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1、植物细胞工程实验报告植物细胞工程实验报告附开题报告和自选试验报告李洋级班学号：202020年12月实验一、培养基母液的配制摘要：培养基母液的配置是植物组织培养技术中最基础的操作技术之一，培养基的配方是决定培养物能否正常生长或能否能到达培养目的的首要前提。通过本实验把握培养基母液的配制，为以后植物组织培养技术的学习打下基础。关键词：植物组织培养培养基母液1。原理及目的1.1实验目的：通过本实验把握培养基配置的基本原则，以及母液配置的方法。1.2实验原理MS培养基为植物组织培养中的基础培养基，很多的培养基都是在它的基础上发展建立的。培养基是植物细胞、组织和器官汲取营养的场所。在植物细胞的分裂和分化
2、经过中，需要各种营养物质，这些营养物质包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法象整体植株那样合成生长发育所需的全部物质。2.实验试剂与仪器设备2.1药品试剂：MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶或琼脂、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。2.2仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。3.实验内容无机物大量元素硝酸铵NH4NO31650硝酸钾KNO31900钙盐二水氯化钙CaCl22H2O440七水氯化镁Mg
3、Cl27H2O370磷酸二氢钾KH2PO4170无机物微量元素碘化钾KI0.83硼酸H3BO36.20四水硫酸锰MnSO44H2O22.30七水硫酸锌ZnSO47H2O8.60二水钼酸钠Na2MoO42H2O0.25五水硫酸铜CuSO45H2O0.025六水氯化钴CoCl26H2O0.025无机物铁盐七水硫酸亚铁FeSO47H2O27.80EDTA钠盐Na2EDTA2H2O37.3有机物肌醇100.00烟酸0.50盐酸吡哆醇VB60.50盐酸硫胺素VB10.10甘氨酸2.00蔗糖30gpH5.80配置经过如下：分别称取20倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约500mL去离子水中。一种成分完全
4、溶解后再参加下一种，最后加水，定容至1000mL后装入试剂瓶中，存放冰箱内备用。2.微量元素母液200倍液分别称取200倍用量的微量无机盐，依次溶解于约500mL去离子水中，加水定容到1000mL。3.铁盐母液100倍液称取100倍用量的Na2-EDTA乙二胺四乙酸钠和FeSO47H2O，溶于约500mL去离子水中，最后定溶到1000mL。4.钙盐母液(20倍):称取20倍用量的CaCl22H2O溶于500mL去离子水中，最后定溶到1000mL。5.有机物质母液100倍液分别称取100倍用量的各种有机物质，依次溶解于约500mL去离子水中，定容至1000mL装入棕色试剂瓶中，存放在冰箱中备用。
5、4.实验结果及分析4.1结果根据步骤配好母液：大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，放在冰箱中保存。4.2实验中注意事项：1、配置一些难容的物质时，为了保证母液浓度的准确性，一定要等药品充分溶解后在定容。2、称量微量元素时要用分析天平，称量时一定要准确。3、母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。实验二、香蕉吸芽的组织培养摘要：香蕉传统的繁衍方法多采用吸芽分株繁衍法，这种方法的繁衍系数低，速度慢，而且容易传播疾病。利用组织培养的技术来对香蕉优质品种进行无性繁衍，这样不但能够保持香蕉的优良性状，加快繁衍速度，而且，试管苗不带病虫害和病毒病，此外，利用组织培养技术得到的幼苗生长比拟一致，
6、有利于田间的管理和采收。本实验利用香蕉的吸芽作为外植体，诱导培养基为MSBA5.0mgL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶，继代培养基为MSBA5.0mgL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶关键词：组织培养蕉吸芽灭菌外植体1、实验目的香蕉为热带地区广泛栽培食用，味香、富于营养，并且有多种用处，终年可收获，在温带地区也很受重视。香蕉其实在自然条件下以种子繁衍。传统的繁衍方法多是采用吸芽分株法，这种方法的繁衍系数低，速度慢，难以知足当前大规模的栽培生产，且容易传播疾病。利用组织培养的技术来对香蕉优质品种进行无性繁衍，这样不但能够保持香蕉的优良性状，加快繁衍速度2、实验材料和步骤:2.1材料(1
