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1、 高中生物选修三 专题1 基因工程基因工程的概念基因工程是指根据人们的愿望，进展严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，给予生物以新的遗传特性，创建出更符合人们须要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子程度上进展设计和施工的，又叫做DNA重组技术。（一）基因工程的根本工具1.“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分别纯化出来的。（2）功能：可以识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2.“分子缝合
2、针”DNA连接酶(1)两种DNA连接酶（DNA连接酶和DNA连接酶）的比拟： 一样点：都缝合磷酸二酯键。 区分：DNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。(2) 与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。(3) 与DNA分子相关的酶限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA分子片段脱氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键碱基对间的氢键作用
3、结果形成粘性末端或平末端形成重组DNA分子形成新的DNA分子形成单链DNA分子3.“分子运输车”载体（1）载体具备的条件：能在受体细胞中复制并稳定保存。具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒,它是一种袒露的、构造简洁的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制实力的双链环状DNA分子。（3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒(二) 基因工程的根本操作程序第一步：目的基因的获得 从基因文库中获得1、获得目的基因的方法 鸟枪法 人工合成2.目的基因是指： 编码蛋白质的构造基因 。3.原核基因实行干脆分别获得，真核基因是人工合成
4、。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。4.PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至9095DNA解链；第二步：冷却到5560，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至7075，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因可以表达和发挥作用。2.组成：目的基因启动子终止子标记基因（1）启动子：是一段有特别构造的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特别构造的
5、DNA片段 ，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞挑选出来。常用的标记基因是抗生素基因。3、目的基因与运载体结合（以质粒为运载体）第三步：将目的基因导入受体细胞_1将目的基因导入受体细胞 受体细胞：细菌 氯化钙细胞壁的通透性增大重组质粒进入受体细胞目的基因随受体细胞的繁殖而复制2.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。3.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采纳最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受
6、体细胞多是 受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的缘由是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ，最常用的原核细胞是 大肠杆菌 ，其转化方法是：先用 Ca2+ 处理细胞，使其成为 感受态细胞 ，再将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在确定的温度下促进感受态细胞汲取DNA分子，完成转化过程。生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术Ca2处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入Ti质粒的TDNA上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞的DNA表达将含有目的基因的表达载高考资源网体提纯取卵（受精卵）显微注射受精卵发育获得具有
7、新性状的动物Ca2处理细胞微生物细胞壁的通透性增加重组质粒与感受态细胞混合感受态细胞汲取DNA分子 4.重组细胞导入受体细胞后，挑选含有基因表达载体受体细胞的根据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1.首先要检测 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采纳 DNA分子杂交技术。2.其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA，方法是采纳 用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。3.最终检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进展抗原抗体杂交。4.有时还需进展 个体生物学程度的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。（三）基因工程
8、的应用1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改进植物的品质。2.动物基因工程：进步动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物消费药物。3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。（四）蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的构造规律及其生物功能的关系作为根底，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进展改造，或制造一种新的蛋白质，以满意人类的消费和生活的需求。（基因工程在原则上只能消费自然界已存在的蛋白质）转录 翻译 专题2 细胞工程（一）植物细胞工程 1.理论根底（原理）：细胞全能性全能性表达的难易程度：受精卵生殖细胞干细胞体细胞；植物细胞动物细胞
