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1、艾滋病检测技术新进展及其应用艾滋病检测技术新进展及其应用郭志宏郭志宏浙江省疾病预防控制中心浙江省疾病预防控制中心内容提要内容提要1.HIV急性期感染或窗口期感染检测（急性期感染或窗口期感染检测（Ab/Ag联合检测和集合联合检测和集合PCR）2.婴幼儿早期诊断婴幼儿早期诊断（nest RT-PCR）3.快速检测策略及质控快速检测策略及质控1 1、HIV-1HIV-1持续流行：持续流行：全球全球HIVHIV流行和流行和AIDSAIDS仍继续增加，尤其是仍继续增加，尤其是MSMMSM同性恋人群，同性恋人群，多达多达50%HIV 传播发生在疾病急性和早期，传播发生在疾病急性和早期，（流行病学意义）（流
2、行病学意义）2 2、高病毒、高病毒RNARNA水平：水平：性传播感染仍具首位，生殖道性传播感染仍具首位，生殖道 HIV RNA HIV RNA 水平相当于血液水平相当于血液中中HIV RNAHIV RNA水平。高病毒载量、独特的病毒特性以及缺乏中和水平。高病毒载量、独特的病毒特性以及缺乏中和抗体，急性期感染者感染性极高。抗体，急性期感染者感染性极高。VL10 M VL10 M copies/mm33 3、极易垂直传播：、极易垂直传播：怀孕妇女感染怀孕妇女感染HIVHIV非常常见，增加非常常见，增加HIVHIV垂直传播的危险。垂直传播的危险。2011年年4月全国报告的月全国报告的HIV感染者（感
3、染者（5560例）中，母婴传播占例）中，母婴传播占1.3%；AIDS病人（病人（2806例）例）中，母婴传播占中，母婴传播占1.0%。公共卫生意义：公共卫生意义：HIV-1 HIV-1 流行形势严峻流行形势严峻为什么为什么HIVHIV急性感染（急性感染（AHIAHI）越来越受到重视？）越来越受到重视？4 4、应尽早尽快进行诊断：、应尽早尽快进行诊断：HIVHIV感染急性期，感染者无症状和流感样症状而经常漏检而误诊感染急性期，感染者无症状和流感样症状而经常漏检而误诊，感染者本人不知自己感染状态，极易在高危人群中传播，感染者本人不知自己感染状态，极易在高危人群中传播5 5、应尽早进行人群干预：、应
4、尽早进行人群干预：实时对感染者及其配偶、孕妇感染者及其婴儿进行干预，知晓感实时对感染者及其配偶、孕妇感染者及其婴儿进行干预，知晓感染状态，减少危险性行为；了解和干预复杂的性传播网染状态，减少危险性行为；了解和干预复杂的性传播网6 6、应尽早进行病毒干预：、应尽早进行病毒干预：在在AHIAHI时期进行可能的干预以限制时期进行可能的干预以限制HIVHIV复制和整合入病毒潜伏池、复制和整合入病毒潜伏池、（整合后不可治愈），早期抗病毒治疗的必要性（整合后不可治愈），早期抗病毒治疗的必要性(转变观念转变观念)7 7、指导疫苗研究：、指导疫苗研究：基于急性期感染时期的传播性基于急性期感染时期的传播性/奠基
5、者病毒的特性奠基者病毒的特性8 8、建立人类自然模型：、建立人类自然模型：研究研究AHIAHI个体，为详细了解人类个体，为详细了解人类HIVHIV传播事件提供最好的机会传播事件提供最好的机会公共卫生意义：早诊断、早干预、早治疗、降两率、指导疫苗研究公共卫生意义：早诊断、早干预、早治疗、降两率、指导疫苗研究为什么为什么HIVHIV急性感染（急性感染（AHIAHI）越来越受到重视？）越来越受到重视？方法：前瞻性随访高危人群队列发现阳转感染者（方法：前瞻性随访高危人群队列发现阳转感染者（MSM,IDU,SW,单阳伴侣）单阳伴侣）限制：限制：1）前瞻性随访）前瞻性随访HIV阴性人群的巨额花费；阴性人群
6、的巨额花费；2）在阳转时刻或接近阳转时难以找到研究对象，难以采集到急性期血）在阳转时刻或接近阳转时难以找到研究对象，难以采集到急性期血 清阴性病毒血症期峰值的样本；清阴性病毒血症期峰值的样本；（美国国防部联手（美国国防部联手NIH 已经启动疫苗免疫性队列研究已经启动疫苗免疫性队列研究 RV217，每周二次检测每周二次检测HIV RNA，试图发现，试图发现AHI；我国十一五重大专项也启动了急性期感染的研究）；我国十一五重大专项也启动了急性期感染的研究）前瞻性队列研究：高危人群横断面研究：普通人群 血液中心通常使用集合（血液中心通常使用集合（6-96份血浆）份血浆）NAT筛查，阳性集合拆分并检测出
