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1、细胞生物学实验报告记录实验一：细胞的形态观察及其大小测量一、实验目的：1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微构造；2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。二、实验材料和仪器：小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。三、实验步骤：(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察1人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。2鸡血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。2、植物细胞的观察1取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本构造。二细胞的大小和测量1、卸下
2、目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少m：镜台测微尺的格数目镜测微尺每格的微米数=10目镜测微尺的格数四、实验结果：1、目镜校正：40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.242、细胞大小的测量：测量次数细胞种类一/um二/
3、um三/um平均/um人肝细胞1019.4421.3618.0018.9616.3219.6817.9220.0040血红细胞107.207.687.687.5240血白细胞109.129.609.849.5240血小板10101.441.441.441.44栅栏组织109.1279.2010.0881.1210.5680.649.9280.3240五、作业与考虑：1、血细胞按含量高低，主要含有：红细胞，白细胞，血小板。白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。红细胞：主要的功能是运送氧。白细胞：主要扮演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。血
4、小板：止血经过中起着重要作用。细胞形态见下列图。2、植物细胞一般比动物细胞大一些。形态图见下。3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小基本一致，但有一些偏差。放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。实验二：PASPeriodicAcidSchiff反响显示糖原和其它多糖物质一、实验目的1、熟悉PAS法原理及操作步骤；2、观察PAS反响的染色结果，并观察多糖在组织细胞中的分布。二、实验原理多糖是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。一些不溶性的多糖构成植物和动物的骨架，如植物的纤维素和动物的甲壳素，一般称为构造多糖。另一些多糖在生物体内作为能量储存，如淀粉植物和糖元
5、动物，在需要时能够通过生物体内酶系统的作用分解，释放出单糖。三、实验用品：过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、苏木精溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯1：1。梯度乙醇溶液：100，95，90，80，70，50各两份，一份用于脱腊复水，一份用于脱水。载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片、土豆；小鼠肝细胞石蜡切片。四、实验步骤:一土豆切片的观察制作土豆徒手切片过碘酸处理1530min70%乙醇1minschiff试剂15min亚硫酸水漂洗23次蒸馏水漂洗镜检二小鼠肝细胞切片的观察取鼠肝石蜡切片二甲苯脱蜡约10min二甲苯+100%乙醇3min梯度乙醇脱二甲苯，在
6、各浓度乙醇100，95，90，80，70，50中约23min过碘酸氧化1530min蒸馏水漂洗Schiff试剂1530min亚硫酸水漂洗23次蒸馏水漂洗苏木精染色10min流水冲洗梯度乙醇脱水50，70，80，90，95，100，在各乙醇浓度中约23min100%乙醇+二甲苯23min二甲苯适度透明指甲油封片镜检五、实验结果：六、作业与考虑:1、描绘土豆切片和鼠肝切片中糖原分布特点。土豆切片中，多糖多在细胞质液泡中。鼠肝切片中，多糖多在靠近核的区域。2、影响PAS反响染色效果的关键步骤是什么？Camey固定液固定；Schiff染色液染色；对分色的控制。3、怎样制作徒手切片？应注意什么才能得到薄
7、而均匀的切片？应注意需要连续快速地切下多片薄片，并从中选出较好的切片。实验三：叶绿体的分离与荧光观察一、实验目的：1、通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法。2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。二、实验原理：将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。将匀浆液1000r/min的条件下离心2min,以去除其中的组织残渣和未被破碎的完好细胞。然后，在3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。某些物质在一定短波长的光如紫外光的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射
8、出比照射光波长更长的光，这种光就称为荧光。若停止供能，荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光称为自发荧光。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光称为间接荧光。三、实验材料和仪器：普通离心机,粗天平,荧光显微镜，剪刀，研钵，移液管，漏斗，滴管,10ml刻度离心管,纱布若干,无荧光载玻片和盖玻片，新鲜菠菜，0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙(acridineorange)、四、实验步骤：1、叶绿体的分离1选取新鲜的菠菜嫩叶，洗净擦干后，去除叶梗及粗脉并剪碎，称取2g左右，置于预冷的研钵；2加10ml的0.35mol?L-1NaCl溶液研
9、磨匀浆；3用6层纱布过滤，滤液盛于烧杯中；4取滤液4ml于1000rpm离心2min，弃去沉淀；5将上清液3000rpm离心5min，弃去上清液，沉淀即为叶绿体混有部分细胞核；6沉淀用0.35molL-1NaCl溶液悬浮。2、叶绿体的观察1滴叶绿体悬浮液一滴于载片上，加盖片；在普通光镜下观察，注意观察所分离的叶绿体的形态以及其能否完好。2滴叶绿体悬浮液一滴于无荧光载片上，加无荧光盖片；在荧光显微镜下观察叶绿体有无自发荧光，其颜色怎样。3滴叶绿体悬浮液一滴在无荧光载片上，再滴加一滴0.01吖啶橙荧光染料，加无荧光盖片后即可在荧光显微镜下观察其次生荧光。3、完好细胞中的叶绿体观察1用镊子撕取一片菠
10、菜叶子表皮，平铺于载玻片上，滴加一滴提取缓冲液，加盖片后轻压，备用。2用镊子撕去菠菜叶子的表皮，用刀片刮下一些叶肉细胞，放于载玻片上，滴加一滴提取缓冲液，加盖片后轻压，备用。3将以上两种制片进行一下三种方式的观察：a、通光镜下观察。b、光显微镜下观察。c、加一滴0.01吖啶橙荧光染料，加无荧光盖片后，在荧光显微镜下观察。五、实验结果:叶绿体自发荧光叶绿体次生荧光六、作业与考虑：1、描绘你所观察到的实验现象，自发荧光和次生荧光的区别？自发荧光：有些生物体内的物质受激发光照射后，直接发出的荧光称为自发荧光，如叶绿素的火红色荧光。间接荧光：有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光
11、，则称为间接荧光，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。2、叶绿体分离的原理是什么？操作经过中应注意什么？通过研磨绿色植物叶片使叶肉细胞破损，叶绿体被释放到提取液中，再通过等渗介质中差速离心去除杂质，再次离心，则可分离出叶绿体沉淀。应注意须在低温下迅速提取，且须注意等渗液溶度，离心速度和时间的把握，避免叶绿体破裂。表皮细胞荧光木质素荧光表皮细胞光镜实验四：吖啶橙(acridineorange)染色观察口腔上皮荧光一、实验目的1、熟悉荧光显微镜的原理及使用方法。2、观察荧光染料染色后结合物发出的荧光。二、实验原理吖啶橙荧光染料可与细胞内DNA和RNA结合。其吸收光谱405nm，发射的荧光光谱是530640nm，因而，吖啶橙和不同的细胞成分结合后，可发射红橙黄绿蓝各色荧光。三、实验用品荧光显徽镜、载玻片、盖玻片、染色缸、牙签；口腔黏膜上皮细胞临时制片；0.1mol/LpH7、0PBS液。0.1吖啶橙原液、95乙醇四、实验步骤1、用牙签刮取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上；2、95乙醇溶液固定5min；3、滴加0.01吖啶橙染液染色5min；4、用PBS缓冲液缓慢冲洗；5、加盖玻片镜检。五、实验结果口腔上皮细胞荧光