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1、ICS 65.020.20 CCS B 0522吉 林 省 地 方 标 准DB22/T 36352024番茄晚疫病诊断与防治技术规程Technical code of practice for diagnosis and integrated managenment of tomato late blight2024 - 4 - 25 发布 2024 - 06 - 01 实施吉林省市场监督管理厅 发 布DB22/T 36352024前 言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识
2、别专利的责任。 本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。本文件由吉林省农业农村厅组织实施。 本文件起草单位：吉林农业大学。本文件的主要起草人：王晓梅、陶淑霞、李雨婷、孙周平、赵秀香、崔四川、刘艳华、王妍、宋文 喆、屈亚飞、张丹、孙西琳、马馨悦、龚镕烈、王宇凡、赵习。IDB22/T 36352024番茄晚疫病诊断与防治技术规程1 范围本文件确立了番茄晚疫病诊断与防治程序，规定了病害诊断和综合防治技术等阶段的操作指示，描 述了记录与档案等追溯方法。本文件适用于番茄晚疫病的病害诊断及其综合防治。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅
3、该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 1276 农药安全使用规范 总则DB22/T 34952023 露地辣椒疫病诊断与防治技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1番茄晚疫病 tomato late blight由致病疫霉菌Phytophthora infestans（Mont.）de Bary侵染番茄引起的一种卵菌病害。3. 2聚合酶链式反应 polymerase chain reaction，PCR 一种用于扩增特定的 DNA 片段的分子生物学技术。4 诊
4、断与防治流程番茄晚疫病诊断与防治流程见图 1。1DB22/T 36352024图1 番茄晚疫病诊断与防治流程5 病害诊断5.1 症状识别5.1.1 样本采集采集具有典型症状的发病植株，用于症状识别与病原菌鉴定。5.1.2 病害症状整个生育期均可发病，主要危害成株期的叶、茎和果实。具体如下：a) 叶部症状：叶片感病多从叶缘开始发生，发病初期呈暗绿色不规则的水渍状病斑，后逐渐变成 褐色，边缘不明显。湿度大时迅速扩大，叶片背面病、健交界处产生白色霉状物，严重时整个 叶片腐烂，并蔓延至叶柄和主茎。典型症状见图 A.1；b) 茎部症状：茎部感病病斑呈暗褐色，形状不规则，稍凹陷，后期变成黑色。湿度大时，边
5、缘有 明显的白色霉状物，茎秆腐烂易折断。典型症状见图 A.2；2DB22/T 36352024c) 果实症状：果实感病多发生在青果上，初期为暗绿色、油渍状病斑，后渐变为暗褐色至棕褐色， 病斑呈不规则云纹状，稍凹陷，边缘明显。湿度大时，患病部可长出稀疏白色霉状物，并迅速 腐烂。典型症状见图 A.3。5.2 病原鉴定5.2.1 显微观察5.2.1.1 徒手制片按以下步骤制作徒手切片：a) 取洁净的载玻片，在中间滴一滴清水；b) 用洁净解剖针直接挑取病部或培养基上的霉状物，置水滴中，并使病原物分散开；c) 加盖盖玻片，使盖玻片的一侧边缘与水滴边缘接触，并慢慢放下盖玻片，待显微观察。 5.2.1.2
6、镜检在光学显微镜视野下进行病原菌形态观察。白色霉状物为病原菌的游动孢子囊梗和游动孢子囊。孢 囊梗 3 根5 根成束由叶背气孔伸出，单轴分枝，具 2 个以上分枝，且分枝略呈节状。形态见图 B.1。 游动孢子囊单胞无色，柠檬形，顶端有乳头状突起，大小为（22.5 m40 m）（17.5 m22.5 m）。 形态见图 B.2。5.2.2 分子检测5.2.2.1 病原菌分离培养5.2.2.1.1 在超净工作台上，将采集的病叶浸于 75% 酒精中，表面消毒 30 s，再用 3% 次氯酸钠灭 菌 2 min3 min ,用无菌水漂洗 3 次，吸水纸吸干水后将病、健交界处剪成 5 mm210 mm2 小块。
