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1、共振瑞利散射法测定乳制品中三聚氟胺三聚氟胺（c3h6n6, melmna, mel）被称为三胺，学术名称为1、3、5-3和4-6-3。这是重 要的多氮环有机化工的原料。三聚鼠胺是一种被禁止用于食品及动物饲料的化学物质。三 聚氧胺在水中分解成鼠尿酸，鼠尿酸然后在婴儿的尿液中又与三聚鼠胺形成晶体阻塞肾小 管，造成婴幼儿的肾衰竭甚至导致死亡，三聚氧胺已严重危害着人体的生命安全，建立并 发展三聚氧胺的检测方法对从事食品中三聚氧胺的卫生检验研究具有重要的现实意义。对三聚鼠胺的检测，早期使用苦味酸法、升华法和电位滴定法，对仪器的要求较低，但前 处理方法和检测限不能达到目前对食品中三聚氧胺的检测要求。近年来
2、，国内外相关文献 报道三聚氧胺的检测方法，主要有高效液相色谱法本实验基于在弱酸性介质中，三聚鼠胺与巴比妥因非共价健作用而聚集，导致体系共振光 显著增强，建立了共振瑞利散射法测定三聚氧胺的新方法。1实验部分1.1 精密酸度计RF-5301PC型荧光分光光度计（日本岛津）；UV-2550型紫外-可见分光光度计（日本岛 津）;PB-20 （PB-S）型精密酸度计（SatroriusCo. Ltd）;电子天平；电热恒温三用水箱 （北京光明医疗公司）；超声清洗机;离心机等。三聚鼠胺（MEL）标准溶液:准确称量0.126gMEL标准品，用水溶解，并定容至100mL,配 制成1.0X101.2 氯乙酸溶液滤
3、纸的制备样品的处理:称取2. 00g市售纯牛奶样品于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL三氯乙酸 溶液（1%）和5mL乙睛，超声提取lOmin,振荡lOmin,以4000r/min离心lOmin后，上 清液经三氯乙酸溶液（1%）润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL,移取51nL滤 液，加入5mL水混匀做待净化。样品的净化过程:将上述待净化液转移至固相萃取柱（本 实验自制）中，依次用3mL水和3mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脱， 整个固相萃取过程洗脱速率不超过ImL/min,洗脱液用氮气吹干，残留物用水定容至5mLo1.3 实验方法于10mL比色管中，室温下，依次加
4、入一定量的三聚氧胺标液，1.10mL四氢吠喃、1.20mL1.0X102结果2. 1 mel-巴比妥体系的散射MEL与巴比妥结合形成大分子后，散射强度增强，其散射带位于220700nm之间，在此范 围内有三个强度散射峰（见图1）。由图2可知，这3个散射峰虽然都不在MEL-巴比妥的 吸收峰附近，但MEL-巴比妥在此范围内有明显的吸收（见图2） o因此，MEL-巴比妥体系 在220700nni的散射为发射-吸收-再发射的共振瑞利散射。实验发现，在适当条件下， 296nm的共振瑞利散射强度随MEL的浓度增大成比例增强。实验选用296nm作为测定波长。2.1 胺的溶剂操作分别选择水、乙月青、乙醇和丙酮
5、做三聚氧胺的溶剂，按照实验方法进行操作（见图2）。 吸光度大小依次为:水乙睛乙醇丙酮。故本实验选择水作为溶剂。2.2 不同酸度的缓冲溶液对体系散射光强度的影响实验分别考察了 B-R、Tris-HCK Na2HP04-NaH2P04 H3B03-Na2B407四种不同酸度的缓冲 溶液对体系散射光强度的影响（见图3）。在B-R溶液中，体系的散射光强度增强最大， 且体系更稳定，本实验选用B-R溶液作为体系的介质。实验发现，当B-R缓冲溶液用量为0. 41.0mL时，体系的共振光最强（见图4）,实验选 择加入B-R缓冲溶液0. 6mLo2.3 各因素对大学生造成的影响研究了巴比妥用量对实验体系散射光强
6、度的影响，结果（见图5）。当巴比妥溶液用量不 足或者过量时，4F值均较低；当加入1.2mL 1.0X102.4 响应面为整合的问题，见表1实验考察了四氢吠喃用量对体系散射光强度的影响，结果（见图6）。结果表明，四氢吠 喃的用量在1. 0L 2mL时值最大，因此本实验选择四氢吠喃的用量为1. ImLo2.5 表面活性剂十二烷基苯磺酸钠（sdbs）对产品散射光强度的影响研究了不同表面活性剂对体系的影响（见图7） o结果表明：非离子表面活性剂Tween-80 基本对体系不影响；阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠（SDBS）对体系影响不明显；阳离 子表面活性剂澳化十六烷基三胺（CTAB）对体系影响显著。
7、因此本实验选择表面活性剂 CTABo实验研究了表面活性剂CTAB用量对体系散射光强度的影响（见图8） o实验表明当CTAB 用量不足或者过量时，4F值均偏低；当CTAB用量为1.0mL时值最大，因此本实验选 择 5.5X102.6 体系的i值测量实验考察了 2060时温度对对的影响（见图9） o当体系温度过高时，值降低很 大，原因可能是温度高，分子布朗运动加快，分子间作用力和疏水作用力减弱，聚集作用 减弱，导致体系的值减少。因此，本实验选择室温下进行实验。在确定的最佳试剂用量和室温条件下，仅改变反应时间进行实验，考察反应时间对体系散 射光强度的影响（见图10）。随着反应时间的延长，体系散射光强度逐渐减弱，因此，本 实验选择反应5min后再测定。3讨论3. 1线性域、检出限和准确度在优化的实验条件下，按照实验方法，向体系中加入不同量的三聚氧胺标准工作液后测定 RRS值。三聚氧胺浓度在1.88X103.2共同语言对物质的影响在实验条件下，测定1.0X104方法的回收率和精密度按照实验方法测定样品中的三聚氟胺含量，并进行加标回收实验（见表1）。由表可知， 方法的相对标准偏差为2.5Q5.0%,平均回收率为95.0%97.5%。用此法和国标法进行对 照检测处理后样品中的三聚氧胺，结果吻合。故该方法可用于食品中的三聚氧胺的检测。