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1、一、目的与要求一、目的与要求 了解培养基的配制原理。了解培养基的配制原理。 掌握配制培养基的一般方法和步骤。掌握配制培养基的一般方法和步骤。 了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。围。 学习高压蒸汽灭菌的操作方法。学习高压蒸汽灭菌的操作方法。二、基本原理二、基本原理1、培养基的配制、培养基的配制 培养基是人工配制的适合微生物生长培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。用以繁殖或积累代谢产物的营养基质。用以培培养、分离、鉴定、保存各微生物或积累代养、分离、鉴定、保存各微生物或积累代谢产物谢产物。培养基包括有：碳源物质、氮源。培养基包括有：碳
2、源物质、氮源物质、无机盐类、水等，由于培养的微生物质、无机盐类、水等，由于培养的微生物种类不同，培养的目的不同，因此，培物种类不同，培养的目的不同，因此，培养基的组成也就不同。养基的组成也就不同。2、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌是将高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于继续加热，此时由于蒸汽不能溢出蒸汽
3、不能溢出，而，而增增加了灭菌器内的压力加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，从而使沸点增高，得到高于得到高于1000C的温度，的温度，导致菌体蛋白质导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的凝固变性而达到灭菌的目的。n试剂：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，氯化钠0.5%，固体琼脂2%，水150ml，PH=7.27.4，121灭菌20min。n仪器及其他用具：锥形瓶，烧杯，量筒，天平，试管夹，棉花，油纸，纱绳，PH试纸，电炉，托盘天平。n1 1、培养基的配制（、培养基的配制（牛肉膏蛋白胨培养牛肉膏蛋白胨培养基）基）n准确准确称量称量 加水溶解加水溶解 加热溶化加热溶化调调pHpH至至7.2-7.47.2-
4、7.4加琼脂加琼脂 煮沸煮沸 分分装装加棉塞加棉塞包扎包扎1211210 0C C灭菌灭菌20min20minu称药品时严防药品混杂，一把药匙用称药品时严防药品混杂，一把药匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再取另一种药品。试剂瓶净，擦干，再取另一种药品。试剂瓶盖不要盖错。盖不要盖错。u在配制好培养基后一定要注意调培养在配制好培养基后一定要注意调培养基溶液的基溶液的pHpH。u在烧杯融化琼脂和明胶的过程中，人要在在烧杯融化琼脂和明胶的过程中，人要在电炉旁看着，以免培养基因沸腾而溢出烧电炉旁看着，以免培养基因沸腾而溢出烧杯。同时，需不断搅拌，以防琼脂和明
5、胶杯。同时，需不断搅拌，以防琼脂和明胶糊底烧焦。糊底烧焦。u分装过程中，注意不要使培养基沾在管口分装过程中，注意不要使培养基沾在管口上，以免沾污试管塞而引起污染。上，以免沾污试管塞而引起污染。n2 2、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌n检查高压锅水位检查高压锅水位 将待灭菌物品放在提将待灭菌物品放在提篮里篮里 盖上锅盖，旋紧螺丝盖上锅盖，旋紧螺丝 加热，打加热，打开放汽阀，排出冷空气开放汽阀，排出冷空气 直至冒出白色直至冒出白色蒸汽为止蒸汽为止 关闭放汽阀关闭放汽阀 上磅至所需压上磅至所需压力力 维持至所需时间维持至所需时间 切断电源切断电源 待待压力降至零打开锅盖，取出灭菌物品压力降至零打开锅盖，
6、取出灭菌物品 摆成斜面或直立摆成斜面或直立 冷凝后置冷凝后置370C培养箱培养箱内培养内培养24h，检查灭菌是否彻底。，检查灭菌是否彻底。n注意事项：注意事项：u 要检查高压锅的水位，以免高压灭菌要检查高压锅的水位，以免高压灭菌锅被损坏；锅被损坏；u 要排尽高压锅内的冷空气，以免造成要排尽高压锅内的冷空气，以免造成假压，达不到压力表所指示的相应温假压，达不到压力表所指示的相应温度。度。u 待压力表降为待压力表降为“0”“0”时，放可打开高时，放可打开高压锅锅盖，以免烫伤；压锅锅盖，以免烫伤；六、思考与讨论思考与讨论1、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的如何检查灭菌后的培养基是无菌的。2 2、高压蒸汽灭菌锅开始灭菌之前，为什、高压蒸汽灭菌锅开始灭菌之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待压力降为为什么要待压力降为“0”0”时才能打开时才能打开排气阀，开盖取物排气阀，开盖取物。3、灭菌在微生物实验操作中有何重要意、灭菌在微生物实验操作中有何重要意义？义？