7、)香蕉吸芽：从农学院基地挖取品种优良无病虫害的香蕉吸芽(2)实验采用MS基本培养(3)诱导培养基：MSBA5.0mgLL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶(4)继代培养基：MSBA5.0mgLL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶(5)PH：5.8-6.02.2步骤2.2.1外植体消毒用自来水冲洗吸芽外表的泥土，剥离外假茎，只留下茎和假茎各2-3cm长，假茎的的直径有2-3cm，然后，用洗衣粉清洗一遍，用自来水冲洗，转入0.1%升汞浸泡15-20min，其间不断搅拌，弃去升汞用无菌水洗3遍无菌水漂洗：将从升汞中取出的香蕉吸芽组织块转入无菌水中漂洗，不断摇动使漂洗干净留在瓶中备用。2.2.2诱
8、导培养将香蕉吸芽放到无菌工作台的无菌纸上，用消毒刀将外植体的假茎的最外层剥掉，以及有消毒刀将已经变色的茎外面一小层也切掉，然后从外植体茎中间一分为四，接入诱导培养基，共8瓶。7天后观察，发现诱导培养基中香蕉吸芽组织裂开并且有转绿现象。2.2.3继代培养将已经启动培养的香蕉材料从培养室内取出，在超净工作台上将生长良好的香蕉芽丛分开，切去顶部叶片部分，削去底部褐化部分，将芽丛接种于香蕉继代增殖培养基中。继代增殖培养中每瓶培养基的接种香蕉芽丛数2代内可为1-2块，3-4代可为3-4块。2.2.4培养：在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。3、实验结果与分析：3.1对香蕉的吸芽进行诱导培养时，共
9、接种了4瓶，污染率为1瓶，后来有一瓶在培养经过中死去了。讲明用0.1%的升汞对香蕉的吸芽消毒18min的时间控制比拟合理，造成污染的原因可能是由于操作不熟或者接种经过中导致然菌。3.2继代培养时获得了2瓶继代培养物，但是都发生褐化现象，并没有发育成苗。可能的原因是由于继代培养时，并没有完全切除掉原来的褐化组织导致继代培养继续发生褐化。3.3由实验结果与分析可知，诱导培养基对外植体诱导效果不错，讲明诱导培养基比拟合理，由于褐化并未得到分化的小苗，不能验证分化培养基能否合理。3.4实验中注意事项：1、香蕉吸芽组织不能太大也不能太小，大小适宜才能在以后的操作中方便使用。；2、在升汞中灭菌时要注意不断
10、摇摆，是灭菌充分彻底。3、发现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；4、按时观察，认真描绘并做好记录香蕉的生长状况。实验三、烟草叶片组织培养摘要：烟草具有多种实际应用价值，在药用、工业和保健业都有重要用处。烟草一般采用有性繁衍，但繁衍的烟苗不平衡，易发生变异，而且易感病菌，造成多种病害发生，品质退化，进而影响经济收人，所以烟草组织培养具有重要的意义。本实验利用烟草的叶片作为外植体，培养基为MSBA1.0mgL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶，进行对烟草进行组织培养，以获得烟草的组培苗。关键词：植物组织培养烟草叶片诱导外植体1、实验目的烟草具有多种实际应用价值，在药用、工业和保健业都
11、有重要用处。烟草更是重要的经济作物。并且烟草生长速度快，生长周期短，也是基因工程中最为广泛使用的形式植物之一。烟草一般采用有性繁衍，但是后代生长势不平衡，并且易发生变异，而且易感病菌，造成多种病害发生，品质退化，进而影响经济收入，所以烟草组织培养具有重要的意义。2.1材料1、烟草叶片2、诱导培养基：MSBA1.0mgLL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶3、继代培养基：MSBA1.0mgLNAA0.5mgLL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶2.2方法2.2.1外植体消毒方法将烟草叶片洗净，将烟草叶片左右垫与牛皮纸上用手术刀切取2cm长，2cm宽的无主叶脉、主侧叶脉的长方形叶片块10片左右