7、5.2.2.1.2 取 4 小块病叶置于马铃薯葡萄糖琼脂（PDA ）培养基上, 在 25 培养箱中培养 3 d 5 d，待菌丝形成后，切取单根菌丝顶端移至新的 PDA 培养基上纯化培养。纯化后菌落见图 B.3。5.2.2.2 DNA 提取按 DB22/T 34952023 中 C.1 的规定提取病原菌基因组 DNA。 5.2.2.3 PCR 扩增 ITS 区域以病菌基因组 DNA 为模板，采用通用引物 ITS 4/ITS 5（ITS 4：5 -TCCTCCGCTTATTGATATGC-3 /ITS 5：5 -GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3） 扩增 ITS 区域，PCR 反应体
8、系和参数按 C.1 的要求进 行。经检测得到 ITS 序列长度为 750 bp760 bp。检测结果见图 C.1。5.2.2.4 序列比对将 PCR 产物进行测序，测序结果在 GenBank 中进行 BLAST 比对分析，同源性达 95% 以上，确 定为番茄致病疫霉菌，其 ITS 序列长度为 754 bp。详细序列见附录 C.3。6 病害综合防治 6. 1 防治原则3DB22/T 36352024病害防治应采取“预防为主，综合防治”的原则，在优先选用抗病品种的基础上，加强栽培管理， 结合生态防控，科学使用化学农药。6.2 防治方法6.2.1 选择抗病品种选用抗、耐晚疫病且综合性状优良的番茄品种
9、。6.2.2 加强栽培管理 6.2.2.1 合理轮作与非茄科作物进行 3 年以上轮作。 6.2.2.2 清洁田园定植前彻底清理前茬作物的残枝烂叶，以及杂草等。 6.2.2.3 土壤消毒对土壤采用生石灰消毒，用量 80 kg/667 m2100 kg/667 m2 ，整地施肥时深翻入土，浇透水，一 周后可以定植栽培。偏碱性土壤不宜采用此方法。6.2.2.4 田间管理合理施肥，施足基肥，避免偏施氮肥，增施磷钾肥。番茄坐果后及时去除残留的花瓣；及时疏花疏 果、整枝打杈。6.2.3 设施生态防控 6.2.3.1 降低湿度在温度允许条件下，白天注意通风降湿，相对湿度控制在 60% 以下，夜间相对湿度控制
10、在 85% 以 下。采用膜下滴灌，避免大水漫灌，降低空气相对湿度。6.2.3.2 调控温度白天温度控制在 25 28 , 夜间温度保持在 13 18 ,地温不低于 13 。6.2.4 化学防治6.2.4.1 农药选用与管理农药选择和使用应符合 GB/T 8321（所有部分）和 NY/T 1276 的规定，药剂管理按附录 E 要求 执行。6.2.4.2 施药方法 6.2.4.2.1 烟雾法设施番茄晚疫病发生前，用 12.5% 甲霜百菌清烟剂，用药量 340 g/667 m2400 g/667 m2，将 其点燃，插挂于大棚内适当位置，熄灭明火发烟，封棚一夜，次日放烟。每季最多用药次数 3 次。弱
11、苗及小拱棚不宜使用。4DB22/T 363520246.2.4.2.2 喷雾法发病前或发病初期，采用喷雾法均匀施药。每 7 d10 d 喷洒 1 次，喷 2 次3 次。主要农药 制剂种类、使用时期、施药量参见表 D.1。7 记录与档案应及时详细做好诊断与防治各环节的记录，并建立档案，保存完好，档案保存期限不低于 2 年,做 到可追溯。5DB22/T 36352024AA附 录 A （资料性）番茄晚疫病典型症状图片番茄晚疫病典型症状见图 A.1至图 A.3。图A.1 叶部症状图A.2 茎部症状图A.3 果实症状6DB22/T 36352024B附 录 B （资料性）番茄晚疫病病原菌显微形态及菌落
12、形态B.1 病原菌显微形态显微形态见图 B.1和图 B.2。图A.4 病原菌游动孢子囊梗（显微镜倍数 4010）图A.5 病原菌游动孢子囊（显微镜倍数 4010）B.2 病原菌菌落形态在 PDA 培养基上的菌落形态见图 B.3。图A.6 PDA 培养基上的菌落形态（左：正面 右：反面）7DB22/T 36352024BC附 录 C （规范性）病原菌分子鉴定C.1 PCR 反应体系和参数C.1.1 反应体系ITS4 和 TIS5 引物各加 0.5 L，PCR mix 5 L，DNA 模板 1 L，dd H2O 3 L，合计 10 L。C.1.2 反应参数C.1.2.1 94 预变性 3 min；
13、 94 变性 30 s，55 退火 50 s，72 延伸 1 min，共 35 个 循环；72 延伸 10 min；4 保存。C.1.2.2 PCR 产物检测使用 1% 的琼脂糖凝胶，用 0.5TBE 电泳缓冲液，100 V 电泳 30 min40min。C.1.2.3 在凝胶成像系统进行电泳结果观察，判断是否为预扩增长度的条带，无非特异性条带，且浓 度大于 50 ng/ L。C.2 PCR 扩增产物检测凝胶成像检测 PCR 扩增产物，经检测得到病原菌 ITS 序列长度为 750 bp760 bp。检测结果见 图 C.1。M 样本图B.1 ITS 序列 PCR 扩增产物电泳检测对照图8DB22