9、2.植物组织培育技术（1）过程：离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 试管苗 植物体（2）用处：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化消费。（3）地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最终一道工序。3.植物体细胞杂交技术（1）过程：（2）诱导交融的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。（3）意义：克制了远缘杂交不亲和的障碍。（二）动物细胞工程 1. 动物细胞培育（1）概念：动物细胞培育就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在相宜的培育基中，让这些细胞生长和繁殖。（2）动物细胞培育的流程：取动
10、物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培育瓶中进展原代培育贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞接着传代培育。（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到外表互相抑制时，细胞就会停顿分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。（4）动物细胞培育须要满意以下条件无菌、无毒的环境：培育液应进展无菌处理。通常还要在培育液中添加确定量的抗生素，以防培育过程中的污染。此外，应定期更换培育液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。养分：合成培育基成分：糖、氨基酸
11、、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需参加血清、血浆等自然成分。温度：相宜温度：哺乳动物多是36.50.5；pH：7.27.4。气体环境：95%空气5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培育液的pH。（5）动物细胞培育技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培育医学探讨的各种细胞。2.动物体细胞核移植技术和克隆动物（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比拟简洁）和体细胞核移植（比拟难）。（2）选用去核卵(母)细胞的缘由：卵(母)细胞比拟大，简洁操作；卵(母)细胞细胞质多，养分丰富。（3）体细胞核移植的大致过程是：（右图）核移植胚胎移植（4）体细胞核移
12、植技术的应用：加速家畜遗传改进进程，促进良畜群繁育； 爱护濒危物种，增大存活数量；消费宝贵的医用蛋白； 作为异种移植的供体；用于组织器官的移植等。（5）体细胞核移植技术存在的问题：克隆动物存在着安康问题、表现出遗传和生理缺陷等。3.动物细胞交融（1）动物细胞交融也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。交融后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。（2）动物细胞交融与植物原生质体交融的原理根本一样，诱导动物细胞交融的方法与植物原生质体交融的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。（3）动物细胞交融的意义：克制了远缘杂交的不亲和性，成为探
13、讨细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。（4）动物细胞交融与植物体细胞杂交的比拟：比拟工程细胞交融的原理细胞交融的方法诱导手段用法植物体细胞杂交细胞膜的流淌性去除细胞壁后诱导原生质体交融离心、电刺激、振动，聚乙二醇等试剂诱导克制了远缘杂交的不亲和性，获得杂种植株动物细胞交融细胞膜的流淌性使细胞分散后诱导细胞交融除应用植物细胞杂交手段外，再加灭活的病毒诱导制备单克隆抗体的技术之一4.单克隆抗体（1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分别出的抗体产量低、纯度低、特异性差。（2）单克隆抗体的制备过程：注入小鼠细胞交融分别抗原注入小鼠体内B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞细胞
14、培育选择培育细胞培育基体内培育体外培育从腹水提取从培育液提取单克隆抗体（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。（4）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。（5）单克隆抗体的作用： 作为诊断试剂：精确识别各种抗原物质的微小差异，并跟确定抗原发生特异性结合，具有精确、高效、简易、快速的优点。 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。 专题3 胚胎工程（一）动物胚胎发育的根本过程1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进展的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培育等技术。经过处理后获得的胚
15、胎，还需移植到雌性动物体内消费后代，以满意人类的各种需求。2、动物胚胎发育的根本过程（1）受精场所是母体的输卵管上段。（2）卵裂期：特点：细胞有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小。 （3）桑椹胚：特点：胚胎细胞数目到达32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。是全能细胞。（4）囊 胚：特点：细胞开场出现分化（该时期细胞的全能性仍比拟高）。聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。中间的空腔称为囊胚腔。（5）原肠胚：特点：有了三胚层的分化，具有囊胚腔和原肠腔。（二）胚胎干细胞1、哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或从原
16、始性腺中分别出来。2、具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培育的条件下，可以增殖而不发生分化，可进展冷冻保存，也可进展遗传改造。3、胚胎干细胞的主要用处是：可用于探讨哺乳动物个体发生和发育规律；是在体外条件下探讨细胞分化的志向材料，在培育液中参加分化诱导因子，如牛黄酸等化学物质时，就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化，这为提醒细胞分化和细胞凋亡的机理供应了有效的手段；可以用于治疗人类的某些顽疾，如帕金森综合症、少年糖尿病等；利用可以被诱导分化形成新的组织细胞的特性，移植ES细胞可使坏死