12、，置于加了1-2滴土温的0.1%的升汞溶液中消毒10-15min，期间注意不断摇动，取出叶片置于无菌水中清洗3次，留于最后清洗的无菌水中备用。2.2.2诱导培养将烟草叶片取出将叶片周遍切去，再将每片叶切成2片，接入诱导培养基中，每7天观察记录一次。2.2.3继代培养待烟草的愈伤组织分化成为烟草的叶片与茎时，从诱导培养基中取出烟草幼苗分成小丛后转接继代培养基中，每7天观察记录一次。假如需要分化获得更多的烟草幼苗能够再次接入诱导培养基中培养。2.2.4培养条件：培养温度为28-1、+1，光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，,每个星期观察一次。3.实验试剂与仪器设备3.1药品试剂：M
13、S培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶或琼脂、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。3.2仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。4、实验结果与分析：4.1第一次烟草组织培养时，全部被污染，污染率100%，诱导率为0。原因可能有两个，1用升汞消毒的时间过短，为了和同学们作对照，我的消毒时间是最短的12min，因而应适当延长消毒时间。2由于做实验前后几天，天气一直阴天下雨，可能对实验造成影响，增加了然菌的的时机。第一次烟草诱导培养结果统计表4.2由于第一次诱导培养的材料均被污染，而后来做继代培养时已经
14、没有实验材料，并且已经来不及从新在做，所以继代培养没能正常进行。4.3由实验结果与分析可知，烟草叶片的组织培养污染率比拟高，讲明用实验中的消毒方法可能存在一些弊端，此外，在操作时应该格外注意，以防止感染杂菌。4.4实验中注意的问题：1、烟草叶片要平放在培养基外表，并且要让切口与培养基充分接触，有利其吸收养分；2、在升汞里消毒时间不宜太长，也不宜太短，要控制好消毒时间；3、在组织培养观察的经过中，发现有污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的。实验四、木薯的组织培养摘要：木薯是用其茎干来进行无性繁衍的，但是往往新品种刚刚出现时，其茎干是非常有限的，因而利用组织培养的方法不仅能够保持母树的性状
15、，而且繁衍速度快，有利于品种的推广。本实验利用木薯的茎段作为外植体，诱导培养基为MS+0.5mg/LCaSO4+4.0mg/L2,4-DL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶,完成对木薯茎秆的组织培养。关键词：木薯茎段诱导组织培养外植体1、实验目的与意义木薯是重要的热带经济作物其块根富含淀粉，是节粮型的淀粉资源，在饲料、食品、化工、医药、纺织、造纸等方面。木薯是用其茎干来进行无性繁衍的，但是往往新品种刚刚出现时，其反制材料是非常有限的，利用对木薯茎段的组织培养不仅能够保持母树的性状，而且还能大大提高繁衍速度。2、实验材料与步骤：2.1实验材料：1、木薯幼枝2、诱导培养基：MS+0.5mg/LC
16、aSO4+4.0mg/L2,4-DL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶2.2步骤2.2.1外植体的消毒方法：从苗圃剪取幼嫩木薯枝条，剪去叶子，然后以一个芽节为一段芽节上下端保持1.5cm左右切下，在置于0.1%升汞溶液中消毒10-15min左右，其间注意不断摇动，取出木薯枝条置于无菌水中清洗3次。2.2.2诱导培养将消毒好的木薯枝条取出，置于无菌的牛皮纸上，切去上下端各一小部分后，接入诱导培养基中培养，7天后观察。2.2.3培养条件：在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。3.实验试剂与仪器设备3.1药品试剂：MS培养母液、蔗糖、卡拉胶或琼脂、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、B
17、A等。3.2仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。4、实验结果与分析4.1结果分析：一共接种4瓶木薯，每瓶中接种2个木薯茎段。培养一周后观察，发现有两瓶污染，污染率到达50%。可能的原因如下：1、在升汞中消毒的时间不够，应再适当延长消毒时间；2、取材的时间不合理，由于气候问题，增加了然菌的时机。3、可能由于实验经过中有些操作不规范导致，比方在接种时讲话。4.2实验中注意的问题1、实验经过中要严格注意操作步骤，注意全程无菌操作。2、在对木薯茎段灭菌经过中，一定要控制好灭菌时间，在灭菌经过中要不断摇摆，是升汞
