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1、乙骨钙素1. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。第1步：20ml标本、生物素化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗N-MID骨钙素单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：Li-肝素、EDTA
2、-K3 抗凝。注意：避免溶血，因为血细胞含有的蛋白酶可分解骨钙素。建议立即离心血标本。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。浓度1.5mg/l，磷酸缓冲液0.01mol/l，pH6.0。含防腐剂。R2：Ru(bpy)32化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml，浓度1.3mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.0。含防腐剂。校准品：El
3、ecsys N-MID骨钙素定标液（ N-MID osteocalcin CalSet）货号质控品：Elecsys 骨标志物质控品（PreciControl Bone）1，2和3货号其他所需材料： Elecsys通用稀释液货号 Elecsys1010或2010分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号 Elecsys 清洗添加剂液（SysWash）货号 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号 Elecsys 系统清洗液支架（Adapter for SysClean) ）货号 Elecsys 1010反应杯（Assa
4、y Cup) 货号Elecsys 2010反应杯（Assay Cup) 货号 Elecsys 2010吸样头（Assay Tip) 货号4. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批N-MID骨钙素试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用N-MID骨钙素CalSet定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：Elecsys2010：一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）Elecsys1010：每一试剂盒做一
5、次 7天（室温2025度） 3天（室温25-32度）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。5. 操作方法按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。Elecsys2010：将冷藏试剂预温到20 度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。Elecsys1010：将冷藏试剂预温到2025度后放置于仪器的样品/试剂盘上（室温2025度），避免产生泡沫。使用前手工打开试剂瓶
6、盖，使用后手工关闭试剂瓶盖并放回28度。6. 质量控制各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法对每一个标本，仪器会自动计算N-MID骨钙素含量，单位是ng/ml。8. 参考范围9. 分析性能准确性：以下列出了此试剂盒在Elecsys仪器上的表现。每个实验室结果会不同。重复性测定采用的是美国临床化学实验室标准委员会修订稿EP5-A标准方法进行评估，使用了Elecsys试剂及人血清池、质控进行测定：连续测定10天，每天测定6次（n60次）；E17
7、0的批内重复性共测定了21次。结果如下分析灵敏度（最低检测限）： 0.5ng/ml分析灵敏度代表了能与零区别的最低的骨钙素值分析特异性由于使用了单克隆抗体，以下物质无交叉反应：骨特异ALP方法对比：将Elecsys 骨钙素（y）与另一种骨钙素测定方法（x）使用临床标本进行相关测试：标本测定总数达：185Passing/Bablok 线性回收Y= -2.79 + 1.29x y=-6.24 + 1.43xR=0.987 r=0.987SD=1.54 Sy.x= 3.28标本浓度在10至210ng/ml之间。10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素65mg/dl）、脂血（脂质1500mg/dl）和生
8、物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（2200U/ml）。16种常用药物经试验对本测定无干扰。N-MID骨钙素浓度高达4200ng/ml也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳性反应。Elecsys N-MID骨钙素测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。11. 结果解释12. 临床意义骨钙素是骨基质中最重要的一种特异性非胶原蛋白，其与骨钙的结合作用依赖于维生素K。骨钙素分子含49个氨基酸，分子量约5800D。在骨合成中，成骨细胞产生骨钙素，此过程依赖于维生素K，同时维生素D3有促进产生骨钙素的作用。
9、骨钙素产生后一部分吸收进入骨基质，另一部分释放进入外周血。因此，血清（或血浆）中骨钙素的含量与各种骨代谢紊乱中的骨转换率有关。骨钙素含量异常多见于骨质疏松、原发性或继发性甲状旁腺功能亢进以及Paget病等疾病中。目前，骨钙素已被视为骨转换标志物，用于对上述疾病进行抗再吸收治疗效果的监测。完整的骨钙素（氨基酸1-49）及大的NMID片断（氨基酸143）均存在于血液中。完整的骨钙素在外周血中不稳定，羧基端43-44间的氨基酸易被蛋白酶水解，裂解下来的NMID则稳定得多。Elecsys N-MID骨钙素测定方法采用了针对骨钙素N端片段和NMID片段上的决定簇的二株单克隆抗体。因此能够检测血清（或血浆）中稳定的NMID片段和尚未被分解的完整的骨钙素。与不稳定的C端片段（氨基酸4349）没有关系，从而确保在常规实验室条件下获得稳定的检测结果。13参考文献编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日