7、个体筛查，阳性集合拆分并检测出个体感染者，使用病毒特异性感染者，使用病毒特异性“区别区别”NAT检测确认，阳性者纳入转诊和报告系统检测确认，阳性者纳入转诊和报告系统 美国北卡卫生部门制定和实施了全州所有公共美国北卡卫生部门制定和实施了全州所有公共HIV检测点筛查检测点筛查AHI规划，对所有规划，对所有抗体阴性样本进行集合抗体阴性样本进行集合NAT RNA检测。及时转诊、咨询、治疗和前瞻性研究检测。及时转诊、咨询、治疗和前瞻性研究如何发现如何发现 HIVHIV急性感染急性感染A AHIHI？RNA+Ab-P24+Ab-血清阳转后的方法血清阳转后的方法RNAp24Ab血清阳转抗体检测临界值抗体检测
8、临界值 特异性抗体比例特异性抗体比例时间反应指标感染感染 血清阳转前的方法血清阳转前的方法怎样检测怎样检测怎样检测怎样检测HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1早期感染早期感染早期感染早期感染?从感染从感染HIV到抗体呈阳性反应到抗体呈阳性反应这段时间血浆中含有高浓度这段时间血浆中含有高浓度HIV RNA有很高的传染性有很高的传染性现在普遍认为现在普遍认为2周周3个月个月,个别案例达个别案例达6个月。个月。HIVHIV血清阳转窗口期血清阳转窗口期HIVHIV感染各种检测方法的窗口期感染各种检测方法的窗口期HIVAbHIVAbHIVAbHIVAb检测（第三代试剂）：窗口期约检测（第三代试剂）：
9、窗口期约检测（第三代试剂）：窗口期约检测（第三代试剂）：窗口期约28282828天天天天HIVAb/AgHIVAb/AgHIVAb/AgHIVAb/Ag联合检测（第四代试剂）：窗口期约联合检测（第四代试剂）：窗口期约联合检测（第四代试剂）：窗口期约联合检测（第四代试剂）：窗口期约15151515天天天天核酸检测：核酸检测：核酸检测：核酸检测：窗口期约窗口期约窗口期约窗口期约10101010天天天天病毒载量值范围为病毒载量值范围为3.846.84Log10Copies/mL；28例窗口期病例，例窗口期病例，病毒载量百万级有病毒载量百万级有10份份（35.71%）；十万级十万级9份份（32.14%
10、）；万级的样品；万级的样品7份份（25%）；）；万级万级以下的样品以下的样品2份，占总样品数的份，占总样品数的7.14%。窗口期感染者的病毒学特征窗口期感染者的病毒学特征W B条带条带W B不确定不确定R N A阳性阳性p2426(65%)7(26.9%)p24+gp1609(22.5%)3(33.3%)p24+p174(10%)4(100%)p24+p551(2.5%)1(100%)合计合计401540份WB不确定样品WB条带HIV急性期感染或窗口期感染检测方法急性期感染或窗口期感染检测方法1.Ab/Ag联合检测联合检测:ELISA2.HIV RNA检测检测:集合集合PCRHIV Ab/Ag
11、HIV Ab/Ag联合检测联合检测检测早期检测早期检测早期检测早期HIVHIVHIVHIV感染的效果与单独感染的效果与单独感染的效果与单独感染的效果与单独HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1抗原的试剂相当抗原的试剂相当抗原的试剂相当抗原的试剂相当与与与与RT-PCRRT-PCRRT-PCRRT-PCR方法相比，平均滞后时间是大约方法相比，平均滞后时间是大约方法相比，平均滞后时间是大约方法相比，平均滞后时间是大约3.233.233.233.23天天天天与第三代抗体试剂相比，窗口期缩短了与第三代抗体试剂相比，窗口期缩短了与第三代抗体试剂相比，窗口期缩短了与第三代抗体试剂相比，窗口期缩短了1.5