18、溶液充分和茎段接触，是灭菌彻底。3、组织培养的经过中，发现有污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的。4、接种后在定期观察，认真做好实验记录。实验五、桉树的组织培养摘要：桉树有性繁衍很容易引起变异，很难保持物种的优良性状，无性繁衍如扦插等繁衍得很慢，无法知足生产的需要。而桉树组培快繁可使桉树保持其遗传稳定性，其繁衍系数大，一年内一个桉树带节茎段，能够繁育百万株以上的苗木。本实验利用桉树的茎段作为外植体，诱导培养基为MSNAA0.5mgL6-BA1.0mgL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶关键词：桉树茎段诱导培养外植体1、实验目的与意义桉树是当今世界三大速生树种之一,已成为我国大面积造林
19、和“四旁植树的主要树种。它的显桉树的木材是造纸、坑木、造船等良材，叶子可提油料，树皮可提树脂，残渣培养食用菌后还可当肥料，花是良好蜜源。桉树是异花授粉作物，有性繁衍很容易引起变异，很难保持物种的优良性状，无性繁衍如扦插等繁衍得很慢，无法知足生产的需要。而桉树组培快繁可使桉树保持其遗传稳定性，其繁衍系数大，一年内一个桉树带节茎段，能够繁育百万株以上的苗木。2、实验材料与步骤：2.1实验材料：1、桉树幼枝2、芽的诱导培养基：MSNAA0.5mgL6-BA1.0mgL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶2.2步骤2.2.1外植体的消毒方法：采取幼嫩桉树枝条选取腋芽还没有抽出芽枝的，剪去叶子，置于清水
20、下洗净，在洗衣粉水中浸泡20min左右，清洗干净后用流水自来水冲洗到下午做实验时。取出以一个芽节为一段芽节上端保持1-1.5cm，下端2cm左右切下，在置于0.1%升汞溶液中消毒10-15min，其间注意不断摇动，取出桉树枝条置于无菌水中清洗3次。2.2.2芽的诱导培养将消毒好的桉树枝条取出，置于无菌的牛皮纸上，切去上下端各一小部分后，接入芽的诱导培养基中培养。2.2.3培养条件：在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。3.实验试剂与仪器设备3.1药品试剂：MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶或琼脂、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。3.2仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸
21、、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。4、实验结果与分析4.1结果分析：总共接种5瓶桉树，每瓶中接种2个桉树茎段。培养一周后观察，有两瓶被污染，污染率为40%。可能的原因如下：可能的原因如下：1、在升汞中消毒的时间不够，应再适当延长消毒时间；2、取材的时间不合理，由于气候问题，增加了然菌的时机。3、可能由于实验经过中有些操作不规范导致，比方在接种时讲话。4.2实验中注意的问题：1、外植体一定要选取幼嫩的桉树枝条，老的组织不易培养。2、在植入外植体时要注意几条的形态学上下端，要注意使形态学下端插入到培养基中。3、组织培养的经过中，发现有污染
22、的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的。4、接种后在定期观察，认真做好实验记录实验六、柱花草的组织培养摘要：柱花草主要用于放牧、水土保持、果园间作、青饲料及干草粉加工，成为热带亚热带地区的希望之草，有着广泛的用处。本实验利用柱花草的叶片作为外植体，诱导培养基为MS+BA4.0mg/L+NAA1.0mg/ml+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶关键词：柱花草叶片诱导组织培养外植体柱花草又名热带苜蓿、巴西苜蓿，原产于美洲的热带。分布于世界热带、亚热带。柱花草生长快而茂盛，再生性较强，年可刈割23次，产草量高，每公顷产鲜草3060t，而且营养价值较高，栽培也比拟容易，可刈割青饲、青贮、调制干草或放
