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1、中草药生物转化工程与中医药创新 摘 要:在中医药理论和现代人体生命科学理论的基础上,从中药成分代谢探讨中探析,结合系统生物学等现代学科理念,运用先进的分析检测技术和生物转化技术,尤其是体外生物转化技术,可改善中药制剂的疗效与个体差异,提出新的中医药产业工程中草药生物转化工程,以及相应的创新中药生物中药。重点探讨了微生物转化与酶法转化技术在创新中药研发体系中的应用前景。 关键词:中草药生物转化工程;微生物工程;酶工程;生物中药 中图分类号:R932文献标识码:A文章编号:1673-21101(2022)06-0001-04 随着中医药现代化战略的逐步推行,中医药发展正迎来新的挑战与机遇。中国科学
2、院院士王夔在为中药成分代谢分析作序时指出:“近年来中药现代化探讨基本上是以产品为目标,以新中药制剂开发为目的。开发有余,而探讨不足。事实上,中药现代化的根本是中药学现代化。中药产品的现代化可以栽培现代化、质检和质量标准现代化、工艺现代化等等方面下功夫,执行GAP、GLP、GEP、GMP、GCP等标准。但是,即使如此开发的中成药仍旧在世界药学中不能占有举足轻重的地位;接受这些产品的绝大多数是华人。我们必需强调中药的现代化要以中药学现代化为基础;也就是中药学要用世界自然科学和医学科学能够接受的概念和理论来阐述。”1要中医药现代化,首先是中医药理论的现代化,再是中医药产业的现代化。笔者认为,在探究中
3、国古典哲学、中医药理论、现代科学技术与现代科学方法论、现代人体生命科学理论等相互结合的基础上,推动中医理论的科学化、现代化,并在现代中医理论的指导下进行中药现代化探讨及其创新的研发2。 在总结古今传统中药和方剂中涉及生物转化原理的基础上,从中药成分代谢分析中探析,结合化学成分组学、基因组学、蛋白组学、代谢组学、糖生物学、系统生物学、药物设计学、高通量筛选技术等现代生命科学技术,运用生物转化技术,尤其是运用体外生物转化技术改善中药制剂的疗效与个体差异,提出了新的中医药产业工程中草药生物转化工程,以及相应的创新中药生物中药。中草药生物转化工程是将酶工程、微生物工程、代谢工程、基因工程、糖生物工程、
4、药物设计工程、生物信息学等现代生物工程技术合理运用到中医药现代化探讨中,合理继承传统中医药理论,对中医药进行创新与传承,并开发出相应的生物中药。中草药生物转化工程的两个主要探讨内容:微生物转化与创新中药、酶法转化与创新中药。 1 微生物转化与创新中药 1.1 微生物发酵与传统中药 在探讨中华医药史中闻名中草药及方剂的过程中发觉,利用微生物技术制备传统中药有着悠久的历史。“酒为一百零一药之长”,具有通血脉、行药势等功效,原始的酿酒技术产生于4000多年前的夏禹时代,酒是酵母发酵的产物,是细胞内酶作用的结果3。约3000年前,利用麦曲含有的淀粉酶将淀粉降解为麦芽糖,制得具有缓中、补虚、生津、润燥功
5、效的饴糖。在长沙马王堆汉墓出土的帛书五十二病方中记载了用于治病的粪便类中药,事实上是宿主与其消化道内的厌氧微生物共同代谢与发酵产生的混合物。公元10世纪左右,我国有了豆酱制品,及由此工艺衍化制备出的用于解肌发表和宣郁除烦的淡豆豉,豆酱和淡豆豉均是微生物的发酵产物。三国时期的闻名医学家华佗创建了制备金汁的秘法,即利用刮青竹筒(自然膜管)从粪窖内人源性微生物与自然界微生物混合深层发酵产物中提取而得4。首载于元代饮膳刚要中的红曲,为微生物红曲霉发酵梗米加工品而产生的发酵物,具有健脾消食、活血化瘀等功效5。我国是最早利用真菌防病治病的国家,早在神农本草经中,就有灵芝、茯苓、猪苓、雷丸等药用真菌的记载6
6、,现仍广泛应用。真菌具有分解纤维素、淀粉、蛋白质、脂类等养分物质的强大酶系,对自然培育基有较强的分解利用实力,具有种类多、次生代谢产物多、培育条件简洁等特点,成为微生物发酵炮制或制备传统中药的主要功能菌。利用古老中药中寄生真菌自身发酵的探讨已成为现在探讨的热点,如灵芝、冬虫夏草、云芝、灰树花、茯苓、麦角菌等都有大量的探讨报道6。 微生物发酵是传统中药中的一种重要炮制方法。我国人民将微生物发酵应用于中药炮制,即将药材与辅料拌和,在肯定温度和湿度下,通过微生物的生物转化作用达到提高药效、变更药性、降低毒副作用等目的6。中华人民共和国国家药品标准中收录的19种曲药,如,配方和工艺均绝密的片仔癀、六神