12、6 1.56 1.56 1.56 到到到到 5.325.325.325.32天天天天检测献血员的特异性是检测献血员的特异性是检测献血员的特异性是检测献血员的特异性是99.80%99.80%99.80%99.80%第四代试剂的敏感性和特异性均有所提高第四代试剂的敏感性和特异性均有所提高第四代试剂的敏感性和特异性均有所提高第四代试剂的敏感性和特异性均有所提高HIV Ab/AgHIV Ab/Ag联合检测试剂的原理联合检测试剂的原理HIV Ag检测：检测：HIV AgHIV Ag固相固相 血清血清/血浆血浆 结合物结合物 1/结合物结合物 2HIV 1 Ab:抗抗p24单抗单抗.生物素标记的抗生物素标
13、记的抗HIV单抗单抗.亲和素标记的过氧化物酶结合物亲和素标记的过氧化物酶结合物 TMB/H2SO4PHIV Ab检测检测:IgG,IgA,IgM固相固相 血清血清/血浆血浆 稀释液稀释液/结合物结合物2HIV 1 Ag:gp 160 重组蛋白重组蛋白.gp 41 多肽多肽 过氧化物酶结合物过氧化物酶结合物功能性保守多肽功能性保守多肽 .功能性保守多肽过氧化物酶结合物功能性保守多肽过氧化物酶结合物HIV 2 Ag:gp36多肽多肽.gp 36 多肽过氧化物酶结合物多肽过氧化物酶结合物TMB/H2SO4PHIV Ab/AgHIV Ab/Ag特点特点HIV-AbHIV-Ab与与与与HIV-AgHIV
14、-Ag双检测系统双检测系统双检测系统双检测系统 HIV-AgHIV-Ag和和和和HIV P24HIV P24抗体共同包被抗体共同包被抗体共同包被抗体共同包被 HRPHRP标记标记标记标记HIV-AgHIV-Ag和和和和HRPHRP标记亲和素共同组成酶标试剂标记亲和素共同组成酶标试剂标记亲和素共同组成酶标试剂标记亲和素共同组成酶标试剂双抗原夹心法测双抗原夹心法测双抗原夹心法测双抗原夹心法测HIV-AbHIV-Ab 包被抗原包被抗原包被抗原包被抗原+HRP+HRP标记抗原标记抗原标记抗原标记抗原双抗体夹心双抗体夹心双抗体夹心双抗体夹心LABLAB法测法测法测法测HIV-AgHIV-Ag 包被抗体生
15、物素标记抗体包被抗体生物素标记抗体包被抗体生物素标记抗体包被抗体生物素标记抗体HRPHRP标记亲和素标记亲和素标记亲和素标记亲和素生物素生物素生物素生物素-亲和素反应系统应用亲和素反应系统应用亲和素反应系统应用亲和素反应系统应用HIV-Ag/Ab试剂对试剂对BBI panel检测结果检测结果 2424种国外抗体试剂窗口期与万泰试剂一致，均种国外抗体试剂窗口期与万泰试剂一致，均2727天。天。ABBOTTABBOTT（2 2种种）、万万泰泰和和伯伯乐乐抗抗原原试试剂剂窗窗口口期期均均为为7 7天天，灵灵敏敏度度一一致。致。集合集合HIV RNA RT-PCRHIV RNA RT-PCR样本的路线
16、样本的路线集合的拆分检测路线集合的拆分检测路线一级一级poolpool二级二级poolpool单份样品单份样品WBWB检测结果检测结果地点地点编号编号病载病载编号编号病载病载编号编号病载（病载（C/mlC/ml）ZCZCZCZC1-51-51-51-51.68E+31.68E+31.68E+31.68E+3ZCZC1 1LOWLOWLOWLOWZCZC2 2LOWLOWLOWLOWZCZC3 3LOWLOWLOWLOWZCZCZCZC4 4 4 44.43E+34.43E+34.43E+34.43E+3230362303623036230361.80E+51.80E+51.80E+51.80E
17、+5阴性阴性阴性阴性豫豫豫豫-柘城柘城柘城柘城ZCZC5 5LOWLOWLOWLOWZCZCZCZC11-1511-1511-1511-153.92E+23.92E+23.92E+23.92E+2ZCZC1111LOWLOWLOWLOWZCZC1212LOWLOWLOWLOWZCZC1313LOWLOWLOWLOWZCZCZCZC141414141.37E+31.37E+31.37E+31.37E+3231352313523135231351.05E+41.05E+41.05E+41.05E+4阴性阴性阴性阴性豫豫豫豫-柘城柘城柘城柘城172341723417234172346.34E+36.