23、牧利用。因此在我国南方热带和亚热带地区作为饲草有种植推广价值。1、实验目的组织培养是生物技术育种的基础，具有无性繁衍快，时代间隔短，不受季节影响，可严格控制培养条件等特点，是当今应用当代生物学技术改进作物的主要措施之一。本实验即采用住花草叶片为外植体对住花草进行组织培养，为柱花草的育种改进提供原材料。2、实验材料和步骤:2.1材料1、柱花草叶片2、诱导培养基为MS+BA4.0mg/L+NAA1.0mg/ml+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶2.2步骤2.2.1外植体消毒方法将柱花草叶片洗净，然后将叶片放在牛皮纸上，用手术刀切取2cm长的片块10片左右，置于0.1%的升汞溶液中消毒10min，
24、期间注意不断摇动，取出叶片置于无菌水中清洗3次，留于最后清洗的无菌水中备用。2.2.2诱导培养将柱花草叶片取出放入超净工作台中无菌的牛皮纸上，然后将叶片两端切去少许，接入诱导培养基中，每7天观察记录一次。2.2.3培养条件：在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。3.实验试剂与仪器设备3.1药品试剂：MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶或琼脂、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。3.2仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。4、实验结果与分析：4.1第一次对柱花草进行诱导培养时，接种三瓶，
25、结果全部污染。原因可能是，用升汞消毒的时间过短，因而应适当延长消毒时间，或者用其他的消毒方法。由实验结果与分析可知，柱花草叶片的组织培养污染率比拟高，讲明取材方法和消毒措施不佳，可4.3实验中注意的问题：1、要选取幼嫩的柱花草叶片为实验材料，切取外植体时也一定要切叶尖等幼嫩部位2、消毒时一定要注意不时摇摆升汞溶液，使升汞溶液与外植体充分接触。3、发现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；4、定期观察，观察时要仔细，认真描绘柱花草生长状况。实验七、玉米成熟胚的培养摘要：玉米组织培养及再生，目的是让外植体能够高频率地诱导出愈伤组织，建立高效的体细胞再生体系，为玉米遗传转化操作和细胞工程研究
26、创造有利条件。本实验采用MS培养基对玉米的成熟胚进行诱导培养。关键词：玉米胚诱导培养基培养1、实验目的玉米是一种非常重要的粮食和饲料作物,近些年,地球资源的短缺向玉米等生物能源的供给者提出了迫切的要求,组织培养工作是玉米遗传转化的重要环节，玉米的组织培养能让玉米组织能够高效的诱导出愈伤组织建立高效的体细胞再生体系，为玉米遗传转化操作和细胞工程研究创造有利条件。2、实验材料与步骤：2.1实验材料：1、新鲜玉米种子2、培养基：MS培养基+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶2.2步骤2.2.1种子的消毒方法：从新鲜的玉米棒上剥下玉米粒20粒左右，直接在转入0.1%升汞溶液中消毒10-20min左右，
27、期间注意不断摇动，取出置于无菌水中清洗3次留于瓶中备用。2.2.2诱导培养将消毒好的玉米粒取出，置于无菌的牛皮纸上，切开玉米粒将其胚挑出接入12MS培养基中培养。2.2.3培养条件在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。3.实验试剂与仪器设备3.1药品试剂：MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶或琼脂、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。3.2仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。4、实验结果与分析4.1结果分析：用MS培养基对玉米的不成熟培养一周后观察，培养基中不成熟玉米胚已发育成玉米苗
28、，根、茎、叶齐全且长势良好高度到达了5cm左右，诱导率到达100%，污染率为0；两周后观察，高度已经高达12cm左右。讲明玉米的不成熟胚易于脱毒，而且容易诱导。4.2实验中注意的问题：1、一定要挑取健康的无病的；2、倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀；3、现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；4、按时观察，并且做好记录玉米的生长的状况。实验八、花生成熟胚的培养摘要：花生的组织培养及再生是选育新品种的重要手段，通过对花生成熟胚的培养，能够建立高效的体细胞再生体系，为花生的遗传转化操作和细胞工程研究创造有利条件。本实验采用MS培养基对花生的成熟胚进行诱导培养。
