《2022年微生物免疫学实验报告.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2022年微生物免疫学实验报告.docx（33页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、精选学习资料 - - - - - - - - - 授课进度第周,第次课2 学时授课日期年 月日授课题目 教学章、 节 细菌的形状学检查一或主题 学会显微镜的使用,重点把握油镜的使用与爱护；教学 进一步熟识细菌的形状,明确细菌的大小与测量单位；目标 熟识细菌的特别结构；油镜的观看和使用 教学 重点油镜的观看和使用 教学 难点教学 方法请挑选你授课时所采纳的教学方法在括号中画“ ”：讲授法 ,争论法 ,演示法 ,案例法 ,发觉法 ,探究法 ,谈话法 ,试验法 ,参观法 ,考察法 ,自学辅导法 ,练习法习题或操作课 ,读书指导法 ,听说法 ,写生法 ,视唱法 ,工序法技能课 ,实习作业法 ,其他 教
2、学请挑选你授课时所采纳的教学手段在括号中画“ ”： ,实物 ,多媒体 , 投影 , 影像 ,CAI 课件 ,PPT ,标本手段挂图 ,模型 ,其他 讨试验报告论、摸索 题、作业参考 1 杨致邦,叶彬 . 病原生物学与免疫学试验【M】.北京 .科学出版社 .2022 年.2 潘丽红 . 病原生物学与免疫学试验及学习指导【M 】.中国科学技术高校出版社,文献2022 年. 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 1 试验内容：2 显微镜油镜的使用与爱护；3 细菌的形状与结构的观看；4 试验目的：5 学会显微镜的使用,重点把握
3、油镜的使用与爱护；6 进一步熟识细菌的形状,明确细菌的大小与测量单位；7 熟识细菌的特别结构；8 试验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形状标本、细菌的特别结构标本；4 试验方法：1 显微镜油镜的使用与爱护显微镜是一种珍贵的光学仪器,而油镜又是显微镜的最精密部分,是观看细菌最重要的工具；因此,要求大家必需娴熟地把握显微镜的使用和爱护,特别是油镜,防止损坏；1识别油镜： 95 、100 、HI、OeL；先用低倍镜对光, 次用高倍镜；2对光：自然光用平面反光镜,人工光用凹面反光镜；对好光源后,染色标本将聚光器上升,光圈放开；3、调剂焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上,用推动器固定
4、,用低倍镜先找准物象,再用高倍镜看清物体,于标本上加镜油一滴；用眼从侧面观看,转动粗螺旋调剂器,将油镜头渐渐下降浸入其中,切不行用力过猛,以免损坏油镜；用左眼从接目镜观看,渐渐向上转动粗螺旋调剂器,见模糊物象后,再用细螺旋调剂器,直到物象完全清楚为止；4、显微镜的爱护：全部的光学部分结构都不能用手指、一般布擦拭, 用过的油镜头应立刻先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭,再用干擦镜纸擦去二甲苯,以防二甲苯镜头上的固定胶,致使镜片脱落；显微镜的光学部分应防止日光直射；防止接触强酸、强硷、氯仿、酒精；显微镜用毕, 将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒,上,双手端平送入镜箱内；置于干燥处,以防受潮；二细菌形状观看
5、用软布擦拭各部件后掩盖于接目镜1、细菌的基本形状；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特别结构：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌周毛菌芽胞：破伤风杆菌芽胞位于菌体顶端,呈鼓槌状名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 授课进度第周,第次课2 学时授课日期年 月 日授课题目 教学章、 节细菌的形状学检查二或主题 进一步明白细菌特别
