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1、植物细胞工程综合大实验植物细胞工程综合大实验一培养基配制和无菌操作一、实验目的与要求熟练把握器皿的洗涤MS培养基的配制分装培养基和物品的高压灭菌实验室的消毒灭菌植物材料的取材及流水冲洗无菌操作材料的培养观察二、实验原理植物细胞的全能性。三、仪器设备与器具电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。四、实验材料彩云阁茎段用于诱导愈伤组织茎节用于诱导芽五、实验方法与步骤一器皿的洗涤一般器皿有培养物但未污染的器皿有培养物且污染的器皿二MS培养基的配制分装1、MS培养基母液的配
2、制母液A-F，每组配制A-E100ml、F50ml0.1%升汞的配制75%酒精的配制6-BANAA2、MS培养基的配制按每人配制100ml，分5小瓶。经过如下；每组按1L配制，先取容器内加70%的蒸馏水；参加蔗糖30g/L；量取母液A-F；参加PGR本人设计；用容量瓶定容；用0.1-1NNAOH或HCl调整pH5.6-5.8；每人分100ml；加琼脂粉8g/L；分装到5个小三角瓶中、封口。三培养基和物品的高压灭菌培养基、无菌水每组至少5瓶、空瓶每组至少2个、烧杯每组至少1个、培养皿每组至少一套、接种工具2套，包好或者分好以备高压灭菌。高压锅的使用。四实验室的消毒灭菌75%的酒精擦拭超净工作台内
3、外表，新洁尔灭水进行超净工作台外外表、培养架外表、墙壁及其他房间外表的擦拭。五植物材料的取材及流水冲洗选取适宜的彩云阁茎节及茎段，切割成适宜大小后放在流水下冲洗。六无菌操作演示。七材料的培养观察接种完的材料放在培养室的培养架上进行培养。培养初期天天观察一次，持续1周。之后每2-3天观察一次。统计指标：污染率%=污染的外植体个数接种外植体的总数100%。愈伤组织诱导率%=长愈伤外植体个数接种外植体总数100%。芽诱导率%=长芽外植体个数接种外植体的总数100%。八结果与分析植物细胞工程综合大实验二继代、最佳PGR种类和浓度配比一、实验目的与要求确定外植体最佳消毒时间、把握初次继代方法、茎段诱导愈
4、伤组织和茎节诱导芽阶段PGR种类与浓度配比的挑选二、实验原理植物细胞的全能性。三、仪器设备与器具电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。四、实验材料彩云阁茎段用于诱导愈伤组织茎节用于诱导芽五、实验方法与步骤一器皿的洗涤二MS培养基的配制分装1、彩云阁茎段诱导愈伤组织的培养基每人配制5瓶，PGR种类和浓度配比本人设计。2、彩云阁茎节诱导芽的培养基每人配制5瓶，PGR种类和浓度配比本人设计。3、继代培养基每人配制1瓶，PGR种类和浓度配比本人选择确定。三培养基和物品的高压灭菌请本人准备。四实验室的消毒灭菌五植物材料的取材及流水冲洗六无菌操作本人确定材料的消毒灭菌时间。七材料的培养观察每种处理，统计指标：污染率%=污染的种子个数接种种子的总数100%。愈伤组织诱导率%=长愈伤组织个数接种茎段外植体总数100%。芽诱导率%=长芽外植体个数接种茎节外植体的总数100%。八结果与分析