29、关键词：花生胚诱导培养基培养1、实验目的花生在经济生活中占有特别重要的地位。花生的组织培养及再生是选育新品种的重要手段，通过对花生成熟胚的培养，能够建立高效的体细胞再生体系，为花生的遗传转化操作和细胞工程研究创造有利条件。2、实验材料与步骤：2.1实验材料：1、花生成熟种子2、培养基：MS培养基+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶2.2步骤2.2.1种子的消毒方法：取成熟花生剥取花生粒15粒左右，直接置于0.1%升汞溶液中消毒10-20min左右，期间注意不断摇动，取出置于无菌水中清洗3次留于瓶中备用。2.2.2诱导培养将消毒好的花生粒取出，置于无菌的牛皮纸上，将其子叶掰开将其胚挑出接入12M
30、S培养基中培养。2.2.3培养条件在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。3.实验试剂与仪器设备3.1药品试剂：MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶或琼脂、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。3.2仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。4、实验结果与分析4.1结果分析：本实验用MS培养基对花生的成熟培养一周后观察，培养基中成熟花生胚已发育成玉米苗，根、茎、叶齐全且长势良好高度到达了5cm左右，诱导率到达100%，污染率为0；两周后观察，高度已经高达10cm左右。讲明花生的成熟胚易于脱毒，
31、而且容易诱导。4.2实验中注意的问题：1、一定要挑取健康的无病的2、实验时要不时摇摆升汞溶液，使溶液与其充分接触，到达理想的消毒效果；3、现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；4、按时观察，并且做好记录花生胚的生长的状况。实验九、水稻盾片的组织培养摘要：水培育高产优质的水稻品种一直是世界范围的重要研究课题。由于水稻盾片取材方便，在实际的研究工作中作为诱导愈伤组织的外植体材料;应用越来越广泛。本实验以水稻盾片为外植体，用MS培养基为发芽培养基、用诱导培养基：MS2，4-D2.0mgLBA1.0mgL+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶，来对其进行组织培养。关键词：水稻盾片诱导培养外植体
32、1、实验目的世界上近一半人口，都以大米为食。大米的食用方法多种多样，有米饭、米粥、米饼、米糕、米线等。水稻除可食用外，还能够酿酒、制糖作工业原料，稻壳、稻秆也有很多用途。目前组织培养技术已被广泛应用于水稻育种研究中。本实验通过对水稻盾片的诱导培养和继代培养可得到水稻的组培小苗。2、实验材料与步骤：2.1实验材料：1、水稻枯燥成熟种子2、水稻发芽培养基MS3、诱导培养基：MS2，4-D2.0mgLBA1.0mgL2.2步骤2.2.1外植体的消毒方法：取水稻种子20-30粒，在室温下直接浸于0.1%升汞溶液中消毒20min左右，其间注意不断摇动，取出种子置于无菌水中清洗3次。2.2.2诱导培养将发
33、芽好的幼苗从培养基中取出，取下水稻的盾片，接入诱导培养基中培养。2.2.3培养条件在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。2.实验试剂与仪器设备2.1药品试剂：MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶或琼脂、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。2.2仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。3、实验结果与分析3.1用MS培养基诱导水稻种子发芽，总共接种4瓶，每瓶接种3粒水稻种子。培养1周后观察，发现所有的水稻种子以发芽，并且都以长出小苗。3.2第二次诱导培养时，接种4瓶，一周后观察，有一瓶被污染，另外三瓶发生褐化现象，并没有完成诱导。可能原因：在配置培养基时，母液中的某些成分已经变性，或者在配置的经过中可能加错了剂量。3.3实验中注意的问题：1、取水稻种子时一定要注意挑取饱满的水稻种子。2、在水稻盾片移植到继代培养基时一定要注意无菌操作，防止杂菌侵入。3、在组织培养的经过中，发现有污染的外植体，要及时清理干净。按时定期观察记录。