6、结构在鉴别细菌过程中的有用意义；教学 目标把握革兰染色的操作法,充分熟识革兰染色的临床意义；革兰染色的操作法教学 重点革兰染色的操作法 教学 难点教学 方法请挑选你授课时所采纳的教学方法在括号中画“ ”：讲授法 ,争论法 ,演示法 ,案例法 ,发觉法 ,探究法 ,谈话法 ,试验法 ,参观法 ,考察法 ,自学辅导法 ,练习法习题或操作课 ,读书指导法 ,听说法 ,写生法 ,视唱法 ,工序法技能课 ,实习作业法 ,其他 教学 手段请挑选你授课时所采纳的教学手段在括号中画“ ”：实物 , 多媒体 , 投影 , 影像 , CAI课件 , PPT ,标本 ,挂图 ,模型 ,其他试验报告 讨 论、摸索 题
7、、作业参考 1 杨致邦,叶彬 . 病原生物学与免疫学试验【M】.北京 .科学出版社 .2022 年.2 潘丽红 . 病原生物学与免疫学试验及学习指导【M 】.中国科学技术高校出版社,文献2022 年. 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 一、试验内容：3 细菌标本片的制备操作4 革兰染色法操作二、试验目的：1 进一步明白细菌特别结构在鉴别细菌过程中的有用意义；2 把握革兰染色的操作法,充分熟识革兰染色的临床意义；三、试验材料：革兰染色液全套、擦镜纸、二甲苯、大肠杆菌培育物、葡萄球菌培育物、生理盐水、玻片、接种环、酒精
8、灯；四、试验方法：细菌标本片的制备操作1、涂片：点燃酒精灯；取干净玻片一张,右手持接种环一酒精灯火焰中消毒,稍冷后取12环生理盐水置于玻片中心；再次消毒后,用接种环取菌落中的细菌或菌液或标本少许,在生理盐水中涂匀制成约 1cm左右的薄膜,并将接种环再次消毒后,置于试管架中；2、干燥：在室温中自然干燥；天冷时可在酒精灯火焰上方略加温,不行高温加热,否就,细菌被破坏后染色成效差；3、固定：右手持玻片一端,标本面对上,在酒精灯火焰上方快速地来回通过三次,约 2妙种；固定的目的是杀死细菌,使细菌与玻片粘附较紧密；革兰染色法操作1、初染：滴加结晶紫染液于标本上,以掩盖满为度,染1分钟后水洗,洒去积水；2
9、、媒染：加鲁格碘液,媒染 1分钟后水洗,洒去积水；7 脱色：加 95酒精脱色边加酒精边摇动玻片,使酒精流去再加酒精,如此反复 2 3次约 30妙钟后水洗,洒去积水；12 复染： 加复红染液染 30妙钟后水洗, 洒去积水,待干或用吸水纸吸干后镜检；先低倍镜观看成效,再用高倍镜看清物象,滴加镜油后用油镜观看；结果 ：G菌呈紫色, G菌呈红色；名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 授课进度第周,第次课2 学时授课日期年 月 日授课题目 教学章、 节细菌的培育及代谢产物的检查或主题 熟识细菌的培育方法,进一步把握人工培育细菌的
10、临床意义；教学 目标明白细菌代谢产物在鉴别细菌中的意义；培育基的制备教学 重点细菌代谢产物 教学 难点教学 方法请挑选你授课时所采纳的教学方法在括号中画“ ”：讲授法 ,争论法 ,演示法 ,案例法 ,发觉法 ,探究法 ,谈话法 ,试验法 ,参观法 ,考察法 ,自学辅导法 ,练习法习题或操作课 ,读书指导法 ,听说法 ,写生法 ,视唱法 ,工序法技能课 ,实习作业法 ,其他 教学 手段请挑选你授课时所采纳的教学手段在括号中画“ ”：实物 , 多媒体 , 投影 , 影像 , CAI课件 , PPT ,标本 ,挂图 ,模型 ,其他试验报告 讨 论、摸索 题、作业参考 1 杨致邦,叶彬 . 病原生物学
11、与免疫学试验【M】.北京 .科学出版社 .2022 年.2 潘丽红 . 病原生物学与免疫学试验及学习指导【M 】.中国科学技术高校出版社,文献2022 年. 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 一、试验内容 1、培育基的制备操作2、细菌的人工培育法操作3、细菌代谢产物观看示教4、药敏试验示教二、试验目的 1、熟识细菌的培育方法,进一步把握人工培育细菌的临床意义；2、明白细菌代谢产物在鉴别细菌中的意义；三、试验材料 牛肉膏、 蛋白胨、氯化钠、 琼脂、 SS琼脂、 蒸馏水、 1molNaOH、0.1 molNaOH、粗天
