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1、第一部分第一部分 微生物的利用微生物的利用实验实验2 2 分离以尿素为氮源的微生物分离以尿素为氮源的微生物浙科版选修11.使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）。2.利用指示剂颜色的变化检知（脲酶）所催化的反应。1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)脲酶+ CO2NH3+ H2O一、基础知识一、基础知识 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等； 方法：抑制大多数微生物生长；造成有利于该菌生长的环
2、境。 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。3、实验室中微生物的筛选原理： 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。4、培养基选择分解尿素的微生物的原理 本实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.48.2，在中性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色， 尿素 NH3 中性 碱性 酚红颜色：黄色 红色细菌、制备无菌的尿素固体培养基和固体培养基尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.1
3、2g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 水 15mlLB培养基 蛋白胨 0.25g 酵母粉 0.12g NaCl 0.25g 琼脂糖 0.5g 水 25ml对照组对照组实验组实验组二、操作过程二、操作过程灭菌后再加尿素灭菌后再加尿素、倒平板：需要倒2个培养基，6个尿素固体培养基LB(对照)尿素10-410-5每个稀释度每个稀释度 1 1个个LBLB对照平板对照平板 3 3个尿素平板个尿素平板( (平行重复组平行重复组) )、制备一定浓度梯度的细菌悬液：g土壤ml无菌水，振荡，为稀释液，依次制备、的土壤稀释液。、稀释涂布分离法分离细菌u取10-4和10-5 各0.1ml菌悬液接 种涂布分离涂布前后三角刮刀需要灼烧吗？涂布前后三角刮刀需要灼烧吗？、培养观察（倒置，度）平板倒置按浓度捆成一摞恒温37培养LB培养基上10-2、10-3、10-4 、10-5稀释度土样涂布结果尿素培养基上10-2、10-3、10-4 、10-5稀释度土样涂布结果