18、34E+36.34E+36.34E+3阴性阴性阴性阴性晋晋晋晋-绛县绛县绛县绛县ZCZC1515LOWLOWLOWLOWTFTFTFTF1-51-51-51-51.36E+31.36E+31.36E+31.36E+3TFTF1 1LOWLOWLOWLOWTFTFTFTF2 2 2 24.06E+34.06E+34.06E+34.06E+3172181721817218172185.39E+35.39E+35.39E+35.39E+3阴性阴性阴性阴性晋晋晋晋-绛县绛县绛县绛县TFTF3 3LOWLOWLOWLOWTFTF4 4LOWLOWLOWLOWTFTF5 5LOWLOWLOWLOWTFTF
19、TFTFD D D D7.26E+47.26E+47.26E+47.26E+4TFTFTFTFD1D1D1D13.32E+53.32E+53.32E+53.32E+5050190501905019050193.21E+63.21E+63.21E+63.21E+6阴性阴性阴性阴性晋晋晋晋-临汾临汾临汾临汾TFTFD2D2LOWLOWLOWLOWTFTFD3D3LOWLOWLOWLOWTFTFD4D4LOWLOWLOWLOWTFTFD5D5LOWLOWLOWLOWLow：低于检测限HIVHIV窗口期感染样品各级窗口期感染样品各级POOLPOOL检测结果检测结果5050份标本混合份标本混合 阳性阳性
20、 每每1010份标本再检测份标本再检测 阳性阳性每一份标本再检测每一份标本再检测集合集合HIVHIV核酸检测用于血液筛查核酸检测用于血液筛查集合集合 HIV RNA HIV RNA 检测方法用于在检测方法用于在HIVHIV抗体阴性的抗体阴性的血清（血浆）样本中筛查处于急性感染期血清（血浆）样本中筛查处于急性感染期HIV HIV RNARNA阳性的样本。阳性的样本。注注注注*RTRTRTRT1 1 1 1和和和和RTRTRTRT2 2 2 2检测均为阴性的样品为按阴性咨询同时，为进一步排除假阴性的样品将保留血浆，集中进检测均为阴性的样品为按阴性咨询同时，为进一步排除假阴性的样品将保留血浆，集中进
21、检测均为阴性的样品为按阴性咨询同时，为进一步排除假阴性的样品将保留血浆，集中进检测均为阴性的样品为按阴性咨询同时，为进一步排除假阴性的样品将保留血浆，集中进行行行行ELISAELISAELISAELISA复检，复检，复检，复检，ELISAELISAELISAELISA复检为阳性的样品进一步做复检为阳性的样品进一步做复检为阳性的样品进一步做复检为阳性的样品进一步做WBWBWBWB确认，同时进行随访。确认，同时进行随访。确认，同时进行随访。确认，同时进行随访。咨询后，需要检测者采集抗凝血咨询后，需要检测者采集抗凝血先用先用RT1RT1再用再用RT2RT2进行检测进行检测按阴性咨询按阴性咨询报告阴性
22、报告阴性任何一种试剂检测为阳性任何一种试剂检测为阳性两次检测均为阴性两次检测均为阴性集中进行集中进行ELISAELISA检测检测*集中进行集中进行ELISAELISA、WBWB检测检测求询者求询者HIVHIV抗体阴性及抗体阴性及WBWB不确定样本不确定样本WBWB确认确认HIVHIV抗体阳性样品抗体阳性样品做做Pooled HIV RNA RT-PCRPooled HIV RNA RT-PCR检测检测做做BED-CEIABED-CEIA检测检测窗口期检测程序窗口期检测程序 应用集合应用集合PCRPCR技术发现窗口期感技术发现窗口期感染者染者MSM VCTIDU 筛查筛查-筛查筛查+集合集合PC
23、R WB +结合流行病史，判断窗口期感染结合流行病史，判断窗口期感染MSM人群早期感染建议检测流程2024/4/16男男性行为人群HIV-1早期感染检测策略及新发感染率研究婴幼儿婴幼儿HIVHIV感染的诊断感染的诊断HIV感染产妇生婴幼儿在出生后18个月内可应用HIV核酸检测进行早期HIV感染诊断。逆转录PCR（RT-PCR）方法，一般需扩增HIV gag 和pol 和env 基因片段。如果儿童第一次采血时已满12个月，则应首先进行HIV抗体检测。对于抗体阳性者进行HIV核酸检测。如果已满18个月，不做核酸检测。感染婴儿平感染婴儿平均均S/CO值随值随月龄变化曲月龄变化曲线（线（24个感个感染