12、平、 0.02% 酚红指示剂、 pH比色器、无菌培育皿、无菌试管、接种环、酒精灯、各种鉴别培育基、高压 消毒灭菌器、量筒、三角烧瓶、吸管、剪刀、绳索、葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液、伤寒杆 菌菌液、乙型副伤寒杆菌菌液等；四、试验方法培育基的制备操作1、培育基的制备程序称量溶化pH测定与矫正分装灭菌检定储存；2、液体培育基的制备 1称量：称取牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g,置于 1000ml三角烧瓶中, 加入蒸馏水 1000ml；2混合溶解： 加热溶化,待冷至40. 50oC时,测定并矫正pH为 77.6 ；3pH测定与矫正方法：预备工作：取 pH7.4 、 7.6 酚红标准比色管及蒸馏
13、水管各 1支,按图示装好；取口径 与比色管相同的试管 3支,各加待测液体基 5ml,分别编上、号,按图示装好； 比色：将比色架对光目视比色,比较二排管的颜色是否相同,假设基为酸性一般呈酸 性,就向号管中加 0.02%酚红指示剂 0.25ml 摇匀,取 1ml吸管一支吸取 0.1 molNaOH1ml ,缓慢滴入号管内,边加边摇匀,直至与标准管其中一侧颜色相同,精确记录 NaOH的用量；运算：5ml基矫正至 pH7.6用去 0.1 molNaOH0.2ml,剩余的培育基就需加入 1 molNaOH为Xml；N1：V1N2：V2 用比例公式运算；5：975 0.2 ：X X0.2*975/5=39
14、ml 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 0.1 molNaOH需要 39ml,而加 1 molNaOH只需 3.9ml ；4分装： 分装十适当容器内试管细菌的人工培育法操作1、平板划线接种法：,包装好,高压蒸气灭菌后备用；1点燃酒精灯,右手以握笔式持接种环,在火焰上灭菌后稍冷,挑取葡萄球菌、大肠杆菌 混合菌液一环；2用左手掌持琼脂平板,以左手拇指将平板盖启开,右手将取了菌液的接种环伸入平板,呈45O角,用分段划线法别离细菌如下图,盖好平板；37OC温箱中培育 24h后,3于平板底部贴上标签,写明班、组、菌名、日期,
15、底向上,置于观看结果；2、液体培育基接种法：左手持液体培育基, 依据平板划线取葡萄球菌少许,用右手小指拔开棉塞, 夹于指间示教,并将管口在火焰上灭菌,将细菌接种于液体培育基内；再次灭菌管口, 塞好棉塞； 贴上标签,OC温箱中培育 24h后,观看结果；置于 37 细菌代谢产物观看示教1、糖发酵试验：细菌分解糖后产酸产气,产酸后使批示剂显色,产气后可见到气泡；产酸产气以 “” 表示,只产酸不产气以“”表示,不分解以“” 表示；大肠杆菌和伤寒杆菌分解糖的结果如下：菌种葡萄糖乳糖大肠杆菌伤寒杆菌2、硫化氢试验：某些细菌能分解培育基中的含硫氨基酸,产生硫化氢气体；硫化氢与培育 基中的铁盐或铅盐反应,形成
16、黑色的硫化铁或硫化铅沉淀,为阳性,无黑色沉淀为阴性；大肠杆菌硫化氢试验为阴性,乙型副伤寒杆菌为阳性；药敏试验示教1、平板划线：1用密集划线法将细菌布满平板,方法同平板划线接种法；2在无菌接种箱内,用左手启开平板盖,用无菌镊子夹取抗菌素纸片,间隔 5cm放置平板培养基外表,盖好平板,贴上标签,置于37 OC温箱中培育 24h后,观看结果；名师归纳总结 3结果：观看抑菌区有无,测量抑菌区的直径；直径15mm为高度敏锐；名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 授课进度第周,第次课2 学时授课日期年 月日授课题目教学章、 节 细
17、菌的分布与消毒灭菌检查 或主题 证明在自然界和正常人体体表有很多细菌存在,以树立严格的消毒及无菌观念；教学 目标明白常用消毒灭菌器械的使用方法,初步把握紫外线的灭菌方法护留意事项；细菌的检查及消毒灭菌器械的使用方法教学 重点灭菌方法使用时的留意事项 教学 难点教学 方法请挑选你授课时所采纳的教学方法在括号中画“ ”：讲授法 ,争论法 ,演示法 ,案例法 ,发觉法 ,探究法 ,谈话法 ,试验法 ,参观法 ,考察法 ,自学辅导法 ,练习法习题或操作课 ,读书指导法 ,听说法 ,写生法 ,视唱法 ,工序法技能课 ,实习作业法 ,其他 教学 手段请挑选你授课时所采纳的教学手段在括号中画“ ”：实物 ,
