钙的比色法测定作业指导书.doc

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1、钙钙的的比比色色法法 测测定定作作业业指指导导书书 1 1. . 实实验验原原理理 Vitros 钙试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物 支撑基片上涂有分析成份的化学干片。 将一滴 10 ul 的患者样品滴于干片上，分布层会 使之均匀地分布。于是钙离子从附着的蛋白质上游离出 来，透过分布层进入下面的试剂层，与砷III 染色剂 生成有色复合物，使最大吸收峰发生改变。经过一段 孵育期，有色复合物的反射强度可通过光谱法测定。所产 生有色复合物的总量与样品中的钙含量是成正比的。测定 方式：比色法 波长： 680nm 测试时间和温度： 37下约 5 分钟。 反应过程： pH5.6 Ca+2 + 砷 III

2、 有色复合物 2 2. . 标标本本采采集集 2.1 病人准备： 无特殊要求。 2.2 样品类型：血清、肝素锂或钠抗凝血浆、定时或随 时采集未加防腐剂的酸化尿液。 2.3 标本采集与处理： 所有用于钙测试的样品，特别要注意一个问题：佩 戴用碳酸钙粉制造的防护手套会在样品处理过程中造成 污染（例如，吸管滴头，吸管，样品杯和杯盖），而 这些被污染的消耗品在加样时又会污染待测样品，从而 使测试结果偏高。因此建议在拿这些消耗品时使用不含 碳酸钙粉的手套，或者直接用干净的空手去拿，也可以 用流水轻轻地冲洗有粉末的手套（不要用肥皂或任何类 型的去污剂）然后再将其干燥后使用。说明：标有 不含粉末 的手套，在

3、手套的里层也可能含有一些污染 性粉剂。 2.3.1 血清和血浆样品 卧床患者的结果会偏低3%；淤血的钙浓度会偏高 15%。样品采集后 2 天内要离心标本，吸出血清。处理 样品时要将其当成生物污染品。 2.3.2 尿液样品 定时或随时采集未加防腐剂的酸化尿 液。依照以下程序对测试钙的尿样进行酸化处理。注意： 这一程序只用于患者的样品，质控标本不需如此处理。 您可以将 24h 尿液全部或其中一部分进行酸化。当尿液 还有其它不需酸化的测试项目时，可以将部分尿液进行 酸化。酸化全部尿液：收集尿液前将20mL 6N 的盐酸 倒入收集尿液的容器内（随机收集的尿液中加1mL 6N 的盐酸）。如果收集前没有加

4、盐酸，按照以上步骤酸 化后，要将其放置至少1h 以后才能测试。酸化部分尿 液：将全部尿液充分混匀后，吸出5mL。在 5mL 尿液 中加 100uL 6N 的盐酸，然后充分混匀。确定样品的 PH 值在 1.55.0 之间，必要时进行调节。测试样品。 注意：酸化后尿样的PH 值要在 1.55.0 之间， PH 值 低于 1.5 会产生一个负偏差。处理样品时要将其当成 生物污染品。 3 3. . 标标本本的的存存放放 ：血清、血浆：如果测试时间拖延超过 4 小时，应将样品冷藏在2-8，-18下冷藏可长期 保存。尿标本室温下最多5 天，冷藏最多 5 周，- 18以下冷冻可保存 6 个月。 4 4. .

5、 标标本本的的运运输输 ：样品要放在带盖的容器内以防污染和 蒸发。 5 5. . 标标本本拒拒收收的的标标准准 ：采样管含 EDTA，氟化物，草酸 或枸橼酸的样品，因为这些物质会与钙螯合而使结果产 生负偏差。此外，接受EDTA 治疗的患者血样也不能测 试。 6 6. . 试试验验材材料料： 6.1 测试 Ca 所需的物品包括： Vitros 化学定标物 Kit1；Vitros 特制质控液； Vitros 尿液酸化剂 6N 的盐酸。 强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测 试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。 6.1.1 试剂组成：干片成分：反应成份是砷III 染色 剂。其它成份

6、有染色物质，粘合剂，缓冲剂，表面活性 剂，交叉连接剂和媒染剂。干片标记：试剂盒外包装上 标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏 温度。 6.1.2 试剂准备：从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打 开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室 温状态 1828。因此从冰箱中取出的试剂盒至少要 在室温下要放置 60 分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室 温下放置 30 分钟。去除内包装后立即将干片盒放入仪 器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24 小 时之内必须将其装入仪器中。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 未开封的干片盒：存储在2-8或低于该范围。 在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放

7、置时间 不能超过 4 周，否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不 超过 2 个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下 情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2 小时；再次 装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确， Vitros Ca 干片可保质到包装盒上标明的有效期限。参 见 VITROS 250 干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP 文件。 6.1.4 变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。 6.1.5 注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损， 不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。 6.2 校准品：用 Vitros 化学定标物 Kit1。血清、血 浆用相同的定标液，不过各自的SAV

8、s 值不同。有关 标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详 情，可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品. SOP 文件。 6.3 质控品：使用 Vitros 特制的质控物品；若使用 其它的一些质控物品，当与别的Na 测试方法比较时就 会出现差异。如：用人血清/血浆混合物分离制成的质 控物品，含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂 的质控物品；含有或高或低总蛋白浓度的质控物品；乙 烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使用。尿钙有专门的 质控，由于不含未分解的钙而不需进行特别酸化处理。 有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品.S