24、婴儿染婴儿(3个个死亡死亡)，82个个样本）样本）n:样本数样本数 婴幼儿感染诊断：婴幼儿感染诊断：12月内核酸检测，月内核酸检测，13-17月先抗体，阳性月先抗体，阳性者检测核酸，者检测核酸，18个月以上抗体检测个月以上抗体检测核酸检测核酸检测流程流程快速检测，是艾滋病实验室多了一种检测快速检测，是艾滋病实验室多了一种检测方法。方法。快速检测，是为了更多、更快的的发现感快速检测，是为了更多、更快的的发现感染者。染者。快速检测，不是为了取代实验室，但不能快速检测，不是为了取代实验室，但不能因为有了实验室而放弃使用快速检测。因为有了实验室而放弃使用快速检测。快速检测快速检测“五扩大七加强五扩大七
25、加强”扩大宣传教育覆盖面扩大宣传教育覆盖面扩大宣传教育覆盖面扩大宣传教育覆盖面扩大监测检测覆盖面扩大监测检测覆盖面扩大监测检测覆盖面扩大监测检测覆盖面扩大预防母婴传播覆盖面扩大预防母婴传播覆盖面扩大预防母婴传播覆盖面扩大预防母婴传播覆盖面扩大综合干预覆盖面扩大综合干预覆盖面扩大综合干预覆盖面扩大综合干预覆盖面扩大抗病毒治疗覆盖面扩大抗病毒治疗覆盖面扩大抗病毒治疗覆盖面扩大抗病毒治疗覆盖面加强血液管理加强血液管理加强血液管理加强血液管理加强医疗保障加强医疗保障加强医疗保障加强医疗保障加强关怀救助加强关怀救助加强关怀救助加强关怀救助加强权益保护加强权益保护加强权益保护加强权益保护加强组织领导加强组
26、织领导加强组织领导加强组织领导加强防治队伍建设加强防治队伍建设加强防治队伍建设加强防治队伍建设加强国际合作加强国际合作加强国际合作加强国际合作国务院国务院 国发国发【2010】48号：号：扩大监测检测覆盖面扩大监测检测覆盖面 要进一步加强监测检测网络建设，依要进一步加强监测检测网络建设，依托现有医疗卫生资源，配备必要的设备托现有医疗卫生资源，配备必要的设备和人员，扩大检测服务范围，推广使用和人员，扩大检测服务范围，推广使用快速简便的检测方法，提高检测可及性。快速简便的检测方法，提高检测可及性。组织各级各类医疗卫生机构主动开展艾组织各级各类医疗卫生机构主动开展艾滋病病毒检测咨询。滋病病毒检测咨询
27、。建立快速检测点，扩大检测覆盖率建立快速检测点，扩大检测覆盖率 我国地域辽阔，在一些有检测需求但我国地域辽阔，在一些有检测需求但尚不具备条件建立实验室的医疗机构、农尚不具备条件建立实验室的医疗机构、农村乡（镇）卫生院、社区卫生服务中心和村乡（镇）卫生院、社区卫生服务中心和艾滋病自愿咨询检测点（艾滋病自愿咨询检测点（VCTVCT）需要建立快）需要建立快速检测点，以扩大检测覆盖面、发现更多速检测点，以扩大检测覆盖面、发现更多的艾滋病病毒感染者。的艾滋病病毒感染者。年年年年HIVHIV报告即报告即报告即报告即AIDSAIDS新发现新发现新发现新发现合计合计合计合计晚发现晚发现晚发现晚发现%20072
28、00737419374191071910719481384813822.322.32008200845572455721079010790563625636219.119.12009200948193481931343313433616266162621.821.82010201048249482491608916089643386433825.025.0疫情的新特征（病人发现晚）要求开展疫情的新特征（病人发现晚）要求开展快检以尽早尽快发现快检以尽早尽快发现增加检测可及性是中国控制艾滋增加检测可及性是中国控制艾滋病的关键病的关键1.1.知晓知晓 HIVHIV感染状况能够得到有效的阳性的感染状况
29、能够得到有效的阳性的干预。干预。2.2.通过行为改变可以减少通过行为改变可以减少2/32/3的的HIVHIV经性传播。经性传播。3.3.及时的抗病毒治疗可以减少病毒载量从而及时的抗病毒治疗可以减少病毒载量从而减少二代传播减少二代传播 “治疗作为预防治疗作为预防”90%90%以以上的效能。上的效能。4.4.如果有如果有60%60%的的HIV+HIV+知晓自己的感染状态并知晓自己的感染状态并获得相应服务获得相应服务HIVHIV疫情达到控制。疫情达到控制。5.5.为什么目前为什么目前HIV+HIV+发现率不高发现率不高25%6+快速检测阳性，一致性快速检测阳性，一致性100%，中国，中国艾滋病性病，