18、 多媒体 , 投影 , 影像 , CAI课件 , PPT ,标本 ,挂图 ,模型 ,其他试验报告 讨 论、摸索 题、作业参考 1 杨致邦,叶彬 . 病原生物学与免疫学试验【M】.北京 .科学出版社 .2022 年.2 潘丽红 . 病原生物学与免疫学试验及学习指导【M 】.中国科学技术高校出版社,文献2022 年. 名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 一、试验内容 1、空气中细菌的检查操作2、皮肤消毒试验操作3、咽喉部细菌的检查操作4、常用消毒灭菌器械的使用示教二、试验目的 1、证明在自然界和正常人体体表有很多细菌存
19、在,以树立严格的消毒及无菌观念；2、明白常用消毒灭菌器械的使用方法,初步把握紫外线的灭菌方法护留意事项；三、试验材料 一般琼脂平板、 SS琼脂平板、 血平板、 接种环、 酒精灯、 高压消毒灭菌器、 干烤箱、 紫外线、大肠杆菌培育液、1龙胆紫、 2.5 碘酒, 75乙醇、无菌棉签、镊子等；四、试验方法 空气中细菌的检查操作1、取一般琼脂平板 4个,启开皿盖,培育基面对上,分别放在试验室、寝室、室外及无菌操 作台等处,暴露 10. 20min 后加盖；2、于平板底部贴上标签,写明班、组、菌名、日期,底向上,置于 37 OC温箱中培育 24h后,观看结果；3、结果：照实填写；皮肤消毒试验操作1、取一
20、般琼脂平板1个,在底部用玻璃蜡笔划线分区并标号,启开皿盖,用右手食指轻轻涂抹培育基外表；2、用 2.5 碘酒消毒右手食指后,再用消毒后的手食指轻轻涂抹培育基外表,加盖；3、于平板底部贴上标签,写明班、组、菌名、日期,底向上,置于37OC温箱中培育 24h后,观看结果；4、结果：照实填写；咽喉部细菌的检查操作1、取血平板 1个,启开皿盖,口对培育基外表距离约10cm,深咳嗽三次不行吹痰,加盖；2、于平板底部贴上标签,写明班、组、菌名、日期,底向上,置于37OC温箱中培育 24h后,观看结果；名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - -
21、 - - 3、结果：照实填写；常用消毒灭菌器械的使用示教、介绍1、紫外线杀菌试验点燃酒精灯, 取一般琼脂平板1个,在底部用玻璃蜡笔划线分出二个区并标号,启开皿盖,右手持接种环在火焰上灭菌后,稍冷,取大肠杆菌培育液一环,密集划线,加盖；将培育基置于无菌接种箱内,启开皿盖,将盖子盖于培育基上的一半,打开紫外线灯开头,照耀 30min后,加盖；于平板底部贴上标签,写明班、组、菌名、日期,底向上,置于37OC温箱中培育 24h后,观看结果；结果：照实填写；2、手提式高压蒸气灭菌器介绍构造：略 用法：加水至规定的水平面、放入灭菌物品,加盖、旋紧,打开排气阀；通电加热、温度 逐步上升时,器内冷空气由排气阀
22、排出,待有大量蒸气逸出时,关闭排气阀,连续加热,直到压力表的指针指在所需的位置后,调剂电源,掌握温度,维护 排气,待压力表指针指向“ 0”时,再开盖取物；20. 30min 后,打开排气阀留意事项：灭菌开头时必需排尽冷空气；灭菌完毕,切不行突然打开盖子排气减压,以免瓶内液体等冲出外溢；放置物品不应太挤；用途：用于耐高温顺不怕潮湿的物品灭菌；名师归纳总结 - - - - - - -第 12 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 授课进度第周,第次课2 学时授课日期年 月 日授课题目教学章、 节 病原性球菌的检查或主题 通过试验让同学把握病原性球菌的形状、染色特性；明白