7、曲、建曲、采云曲、霞天曲、黔曲、半夏曲、老范志万应曲、泉州一百零一草曲、沉香曲等,均是微生物固态发酵而成的中药。不同培育基经同样微生物处理后会产生不同的药性,可利用该特性生产具有不同适应证的中药。例如,发酵淡豆豉时,以桑叶、青蒿发酵者,药性偏于寒凉,多用于风热感冒或热病胸中郁闷之症;以麻黄、紫苏发酵者,药性偏于辛温,多用于风寒感冒头痛之症7。 微生物发酵代谢产物是传统中药方剂配伍中的一类重要中药。除目前仍在方剂配伍中广泛运用的曲药外,粪便类中药作为微生物发酵代谢产物也被古今很多医家用于传统方剂配伍中,如五十二病方、黄帝内经、中华人民共和国药品标准•中药成方制剂等均有记载8,最为闻名
8、的方剂有失笑散、温病方剂神犀丹及三石汤等。在利用粪便类中药配伍方剂治病方面,尤其值得一提的是清朝的闻名温病学家叶天士,他擅长运用金汁配伍于方剂中治病救人,在黄英志主编的明清名医全书大成•叶天士医学全书中含“金汁”的临床处方和方剂近101处之多,其中包括闻名的温病灵丹神犀丹。 1.2 微生物转化中药成分 微生物转化中药成分的探讨始于20世纪90年头初,日本的小桥恭一发觉中草药成分如番泻苷,可借助肠道细菌转化为致泻有效成分,随后他的课题组对系列糖苷类化合物如黄芩苷、汉黄芩苷、人参皂苷等进行了探讨,指出糖苷类化合物为自然前药9。基本原理是利用微生物细胞产生的一种或多种酶把中药中的一些化学
9、成分转化成结构相关的更有经济价值的产物,来完成常规化学方法难以实现的生化反应,其本质是利用微生物本身所产生的酶对外源底物进行的催化反应,变更药物原有性能,产生新的功能作用,或增加原有的功能活性。如口服人参皂苷类成分的肠内微生物转化10。 将微生物工程技术应用于中药创新,将是中药创新研发中的新热点,其主要特点可概括如下2:药物的有效组分、活性成分最大限度地得以提取、利用;药物进入人体后不能干脆被利用的有效活性组分,可在体外生物转化而被干脆利用,将高极性中药成分转化为低极性成分,改善了药物的脂溶性,使其功效快速发挥;可以提中学药制剂的普适性,肠道微生态菌群因个体存在很大的差异性,结果引起药物的生物
10、利用和功能作用差异明显,而通过体外生物转化可避开之,从而提高其普适性;微生物转化后与原有药物相比产生了新的活性物质,从而可能产生新的保健、治疗或预防等功能作用;其具有生产工艺可控、所得产物明确、制剂便利、便于与国际接轨等优点,因而是实现中医药现代化战略的有效途径。 2 酶工程与创新中药 酶作为生物催化剂,在很多化学反应中具有不行低估的作用,作为生物进化的高级形式,与一般的化学催化剂相比,它可以在特别温柔的条件下高效、专一性地催化底物转变为产物,具有广袤的应用前景。酶是由细胞产生的具有催化实力的物质,其化学本质主要为蛋白质,少数酶同时含有少量的糖和脂肪,也有少数是核酸等其它物质。酶大部分位于细胞
11、内,部分分泌到体外。新陈代谢是生命活动的最重要特征,一切生命活动都是由代谢的正常运转来维持的,而生物体代谢中的各种化学反应都是在酶的作用下进行的。酶是促进一切代谢反应的物质,没有酶,代谢就会停止,生命也即停止。酶工程技术是现代生物技术的重要组成部分,其特点是利用生物酶、含酶细胞器或细胞(微生物、植物、动物)作为生物催化剂来完成某些重要的化学反应,应用范围包括医药、食品、化学工业,诊断分析、检测分析和生物传感器等。在中药创新研发过程中,酶工程技术将具有举足轻重的作用。 2.1 酶的分类与中草药生物转化反应类型 根据1961年国际生物联合会酶学委员会(Enzyme Commission of In
12、ternational Union Biotechnology)规定的分类方法,不管酶的结构和性质如何,仅依据酶所催化反应的类型,将酶分为六大类,即氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶、合成酶或连接酶,对应为六大中草药生物转化反应类型。图1概述了各类酶的特性与中草药生物转化反应类型1,2,11。 2.2 酶法转化与中药 近年来,药代动力学探讨证明,中药成分中的糖苷类化合物在肠道内难以汲取、生物利用度低、肠内滞留时间较长,在人体内难以干脆发挥药效作用,绝大多数需经肠道微生物酶分解为次级苷或苷元,方能发挥药效。从糖苷类化合物的结构角度看,含糖基越多,分子极性越高,水溶性就越大,相反水溶性越低