30、艾滋病性病，2008年第年第3期）期）该比较的局限性：两种快速试剂均为进口试该比较的局限性：两种快速试剂均为进口试剂，没有对阴性样本进行对比。剂，没有对阴性样本进行对比。部分国产快速检测试剂质量需进一步提高部分国产快速检测试剂质量需进一步提高 2008200820082008年至年至年至年至2011201120112011年年年年4 4 4 4月月月月确证实确证实确证实确证实验室验室验室验室快速检快速检快速检快速检测阳性测阳性测阳性测阳性数数数数ELISAELISAELISAELISA结果结果结果结果WBWBWBWB结果结果结果结果备备备备注注注注阳性数阳性数阳性数阳性数阴性数阴性数阴性数阴性
31、数阳性数阳性数阳性数阳性数阴性数阴性数阴性数阴性数不确定不确定不确定不确定数数数数省临检省临检省临检省临检中心中心中心中心1171171171171101101101107 7 7 7919191918 8 8 811111111 遵义市遵义市遵义市遵义市CDCCDCCDCCDC1701701701701681681681682 2 2 21521521521524 4 4 412121212小计小计小计小计2872872872872782782782789 9 9 92432432432431212121223232323阳性符阳性符阳性符阳性符合性合性合性合性快速与快速与快速与快速与ELI
32、SA ELISA ELISA ELISA 96.9%96.9%96.9%96.9%快速与快速与快速与快速与WB:84.6%WB:84.6%WB:84.6%WB:84.6%ELISAELISAELISAELISA与与与与WB:87.4%WB:87.4%WB:87.4%WB:87.4%贵州：贵州：快速检测试剂与快速检测试剂与ELISA WB符合性符合性 示范区示范区示范区示范区检测检测检测检测人数人数人数人数快速快速快速快速阳性数阳性数阳性数阳性数ELISAELISAELISAELISA阳性数阳性数阳性数阳性数确证确证确证确证阳性数阳性数阳性数阳性数确证确证确证确证阴性数阴性数阴性数阴性数确证确证
33、确证确证不确定不确定不确定不确定南明区南明区南明区南明区 554075540755407554073232323232323232323232320 0 0 00 0 0 0红花岗区红花岗区红花岗区红花岗区 169941699416994169948 8 8 88 8 8 87 7 7 70 0 0 01 1 1 1铜仁市铜仁市铜仁市铜仁市217292172921729217296363636354545454545454549 9 9 90 0 0 0盘县盘县盘县盘县 3257332573325733257310101010101010109 9 9 90 0 0 01 1 1 1织金县织金
34、县织金县织金县 24399243992439924399383838382626262626262626121212120 0 0 0小计小计小计小计151102151102151102151102151151151151130130130130128128128128212121212 2 2 2 阳性符阳性符阳性符阳性符合率合率合率合率快速与快速与快速与快速与ELISA:86%ELISA:86%ELISA:86%ELISA:86%快速与快速与快速与快速与WB WB WB WB 84.8%84.8%84.8%84.8%ELISAELISAELISAELISA与与与与WB WB WB WB 9
35、8.5%98.5%98.5%98.5%贵州：母婴阻断示范区项目快检结果分析贵州：母婴阻断示范区项目快检结果分析贵州：母婴阻断示范区项目快检结果分析贵州：母婴阻断示范区项目快检结果分析艾滋病病毒抗体快速检测技术手册艾滋病病毒抗体快速检测技术手册(2011年版）年版）1 1 1 1、人员要求、人员要求、人员要求、人员要求2 2 2 2、检测点的设置、检测点的设置、检测点的设置、检测点的设置3 3 3 3、要求与管理、要求与管理、要求与管理、要求与管理3 3 3 3、试剂选择、试剂选择、试剂选择、试剂选择4 4 4 4、样本采集及注意事项、样本采集及注意事项、样本采集及注意事项、样本采集及注意事项5