23、脓汁标本的病原性球菌教学的别离鉴定的程序；明白抗“ O”试验的原理、方法及临床意义；目标1、病原性球菌标本的观看；教学 重点教学2、脓汁标本中病原性球菌的别离鉴定的程序；3、抗 “O”试验抗“ O”试验的原理难点教学 方法请挑选你授课时所采纳的教学方法在括号中画“ ”：讲授法 ,争论法 ,演示法 ,案例法 ,发觉法 ,探究法 ,谈话法 ,试验法 ,参观法 ,考察法 ,自学辅导法 ,练习法习题或操作课 ,读书指导法 ,听说法 ,写生法 ,视唱法 ,工序法技能课 ,实习作业法 ,其他 教学 手段讨请挑选你授课时所采纳的教学手段在括号中画“ ”：实物 , 多媒体 , 投影 , 影像 , CAI课件
24、, PPT ,标本 ,挂图 ,模型 ,其他试验报告论、摸索 题、作业参考 1 杨致邦,叶彬 . 病原生物学与免疫学试验【M】.北京 .科学出版社 .2022 年.2 潘丽红 . 病原生物学与免疫学试验及学习指导【M 】.中国科学技术高校出版社,文献2022 年. 名师归纳总结 - - - - - - -第 13 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 病原性球菌的检查试验目的：1 把握病原性球菌的形状、染色特性；2 明白脓汁标本的病原性球菌的别离鉴定的程序；3 明白抗 “O”试验的原理、方法及临床意义；试验内容：1、病原性球菌标本的观看；2、脓汁标本中病原性球菌的别离
25、鉴定的程序；3、抗 “O”试验试验材料：显微镜、细菌标本、玻片、试管、试管架、吸管、水浴箱、注射器、生理盐水、血平板、兔血浆、抗“ O”试剂、血平板；试验方法：2 病原性球菌标本的观看2.5%碘酒、棉签、1、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌、淋球菌的形状观看操作；镜检2、葡萄球菌、链球菌溶血现象观看示教；4脓汁标本中病原性球菌的别离鉴定的程序直接涂片革兰染色镜检脓汁标本观看菌特点及溶液血情形接种血平板 24h培育后观看取菌落涂片革兰染色取菌落作生化反应、致病力试验5抗“O”试验原理：乙型溶血性链球菌能产生溶血素“ O”,能溶液解人和兔红细胞并有很强的抗原性,能刺激机体产生抗溶血素“ O”
26、抗体；抗溶血素 “ O”能中和溶血素 “ O”的溶血作用； 本法是将病人血清与已知溶血素“ O”抗原先混合,作用一段时间后,再加入红细胞悬液；假设红细胞不被溶解为阳性,溶解为阴性；方法：1、取小试管 6支,分别编号,分两排置于试管架上1-3为第一排, 4-6为其次排；名师归纳总结 2、第一排试管加待检血清0.25ml分别稀释为 200、400、800倍；其次排试管加待检血第 14 页,共 22 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 清0.25ml 分别稀释 300、600、1200倍；3、分别加链球菌溶血素“O”抗原 0.25ml,充分混匀,置于 37o
27、C水浴箱中 10min；7 分别加 5%红细胞悬液 0.25ml ,充分混匀,置 37oC水浴箱中 30min 后观看结果；结果：以完全不溶液血的血清最高稀释度为抗“ O”抗体的效价；正常值为500单位以下；用途：600单位及以上有诊断意义,用于帮助诊断活动性风湿；四 血浆凝固酶试验名师归纳总结 3取玻片一张,加生理盐水一环；用接种环取葡萄球菌少许,混匀；第 15 页,共 22 页4加血浆一滴、混匀,数分钟后观看结果；显现颗粒状凝集的为阳性、反之为阴性；- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 授课进度第周,第次课2 学时授课日期年 月 日授课题目 教学章、
28、节肠道杆菌的检查或主题 通过试验让同学把握肠道杆菌的形状、染色特性；明白肠道杆菌的别离鉴定的程教学 目标序；明白肥达试验的原理、方法及临床意义；1、肠道杆菌形状标本的观看；教学 重点2、肠道杆菌的别离鉴定程序；3、肥达试验；肥达试验的原理方法及结果分析 教学 难点教学 方法请挑选你授课时所采纳的教学方法在括号中画“ ”：讲授法 ,争论法 ,演示法 ,案例法 ,发觉法 ,探究法 ,谈话法 ,试验法 ,参观法 ,考察法 ,自学辅导法 ,练习法习题或操作课 ,读书指导法 ,听说法 ,写生法 ,视唱法 ,工序法技能课 ,实习作业法 ,其他 教学 手段讨请挑选你授课时所采纳的教学手段在括号中画“ ”：实
