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1、检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质_尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质，阐明实验原理 颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。二、实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。1、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。可溶性
2、还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu2O沉淀。如：葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH 加热 葡萄糖酸+ Cu2O （砖红色）+ H2O即Cu 2+被还原成Cu2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色 棕色 砖红色沉淀淀粉遇碘变蓝色（直链）或紫（红）色（支链）。2、脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。在病理检
3、验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹，苏丹，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度（37-60）对组织切片染色效果是有好处的。脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油、明胶和阿拉伯糖胶等。脂肪可以被苏丹染液染成橘黄色或橙红色（或被苏丹染液染成红色），胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。3、蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH
4、溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。）三、实验材料：1、做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。2、做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡34小时（也可用蓖麻种子）。3、做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。4、淀粉的鉴定：马铃薯匀浆。四、实验用具：双面刀片、试管（最好用刻度试管）、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜五、实验试剂：1
5、斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）2苏丹或苏丹染液3双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）4体积分数为50%的酒精溶液5碘液6蒸馏水六、方法步骤：一、可溶性糖的鉴定应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu ( OH )2在70 900C下分解成黑色CuO和水；甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，
6、无Cu OH生成。4. 试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 棕色 砖红色（沉淀）花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。因为浸泡时间短，不易切片；浸泡时间过长，组织较软，切片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。鉴定。加样液约2ml于试管中，加入双缩脲试剂A，摇匀；再加入双缩脲试剂B液34滴，摇匀，溶液变紫色。先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时
7、加入，会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。1、常见还原性糖与非还原性糖有哪些？ 答：葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。2、还原性糖植物组织取材条件？ 答：含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。3、研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？ 答：加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？ 答：混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。5、还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为？ 答：浅蓝色棕色 砖红色。6、花生种子切片为何要薄？ 答：只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。7、转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？ 答：切片的厚薄不均匀。8、脂肪鉴定中乙醇作用？ 答：洗去浮色。9、双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化？ 答：不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。第 7 页 共 7 页