13、,水溶性大的物质不易被小肠绒毛汲取,不易穿过肠壁,也就不易进入血液而发挥药效,只有被肠道内微生物酶水解后才能被汲取而发挥药效。因此,肠道内微生物酶浓度与酶催化活性干脆影响着糖苷类化合物的药效。探讨表明,个体差异性影响肠道内微生物酶浓度与催化活性12,13,患者体温的上升会影响酶催化活性的发挥;随着现代医学事业的发展,滥用抗生素已经严峻损害人肠道内的正常菌群,使肠道菌群失去平衡,不能分泌各种正常酶14。这些因素严峻影响着中药药效的发挥。 如何将中药材中的糖苷类化合物转化成次级苷或苷元,将成为中医药现代化探讨中的新热点,可通过化学转化、酶转化、微生物转化等方法实现之。化学转化过程中,因剧烈的酸碱水
14、解作用而引起苷类物质结构和构型的变更,导致药效消逝和产物不稳定。因此,酶转化与微生物转化将更具潜力,微生物转化的本质仍是酶转化,酶转化是中草药生物转化工程中的重要内容。在酶的催化作用下对中药中的苷类成分进行系列结构修饰,引起中药成分的共价结构发生变更,如化学基团的引入或去除、化学键的引入或断裂等。修饰后,可引起药理活性的变更,或中药制剂(尤其是中药口服液)风味的改善等。 有关酶法转化中药的探讨开展时间不长,尚处于试验探讨阶段。但是,不少学者已逐步相识到生物转化技术将是中药创新探讨的重要方法之一。近年来,运用现代生物酶工程技术开呈现代中药探讨,在酶法转化中药探讨领域取得了一些成果。如利用自制复合
15、酶对生晒参95%乙醇提取物、人参茎叶总皂苷、三七总皂苷、三七茎叶总皂苷等系列中药有效部位进行了酶法转化探讨2,15,通过HPLC和LC-MS分析发觉可以明显变更一些皂苷成分的结构,并降低相应化合物的极性,增加了有效部位中脂溶性含量;同时,利用这些复合酶干脆酶法转化处理人参、三七、三七茎叶等药材,结果表明复合物酶亦能高效地转化药材中部分皂苷成分为低极性皂苷。这些低极性皂苷具有抗癌、免疫调整、改善微循环、调整消化机能、安神、抗苍老、抗惊慌、预防消化道溃疡、提高生命质量、增加记忆和学习实力等多种生物活性和药效作用,还具有快速汲取、高生物利用度等特点。用酶法协助提取清热中药黄芩活性成分时,HPLC分析
16、发觉提取物中的黄芩素和汉黄芩素等苷元含量远远高于药典的提取方法,表明酶法协助提取有助于黄芩苷、汉黄芩苷等转化成相应的苷元16,17。 3 生物中药的发展方向 上文从微生物工程与中药、酶工程与中药等两方面综述了中草药生物转化工程的核心内容;同时,在中药储存、炮制、方剂配伍煎制、体内代谢等过程中也涉及到生物转化,囿于篇幅,不再详述。 中草药生物转化工程融合了传统中药制药工程、传统发酵中药技术、现代微生物技术、酶工程技术、中药成分的代谢工程等多种工程技术,其在中药新药探讨开发方面具有的独特优势,可为改善中药功效、加快中药制剂的起效速度、提高生物利用度、改善制剂功效的个体差异性、创制新剂型、创制新药等
17、方面供应崭新的技术手段,有望给中药新药探讨开发注入新的活力,并将为中药创新带来革命性的变革,具有广袤的发展前景,预料不久将成为中药创新探讨中的“红热点”。中草药生物转化工程的发展方向将影响生物中药的将来发展前景,今后应在以下几个方面进行深化探讨:中草药储存过程的生物转化及霉变生物转化机制探讨;中草药炮制过程中的生物转化机制探讨;方剂配伍中的生物转化原理及方剂煎制过程的生物转化探讨;加强微生物和酶工程技术在中药探讨中的应用;加强曲剂制备过程中的生物转化机制探讨;加强粪便类中药的生物转化机制探讨;加强生物中药制药装备的探讨;利用现代分析技术,建立快速而灵敏的分析检测技术手段;建立有效而快速的功效筛