17、或退化的部位得以修复并复原正常功能；随着组织工程技术的开展，通过ES细胞体外诱导分化，定向培育出人造组织器官，用于器官移植，解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排挤的问题。（三）胚胎工程的应用1.体外受精和胚胎的早期培育(1)卵母细胞的采集和培育：主要方法：用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，干脆与获能的精子在体外受精。第二种方法：从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞；第三种方法是借助超声波探测仪、腹腔镜等干脆从活体动物的卵巢中汲取卵母细胞。采集的卵母细胞，都要在体外经人工培育成熟后，才能与获能的精子受精。(2) 精子的采集和获能：在体外受精前，要对精子进展获能处理。(3)
18、 受精：获能的精子和培育成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。(4)胚胎的早期培育：精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培育液中接着培育，以检查受精状况和受精卵的发育实力。培育液成分较困难，除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等养分成分，以及血清等物质。当胚胎发育到相宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。不同动物胚胎移植的时间不同。(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进展移植，小鼠、家兔等试验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在816个细胞阶段移植。)2.胚胎移植(1)胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其它方式得
19、到的胚胎，移植到同种的、生理状态一样的其它雌性动物的体内，使之接着发育为新个体的技术。其中供应胚胎的个体称为“供体”，承受胚胎的个体称为“受体”。（供体为优良品种，作为受体的雌性动物应为常见或存量大的品种。）地位：如转基因、核移植，或体外受精等任何一项胚胎工程技术所消费的胚胎，都必需经过胚胎移植技术才能获得后代，是胚胎工程的最终一道“工序”。(2) 胚胎移植的意义：大大缩短了供体本身的繁殖周期，充分发挥雌性优良个体的繁殖实力。(3) 生理学根底：动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变更是一样的。这就为供体的胚胎移入受体供应了一样的生理环境。早期胚胎在确定时间内处于游离状态。这就为胚
20、胎的搜集供应了可能。受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排挤反响。这为胚胎在受体的存活供应了可能。供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联络，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。(4) 根本程序主要包括：对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和消费性能优秀的供体，有安康的体质和正常繁殖实力的受体，供体和受体是同一物种。并用激素进展同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。配种或人工授精。对胚胎的搜集、检查、培育或保存。配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来(也叫冲卵)。对胚胎进展质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段。干脆向受体移植或放入196
21、的液氮中保存。对胚胎进展移植。移植后的检查。对受体母牛进展是否妊娠的检查。3.胚胎分割(1)概念：是指采纳机械方法将早期胚胎切割2等份、4等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。(2)意义：来自同一胚胎的后代具有一样的遗传物质，属于无性繁殖。(3)材料：发育良好，形态正常的桑椹胚或囊胚。（桑椹胚至囊胚的发育过程中，细胞开场分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎分割。）(4)操作过程：对囊胚阶段的胚胎分割时，要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的复原和进一步发育。 专题4 生物技术的平安性和伦理问题（一）转基因生物的平安性争辩 ：(1)基因生物与食物平安：反方观点：反对“本质性等同”、出现滞
22、后效应、出现新的过敏原、养分成分变更正方观点：有平安性评价、科学家负责的看法、无实例无证据(2)转基因生物与生物平安：对生物多样性的影响反方观点：扩散到种植区之外变成野生种类、成为入侵外来物种、重组出有害的病原体、成为超级杂草、有可能造成“基因污染”正方观点：生命力有限、存在生殖隔离、花粉传播间隔 有限、花粉存活时间有限(3)转基因生物与环境平安：对生态系统稳定性的影响反方观点：打破物种界限、二次污染、重组出有害的病原微生物、毒蛋白等可能通过食物链进入人体正方观点：不变更生物原有的分类地位、削减农药运用、爱护农田土壤环境（二）生物技术的伦理问题(1)克隆人：两种不同观点，多数人持否认看法。否认
23、的理由：克隆人严峻违背了人类伦理道德，是克隆技术的滥用；克隆人冲击了现有的婚姻、家庭和两性关系等传统的伦理道德观念；克隆人是在人为的制造在心理上和社会地位上都不健全的人。确定的理由：技术性问题可以通过胚胎分级、基因诊断和染色体检查等方法解决。不成熟的技术也只有通过理论才能使之成熟。中国政府的看法：制止生殖性克隆，不反对治疗性克隆。四不原则：不赞成、不允许、不支持、不承受任何生殖性克隆人的试验。(2)试管婴儿：两种目的试管婴儿的区分两种。不同观点，多数人持认可看法。否认的理由：把试管婴儿当作人体零配件工厂，是对生命的不敬重；早期生命也有活下去的权利，抛弃或杀死多余胚胎，无异于“谋杀”。确定的理由：解决了不育问题，供应骨髓中造血干细胞救治患者最好、最快捷的方法，供应骨髓造血干细胞并不会对试管婴儿造成损伤。(3)基因身份证：否认的理由：个人基因资讯的泄漏造成基因卑视，势必造成遗传学失业大军、造成个人婚姻困难、人际关系疏远等严峻后果。确定的理由：通过基因检测可以及早实行预防措施，适时进展治疗，到达挽救患者生命的目的。（三）生物武器 (1)种类：致病菌、病毒、生化毒剂，以及经过基因重组的致病菌。(2)分布方式：吸入、误食、接触带菌物品、被带菌昆虫叮咬等。(3)特点：致病力强、多数具传染性、传染途径多、污染面广、有潜藏期、不易被发觉、危害时间长等。(4)制止生物武器公约及中国政府的看法