36、 5 5 5、检测策略及流程、检测策略及流程、检测策略及流程、检测策略及流程6 6 6 6、实验记录、实验记录、实验记录、实验记录7 7 7 7、结果报告与告知、结果报告与告知、结果报告与告知、结果报告与告知8 8 8 8、检测质量控制、检测质量控制、检测质量控制、检测质量控制9 9 9 9、生物安全及个人防护。、生物安全及个人防护。、生物安全及个人防护。、生物安全及个人防护。人员要求人员要求1.1.从事从事HIVHIV快速检测的人员需有相关的检验快速检测的人员需有相关的检验或医学知识，经过县级以上相关专业技术或医学知识，经过县级以上相关专业技术部门培训，取得合格证书。部门培训，取得合格证书。
37、2.2.未经正规培训或培训后考核未合格的人员未经正规培训或培训后考核未合格的人员,不得进行快速检测工作。不得进行快速检测工作。3.3.对从事快速检测的人员对从事快速检测的人员,应根据需要进行应根据需要进行再培训。再培训。检测点的设置检测点的设置各省可根据艾滋病流行情况和防治工作整各省可根据艾滋病流行情况和防治工作整体需求，统筹考虑检测点设置，有效开展体需求，统筹考虑检测点设置，有效开展快速检测。快速检测。根据当地艾滋病流行情况和实际需求，可根据当地艾滋病流行情况和实际需求，可在有检测需求、但不具备建立实验室条件在有检测需求、但不具备建立实验室条件的地方设置检测点。的地方设置检测点。检测点可由当
38、地艾滋病确证实验室或筛查检测点可由当地艾滋病确证实验室或筛查实验室负责培训、验收，卫生行政部门负实验室负责培训、验收，卫生行政部门负责审批，在当地卫生行政部门与省艾滋病责审批，在当地卫生行政部门与省艾滋病确证中心实验室备案。确证中心实验室备案。检测点的要求检测点的要求快速检测所在房间温度可控，保证室内达快速检测所在房间温度可控，保证室内达到试剂要求的温度，有检测台面，光线充到试剂要求的温度，有检测台面，光线充足，可以消毒。足，可以消毒。需配备快速检测所需物品，至少包括：普需配备快速检测所需物品，至少包括：普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用
39、品和资料柜。耗品、安全防护用品和资料柜。严格按照快速试剂说明书要求检测，保存严格按照快速试剂说明书要求检测，保存原始记录及原始记录及必须参加省（地市级）组织的快速检测能必须参加省（地市级）组织的快速检测能力验证。力验证。检测点的管理检测点的管理省艾滋病确证中心实验室负责本省省艾滋病确证中心实验室负责本省HIVHIV快速快速检测的实施及其质量保证。统筹考虑检测检测的实施及其质量保证。统筹考虑检测点的发展与规划，组织本省快速检测能力点的发展与规划，组织本省快速检测能力验证活动。验证活动。各市级艾滋病确证实验室指导本地检测点各市级艾滋病确证实验室指导本地检测点的建立与管理，进行人员培训、现场督导的建
40、立与管理，进行人员培训、现场督导和质量管理。和质量管理。快速检测试剂（快速检测试剂（RTRT）是在是在ELISAELISA基础上发展起来的一种检测技术，基础上发展起来的一种检测技术，它用胶体金或硒标记抗原、抗体后以层析它用胶体金或硒标记抗原、抗体后以层析方法进行检测。方法进行检测。突出优点为快速、试剂便于保存、检测不突出优点为快速、试剂便于保存、检测不需要特殊设备并可以单份检测需要特殊设备并可以单份检测 ，比较适用，比较适用于基层医疗单位和标本初筛。于基层医疗单位和标本初筛。挑战：进一步提高检测灵敏度和特异性，挑战：进一步提高检测灵敏度和特异性，实现检测多元化，进行定量和半定量检测实现检测多元
