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1、一、目的要求一、目的要求 1学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。握其基本技能。 平板分离法中的稀释涂布平板法，能有效分离纯化微生物外，还可用平板分离法中的稀释涂布平板法，能有效分离纯化微生物外，还可用于测定样品中活菌数量。于测定样品中活菌数量。 平板菌落计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上；经过培养平板菌落计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上；经过培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据稀释倍数和取样后在平板上形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。由于待测样品往往不易完全分散成单个细
2、量计算出样品中细胞密度。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖而成，有的可胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖而成，有的可能来自能来自2 2个或多个细胞。因此，平板菌落计数的结果往往比样品中实个或多个细胞。因此，平板菌落计数的结果往往比样品中实际细胞数低，这就是现在使用菌落形成单位（际细胞数低，这就是现在使用菌落形成单位（colony-formingcolony-forming unitunit，CFUCFU）取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。）取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。 二、实验原理二、实验原理 三、实
3、验器材和试剂三、实验器材和试剂 酒精灯，记号笔，标签，火柴，灭菌培养皿酒精灯，记号笔，标签，火柴，灭菌培养皿菌种，平板，培养基菌种，平板，培养基 1 1、编号：、编号： 取无菌牛肉膏蛋白胨培养皿取无菌牛肉膏蛋白胨培养皿9 9套，分别用记号笔标明套，分别用记号笔标明1010-4-4、1010-5-5、1010-6-6（稀释度）各（稀释度）各3 3套。另取套。另取6 6支盛有支盛有4.5ml4.5ml无菌水无菌水的试管，依次标明的试管，依次标明1010-1-1、1010-2-2、1010-3-3、1010-6-6。 2 2、稀释：、稀释： 用用1ml1ml无菌吸管准确吸取无菌吸管准确吸取0.5ml
4、0.5ml已充分混匀的大肠杆菌培已充分混匀的大肠杆菌培养液（待测样品），加入标有养液（待测样品），加入标有1010-1-1字样的试管中，此为字样的试管中，此为1010倍稀释。将倍稀释。将1010-1-1试管在手掌或置震荡器上震荡，使菌试管在手掌或置震荡器上震荡，使菌液充分混匀。接着取液充分混匀。接着取0.5ml0.5ml 1010-1-1菌液精确地放入菌液精确地放入 10 10-2-2试试管中，此为管中，此为100100倍稀释倍稀释.其余依次类推。其余依次类推。 四、实验操作四、实验操作 3 3、取样涂布：、取样涂布： 无菌吸取无菌吸取1010-4-4、1010-5-5、1010-6-6稀释菌
5、悬液各稀释菌悬液各0.1ml0.1ml放在不同放在不同稀释度编号的平板上，尽快用无菌涂布棒将菌液在平板稀释度编号的平板上，尽快用无菌涂布棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于试验台上上涂布均匀，平放于试验台上20-30min20-30min，使菌液渗入培，使菌液渗入培养基表层内。养基表层内。 4 4、培养：、培养： 将平板倒置在将平板倒置在3737的恒温箱中培养的恒温箱中培养24-48h24-48h 稀稀释释度度1010-4-41010-5-51010-6-6菌落数123平均123平均123平均CFU/ml简要说明1 1、怎样判断稀释涂布平板计数数据是否可靠？、怎样判断稀释涂布平板计数数据是否可靠？需要掌握哪几个关键？需要掌握哪几个关键？