18、选模型;加强中药成分体内代谢转化及功效个体差异性的探讨;(11)在生物转化探讨过程中如何合理地贯彻中医药理论及现代科学方法论的指导思想,并汲取利用现代科学的有益成果。 参考文献: 1 杨秀伟,郝美荣,服部征雄.中药成分代谢分析M.北京:中国医药科技出版社,2003. 2 喻春皓.生物酶工程技术在中医药现代化探讨中的应用D.天津:天津高校,2022. 3 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草M.上海:上海科学技术出版社,11019:490-492. 4 高文铸.华佗遗书M.北京:华夏出版社,11015:638. 5 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草M.上海:上海科学技术出版社,110
19、19:488-489. 6 李羿,刘忠荣,吴洽庆,等.发酵中药拓展中药新药探讨开发的新空间J.自然产物探讨与开发,2004,16(2):179-181,184. 7 雷载权.中药学M.上海:上海科学技术出版社,2001:48. 8 于智敏,周超凡.论粪便类中药弊大于利J.中国中药杂志,11015,20(12):759-761. 9 KOBASHI K. Glycosides are natural prodrugs-Evidence using germ-free and gnotobiotic rats associated with a human intestinal bacterium
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21、95: 153-157. 11 罗贵民,曹淑桂,张今.酶工程M.北京:化学工业出版社,2002. 12 YIM JS, KIM YS, MOON SK, et al. Metabolic activities of ginsenoside Rb1, baicalin, glycyrrhizin and geniposide to their bioactive compounds by human intestinalJ. Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2004, 27(10): 1580-1583. 13 LEE DS, KIM YS, KO C
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24、M (Traditional Chinese Medicines), TCM-BioTransformation-Engineering (TCMBTE), is presented by studying and exploring Chinese classic philosophy, theories of TCM, prescriptions and methodology of modern science, and scientific theories of modern human-life-sciences, is well-combined biotechnology (e
25、nzyme engineering, microbial engineering) with TCM through digesting metabolite analysis of TCM constituents and essence of magically therapeutic effect of famous prescription Shenxidan. It is anticipated that TCMBTE would be a red-hot in the future. In this paper, some key-technologies in TCMBTE are discussed. Key words:Biotransformation Engineering of TCM;Microbial Engineering;Enzyme Engineering;BioTCM 第13页 共13页第 13 页 共 13 页第 13 页 共 13 页第 13 页 共 13 页第 13 页 共 13 页第 13 页 共 13 页第 13 页 共 13 页第 13 页 共 13 页第 13 页 共 13 页第 13 页 共 13 页第 13 页 共 13 页