29、物 , 多媒体 , 投影 , 影像 , CAI课件 , PPT ,标本 ,挂图 ,模型 ,其他试验报告论、摸索 题、作业参考 1 杨致邦,叶彬 . 病原生物学与免疫学试验【M】.北京 .科学出版社 .2022 年.2 潘丽红 . 病原生物学与免疫学试验及学习指导【M 】.中国科学技术高校出版社,文献2022 年. 名师归纳总结 - - - - - - -第 16 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 肠道杆菌的检查 试验目的：1、 把握肠道杆菌的形状、染色特性；2、 明白肠道杆菌的别离鉴定的程序；3、 明白肥达试验的原理、方法及临床意义；试验内容：1、肠道杆菌形状标
30、本的观看；2、肠道杆菌的别离鉴定程序；3、肥达试验；试验材料：显微镜、细菌标本、玻片、试管、试管架、吸管、水浴箱、注射器、2.5%碘酒、棉签、生理盐水、 SS 培育基、患者血清1：10 稀释、伤寒杆菌O 菌液、 H 菌液、甲、乙型副伤寒H 菌液；试验方法：一、肠道杆菌的形状观看【材料】大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌革兰染色示教片；【方法】留意上述肠道杆菌形状、排列、道杆菌之间的鉴别依据；二、肠道杆菌培育物与生化反应观看染色的共同点, 故肠道杆菌的染色镜检不能做为肠【材料】 大肠杆菌、 变形杆菌、 痢疾杆菌、 伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌在 SS培育基、 双糖铁、尿素及蛋白胨水培育基上 24
31、小时培育物；【方法】1、观看大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌在EMB培育基上生长情况,留意菌落的形状、大小、颜色及透亮度；表1 五种肠道杆菌在SS培育基上的菌落特点菌种名师归纳总结 培育基大肠杆菌变形杆菌伤 寒 沙乙型副伤寒痢疾杆菌第 17 页,共 22 页门菌沙门菌S.S 菌 落 红 色菌 落 无 色 半菌 落 无同伤寒杆菌同 伤 寒 杆或 呈 红 色透亮,有时带色,半透菌落,菌落菌菌落；- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 琼脂平板之中心, 不黑 心 , 直 径明,直径可带黑心；透亮, 直径2mm左右,有2mm左2-3mm左右时
32、呈 膜 状 生右；长；EMB 菌落扁平,圆形菌落,扁小 至 中无 色 或 半紫黑色, 具平,无色或半等 透 明透亮,光滑有 金 属 光透亮,似沙门或 半 透不 发 酵 乳泽菌明,不发糖,中等大酵乳糖小2、观看大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌在双糖铁、尿素及蛋白胨水培育基上生长情形,留意生化反应与动力的鉴别；表2 五种肠道杆菌生化反应与动力鉴别表乳糖反H2S 应尿素靛基质动力生化菌 名葡萄糖大肠杆菌- - + + 变形杆菌- +/- + +/- + 副伤寒乙杆菌- + - - + 伤寒杆菌+ - -/+ - - + 痢疾杆菌+ - - - +/- - 三、粪便标本中肠道杆菌
33、的别离鉴定一标本采集尽可能在发病早期或治疗前采集新奇粪便,选取脓血或粘液部分,取材后应立刻送检；如不能立刻送检,可将标本储存于30%甘油缓冲盐水中；二检验程序名师归纳总结 - - - - - - -第 18 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 肠道杆菌检验程序三检验方法：1、别离培育【材料】新奇粪便标本、SS琼脂平板；【方法】按上述检验程序进行第一日的检验步骤,即用接种环挑取新奇粪便标本,划线接种于 EMB或 SS平板上, 37培育 24小时；【结果】观看平板上菌落, 依据其大小、 颜色、透亮度等特点, 初步识别可疑病原菌菌落,进行鉴定；在EMB平板上非致病菌菌落