14、/T 36352024C.3 番茄晚疫病原菌 ITS 全序列将 PCR 产物纯化后测序，测试结果显示番茄晚疫病疫霉菌 ITS 序列片段长度为 754 bp。序列如 下：1AACCGTTTCAACCCAATAGTTGGGGGTCTTACTTGGCGGCGGCTGCTGGCTTTATTGCTG61GCGGCTACTGCTGGGCGAGCCCTATCAAAAGGCGAGCGTTTGGACTTCGGTCTGAGCTAG121TAGCTTTTTTATTTTAAACCCTTTACTTAATACTGATTATACTGTGGGGACGAAAGTCTC181TGCTTTTAACTAGATAGCAACTTTCAG
15、CAGTGGATGTCTAGGCTCGCACATCGATGAAGA241ACGCTGCGAACTGCGATACGTAATGCGAATTGCAGGATTCAGTGAGTCATCGAAATTTTG301AACGCATATTGCACTTCCGGGTTAGTCCTGGAAGTATGCCTGTATCAGTGTCCGTACAAC361AAACTTGGCTTTCTTCCTTCCGTGTAGTCGGTGGAGGAGATGCCAGATGTGAAGTGTCTT421GCGGTTGGTTTTCGGACCGACTGCGAGTCCTTTTAAATGTACTAAACTGTACTTCTCTTT481GCTCCAAAAGTG
16、GTGGCATTGCTGGTTGTGGACGCTGCTATTGTAGCGAGTTGGCGACCG541GTTTGTCTGCTGCGGCGTTAATGGAGAAATGCTCGATTCGTGGTATGGTTGGCTTCGGCT601GAACAATGCGCTTATTGGGTGATTTTCCTGCTGTGGCGTGATGGACTGGTGAACCATGGC661TCTTTAGCTTGGCATTTGAATCGGCTTTGCTGTTGCGAAGTAGAGTGGCGGCTTCGGCTG721CCGAGGGTCGATCCATTTGGGAAATGTTGTGTAC9DB22/T 36352024CD附 录 D （资
17、料性）防治番茄晚疫病药剂具体药剂及使用方法参见表 D.1。表D.1 药剂种类及使用方法序号药剂名称及剂型使用时期施药量（亩）150% 烯酰吗啉可湿性粉剂发病前或发病初期33 g40 g270% 丙森锌可湿性粉剂发病前或发病初期180 g270 g350% 丙森 霜脲氰可湿性粉剂发病前或发病初期170 g230 g440% 精甲 丙森锌可湿性粉剂发病初期80 g100 g570% 嘧菌 丙森锌可湿性粉剂发病前或发病初期60 g120 g636% 霜脲 百菌清可湿性粉剂发病初期100 g117 g725% 甲霜 霜霉威可湿性粉剂发病初期84 g125 g850% 烯酰 锰锌可湿性粉剂发病初期162
18、 g186 g950% 锰锌 氟吗啉可湿性粉剂发病初期67 g100 g1060% 唑醚 代森联可湿性粉剂发病初期40 g60 g1150% 氟啶 霜脲氰水分散粒剂发病初期40 g50 g1275% 代森锰锌水分散粒剂发病前或发病初期175 g200 g1368% 精甲霜 锰锌水分散粒剂发病前或发病初期100 g120 g1451% 氟嘧 百菌清悬浮剂发病前或发病初期100 mL133 mL1540% 烯酰 氰霜唑悬浮剂发病前或发病初期30 mL40 mL10DB22/T 36352024DE附 录 E （规范性） 农药管理E.1 采购不得采购国家禁止使用的农药，应从正规渠道采购符合下列要求的农药，并索取发票或购药凭证：a) 有资质农药经营单位经营的；b) 有农药登记证的；c) 有农药生产许可证的；d) 有产品质量标准及合格证明的；e) 标签内容完整的；f) 质量保质期内的；g) 国家和进口国允许使用的农药。 E.2 贮存应贮藏于专用场所，由专人负责保管。场所应符合卫生、防火、防水、防雨、防腐、避光、阴凉、 干燥和通风等安全条件要求，并配有农药配制量具和急救药箱，出入口处贴有警示标志。不得与食品、 农产品、饮料和饲料等混放。E.3 包装物处理农药包装物应清洗 3 次以上，农药包装废弃物在回收处置前应妥善收集不能随意丢弃，也不可做 他用。11