9、OP 文件。 7 7. . 仪仪器器： 美国强生厂家 VITROS250 全自动干式生化 分析仪。具体测试程序请参阅操作手册的介绍。 8 8. . 操操作作步步骤骤： 将试剂复温后直接放入仪器，样品编程， 仪器 5 分后自动打印结果。具体测试程序请参阅 VITROS250 操作手册 .SOP。具具体定标程序：用 Vitros 化学定标物 Kit1, 定标液复溶后必须在1 小 时以内使用，以免pH 值发生变化。参阅操作手册的相 关章节内容。何时进行定标：在维护和保养时更换了仪 器的重要部件。质控结果持续超出线性范围内时，详 情参阅操作手册。管理条例上指定的时间，在美国， CLIA 要求至少每 6

10、 个月定标一次。 说明：进行尿钙定标时，仪器会自动进行尿钾的定标。 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 操作建议： 将质控物质当成生物污染 品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至 少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检 查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的 有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控 检测（ IQCT）的内容。在每一批标本中都应把质控血清 做为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限， 3S 为 失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生 化室室内质控操作规程 .SOP 文件。

11、 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以用 Vitros 化学定标物校准仪器后， 在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结 果，以 mmol/L 报告。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 血清/血浆 2.10- 2.55mmol/L 尿液：无钙饮食 0.13-1.0mmol/天 低于平均量钙饮食 1.25-3.75mmol/天 平均量钙饮食 2.50-7.50mmol/天 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 钙是骨骼中的主要矿物质成分，人体 中 99%的钙都存在于骨骼中

12、。钙离子在传送神经冲动， 维持正常的肌肉收缩方面起着非常重要的作用。人体中 非正常的血钙浓度预示可能患有甲状腺功能失调，骨骼 疾病，癌症，营养不良和吸收不良综合症，维生素D 缺乏，过量摄入含钙的抗坏血酸以及肾脏疾病。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围：血清 /血浆： 0.25-3.49mmol/L；尿 液：0.25-4.44mmol/L。 14.2 精密度：在 Vitros 250 生化仪上用质控液来测 精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周 围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理 等方面发生变化都会影响结果的重复性。 日间精密 度 血血清清 x (

13、mmol /L) s (mmol /L) CV (% ) 室间精密 度 n=20 天 x (mmol /L) s (mmol /L) CV (% ) 样品 1 n=78 2.30.02 样品 1 2.30.04 1. 5 样品 2 n=78 3.00.02 样品 2 3.00.04 1. 3 日间精密 度 尿尿液液 x (mmol /L) s (mmol /L) CV (% ) 室间精密 度 n=22 天 x (mmol /L) s (mmol /L) CV (% ) 样品 1 n=88 1.40.02 样品 1 1.40.06 4. 0 样品 2 n=88 2.00.02 样品 2 2.00

14、.08 4. 3 样品 3 n=84 2.80.03 样品 3 2.80.08 3. 0 样品 4 n=88 3.00.02 样品 4 3.00.08 2. 6 *日间精密度是将 2 至 3 份相同的样品在一天中运 行两次，然后对测试结果进行统计计算。 *室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次， 然后对测试结果进行统计计算。 14.3 方法学比较： 用 Vitros700 仪器和原子吸收分析法分别测试相同 的血清 /尿液样品，对比结果显示Vitros 方法的准确 度良好；用 Vitros250 仪器与 Vitros700 仪器测试相 同的血清 /尿液样品，对比结果显示Vitros250 方

15、法 的准确度良好，血清： Y=0.99X+0.2（r=0.999，N=72，检测范围 0.85- 3.49mmol/L） ；尿液： Y=1.02X- 0.03（r=0.998，N=84，检测范围 0.25-4.17mmol/L） 。 14.4 灵敏度：血清 /血浆和尿液： 0.25mmol/L。 14.5 特异性：经测试，以下物质对Vitros Ca 干片 法均无干扰（偏差 3 3. .5 5m mm mo ol l/ /L L 或 1 1. .6 6m mm mo ol l/ /L L 时，在经过复查等确认手段 处理后应及时向临床主管医生汇报。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17

16、.1 本法线性上限血清 /血浆 3.49mmol/L,尿液均为 4.44mmol/L；如果样品中的钙浓度超出系统的测试线性 范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆：用等量试 剂级别的水或生理盐水稀释样品，重新测试，将测试结 果乘以 2，就得到原始样品中钙的浓度。尿液：用等量 试剂级别的水稀释样品，重新测试，将测试结果乘以 2，就得到原始样品中钙的浓度。 17.2 干扰物质：血清：服用泛影钠患者的血样不能用 此法测钙，舒拉明（抗寄生虫药物）浓度达 300ug/mL 时，会使钙结果产生 -10%的偏差。尿液：冰 醋酸 10mL/L 分析物浓度钙浓度为3.5mmol/L 时，产 生-0.3mmol/

17、L 的干扰；浓缩氢氯酸10mL/L 分析物浓 度钙浓度为 2.9mmol/L 时，产生 -0.45mmol/L 的干扰； 枸橼酸 10mL/L 分析物浓度钙浓度为1.8mmol/L 时， 产生-0.2mmol/L 的干扰；麝香草酚10mL/L 分析物浓 度钙浓度为 2.5mmol/L 时，产生 -0.1mmol/L 的干扰。 不加盖的样品杯放在室温下，由于二氧化碳丢失而使样 品的 pH 值升高，会使钙的测试结果最多偏高 0.4 mg/dL （0.1mmol/L） 。为减少此类误差，可在厌氧环 境下处理样品并尽快测试，这种情况对量少的小儿样品 尤其重要。有些药物和患者的自身状况也会影响钙的测 试值。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 仪器出了故障可联系仪器厂家，进行 紧急修理，如一时不能修好，可用本实验室的 OLYMPUS AU1000 分析仪测定样品。 1 19 9. . 参参考考文文献献 强生厂家提供的方法学手册 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处理 .SOP 文件处理。