34、较大、2、初步鉴定【材料】双糖铁培育基【方法】紫黑色、 有金属光泽, 不透亮, 而可疑菌落略小, 半透亮；用接种针从可疑病原菌菌落中心点取细菌,穿刺接种双糖铁培育基Kligler培育基,37培育 18-24 小时后,观看结果,并据此判定细菌属性；【结果】上层下层动力H2S 非致病菌+ + - + +- - 痢疾杆菌- + - - - + + + 伤寒杆菌- + + 副伤寒杆菌【用途】初步鉴别肠道致病菌用,可以观看葡萄糖、乳糖的发酵,并可观看有无 H2S产生及细菌有无动力；【原理】名师归纳总结 克氏双糖铁培育基中含有葡萄糖、乳糖、 硫酸亚铁及酚红指示剂等成分；经菌分解葡萄糖产第 19 页,共 2
35、2 页酸时, 使培育基的下层由红变黄,斜面培育基中虽然也含有葡萄糖但量小,且分解产生的酸为挥发性酸并且可被氧化,所以只发酵葡萄糖的细菌斜面仍为红色；产酸并产气时, 培育基- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 中有气泡或裂隙显现；培育基中乳糖含量大,被分解后产酸多,因此不仅培育基下层变黄,而且斜面处也由红变黄,基于上述现象, 通常将培育基的斜面部分代表乳糖,下层部分代表葡萄糖；培育基中含有硫酸亚铁,如有硫化氢产生,就生成黑色硫化亚铁,使培育基中显现黑色；硫代硫酸钠是一种复原剂,防止培育基中氧化物与 3、血清学鉴定H2S作用而影响 FeS的生成；【材料】沙门菌
36、属、志贺菌属多价诊断血清,生理盐水,载玻片等；【方法】1依据初步鉴定结果,选用相应诊断血清做玻片凝集试验；用接种环自双糖铁培育基上挑取少许菌苔,分别磨匀于生理盐水与相应诊断血清中,摇动玻片生理盐水 诊断血清+ + 细菌 细菌1-2 分钟,观看结果2凝集试验阳性者,报告结果；凝集试验阴性者应保留菌种进一步鉴定；【摸索题】1、肠道杆菌有何共同特点？2、大肠、变形、痢疾、伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌的鉴别要点是什么？3、假如大肠杆菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌和痢疾杆菌混杂在肉汤培育基中,你怎样把 它们别离出来,使各自成为纯培育物 . 【附注】痢疾杆菌荧光菌球试验【原理】将相应抗体加在痢疾杆菌的培育液中,
37、虽相互结合, 但细菌不被杀死,在相宜温度下仍能生长,形成痢疾杆菌微小菌团；如在抗体上标记荧光,就形成痢疾杆菌荧光菌球；【材料与方法】1. 将痢疾杆菌接种于含有肯定量的荧光抗体的蛋白胨水中,37培育 10小时；2. 蘸取上述培育物接种环于清法玻片上,放上盖玻片,在荧光显微镜下观看；【结果】荧光球大而发亮呈圆球状,结构较疏松, 四周近似卷发状； 随孵育时间增长, 菌球结构致密,四周较圆,整齐,菌球四周有刺毛,孵育时间短时,菌球往往呈多形性；肥达反应名师归纳总结 - - - - - - -第 20 页,共 22 页精选学习资料 - - - - - - - - - 【方法】1. 取清洁小试管 32支,
38、分成 4排,每排 8支,依次编号；2. 于小试管内各注入 0.5ml 生理盐水；3. 于每一排第一管内加入 1：10稀释的患者血清 0.5ml ,用1ml吸管吹吸三次, 混匀,吸出 0.5ml注入其次管作对倍稀释, 依次稀释至第7管,弃去 0.5ml ,第 8管为对比；4. 从第 8管开头,从后向前,第一排各管内注入伤寒杆菌 H菌液 0.5ml ；其次排各管注入伤寒杆菌 O菌液 0.5ml ；第三排各加入甲型副作寒杆菌 H菌液 0.5ml ；H液0.5ml ；第四排各管加入乙型副伤寒杆菌5. 加完菌液后,振荡试管架,混匀,置于56水浴箱 24小时,放冰箱过夜,或放置37水浴箱 18小时后观看结果肥达氏反应操作表 单位 :ml 试管1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 7 8 对生理盐水照0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1：10 病人0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5血清弃去0.5