胞混悬液2.2.反复冻融法反复冻融法培养细胞培养细胞3.3.冷热交替法冷热交替法细菌、病毒细菌、病毒4.4.低渗裂解低渗裂解红细胞红细胞 化学法化学法1.1.有机溶剂有机溶剂细菌、酵母、血液细菌、酵母、血液2.2.去垢剂去垢剂组织、培养细
3、胞、组织、培养细胞、血液血液3.3.酶解法酶解法细菌、酵母、血液细菌、酵母、血液现在学习的是第15页，共63页现在学习的是第16页，共63页现在学习的是第17页，共63页现在学习的是第18页，共63页(A值等于1时，相当于50g/ml双链DNA， 40g/ml单链DNA或RNA，20g/ml单链寡核苷酸）现在学习的是第19页，共63页现在学习的是第20页，共63页现在学习的是第21页，共63页EB与DNA的结合现在学习的是第22页，共63页A260/A280比值是纯度检测的重要指标！比值是纯度检测的重要指标！现在学习的是第23页，共63页现在学习的是第24页，共63页DNA完整性鉴定：完整性鉴
4、定：现在学习的是第25页，共63页 正常时，正常时，28S RNA的荧光强度约的荧光强度约为为18S RNA的的2倍倍，否则提示，否则提示RNA的的降解降解RNA完整性鉴定：完整性鉴定：现在学习的是第26页，共63页现在学习的是第27页，共63页现在学习的是第28页，共63页现在学习的是第29页，共63页现在学习的是第30页，共63页抗凝剂处理血肝素柠檬酸*EDTA*-80保存2个月，第10天收率90%4 第四天收率90%第10天提取效果差第十天收率85%室温提取效果差第四天收率90%第十天提取效果差现在学习的是第31页，共63页现在学习的是第32页，共63页酚酚抽抽提提法法提提取取步步骤：骤
5、：现在学习的是第33页，共63页DNA酚抽提法示意图现在学习的是第34页，共63页现在学习的是第35页，共63页现在学习的是第36页，共63页现在学习的是第37页，共63页现在学习的是第38页，共63页现在学习的是第39页，共63页现在学习的是第40页，共63页现在学习的是第41页，共63页现在学习的是第42页，共63页现在学习的是第43页，共63页现在学习的是第44页，共63页影响影响DNA质量的因素质量的因素现在学习的是第45页，共63页现在学习的是第46页，共63页现在学习的是第47页，共63页现在学习的是第48页，共63页组织材料组织材料起始样品量起始样品量Total RNA提取量提取
6、量blood1ml1520gleukocytes110107 7个个约约100 gLiver tissue1g约约5000 gCulture cells110107 7个个约约100gRenal tissue1g约约3000gSkeleton tissue1g约约1500gCerebral tissue1g约约1500g现在学习的是第49页，共63页现在学习的是第50页，共63页现在学习的是第51页，共63页1. 内源性内源性RNA酶（酶（intrinsic RNase）现在学习的是第52页，共63页现在学习的是第53页，共63页现在学习的是第54页，共63页OC-CH2-CH3OC-CH2-
7、CH3O=DEPC水制备：0.1%DEPC在37C处理1h，并高压灭菌15min。玻璃制品和塑料制品应浸泡在0.1%的DEPC水溶液中， 37C处理1h或室温下过夜。DEPC非选择性的修饰蛋白质和非选择性的修饰蛋白质和RNA，且与一些缓冲液不相容，且与一些缓冲液不相容，故在分离和纯化，故在分离和纯化RNA的过程中不使用的过程中不使用DEPC现在学习的是第55页，共63页现在学习的是第56页，共63页现在学习的是第57页，共63页现在学习的是第58页，共63页现在学习的是第59页，共63页现在学习的是第60页，共63页现在学习的是第61页，共63页现在学习的是第62页，共63页现在学习的是第63页，共63页