41、化，进行定量和半定量检测胶体金纸条将会更加广泛地应用于各个领胶体金纸条将会更加广泛地应用于各个领域。域。艾滋病快速检测试验（艾滋病快速检测试验（RTRT）快速快速HIVHIV试剂的原理试剂的原理*颗粒凝集颗粒凝集 （Particle Agglutination,Particle Agglutination,PA)PA)免疫渗漏免疫渗漏 （Immunoconcentration,Immunoconcentration,Flow through,FT)Flow through,FT)免疫层析免疫层析 （Immunochromatograpy,Immunochromatograpy,lateral
42、flow,IF)lateral flow,IF)快速检测：快速检测：胶体金（或胶体硒）胶体金（或胶体硒）原理和方法原理和方法原理原理原理原理包括包括包括包括HIV-HIV-HIV-HIV-和和和和HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2抗原直接包被于硝酸纤维素抗原直接包被于硝酸纤维素抗原直接包被于硝酸纤维素抗原直接包被于硝酸纤维素膜上的检测线，将膜上的检测线，将膜上的检测线，将膜上的检测线，将HIVHIVHIVHIV抗体包被于质控线，通抗体包被于质控线，通抗体包被于质控线，通抗体包被于质控线，通过利用胶体金过利用胶体金过利用胶体金过利用胶体金(或胶体硒）标记或胶体硒）标记或胶体硒）标记或胶体硒
43、）标记HIV-1 HIV-1 HIV-1 HIV-1 和和和和HIV-HIV-HIV-HIV-2 2 2 2抗原抗原抗原抗原,采用免疫层吸双抗原夹心法原理来检采用免疫层吸双抗原夹心法原理来检采用免疫层吸双抗原夹心法原理来检采用免疫层吸双抗原夹心法原理来检测待测样品中可能存在的测待测样品中可能存在的测待测样品中可能存在的测待测样品中可能存在的HIVHIVHIVHIV抗体。抗体。抗体。抗体。操作方法操作方法操作方法操作方法操作简单，只需在加样处加上样品。操作简单，只需在加样处加上样品。操作简单，只需在加样处加上样品。操作简单，只需在加样处加上样品。艾滋病快速检测试剂构造艾滋病快速检测试剂构造艾滋病
44、快速检测：艾滋病快速检测：胶体金（或胶胶体金（或胶体硒）体硒）结果判读结果判读结果判读结果判读结果判读结果判读反应区和质控区均出现红色条带为阳性。反应区和质控区均出现红色条带为阳性。反应区和质控区均出现红色条带为阳性。反应区和质控区均出现红色条带为阳性。质控区有条带，反应区无条带为阴性。质控区有条带，反应区无条带为阴性。质控区有条带，反应区无条带为阴性。质控区有条带，反应区无条带为阴性。反应区和质控区均无条带则实验无效。反应区和质控区均无条带则实验无效。反应区和质控区均无条带则实验无效。反应区和质控区均无条带则实验无效。艾滋病快速检测的优点艾滋病快速检测的优点1.1.1.1.操作更快操作更快操
45、作更快操作更快2.2.2.2.不需要成批实验不需要成批实验不需要成批实验不需要成批实验3.3.3.3.不需要使用特殊仪器不需要使用特殊仪器不需要使用特殊仪器不需要使用特殊仪器4.4.4.4.检测的当时就给出结果检测的当时就给出结果检测的当时就给出结果检测的当时就给出结果 5.5.5.5.只能采用经过只能采用经过只能采用经过只能采用经过SFDASFDASFDASFDA批准的快速批准的快速批准的快速批准的快速HIVHIVHIVHIV抗抗抗抗体检测，以确保质量体检测，以确保质量体检测，以确保质量体检测，以确保质量快速检测试剂使用要求快速检测试剂使用要求 必须使用经国家食品药品监督管理局注册必须使用经
46、国家食品药品监督管理局注册批准的快速试剂。批准的快速试剂。试剂必须在有效期内使用。试剂必须在有效期内使用。根据检测目的选择试剂。初筛选择敏感性根据检测目的选择试剂。初筛选择敏感性高的试剂，复检选择特异性高的试剂。高的试剂，复检选择特异性高的试剂。推荐使用临床评估质量好并且近几年连续推荐使用临床评估质量好并且近几年连续考评结果稳定的试剂考评结果稳定的试剂 快速检测试剂主要使用以下人群快速检测试剂主要使用以下人群MSM MSM 现场干预现场干预VCTVCT（自愿咨询检测）（自愿咨询检测）PMTCTPMTCT（母婴阻断）和婚前检查（母婴阻断）和婚前检查扩大检测扩大检测(乡镇卫生院、社区医疗卫生服乡镇
47、卫生院、社区医疗卫生服务站）务站）PITCPITC（医疗机构主动提供检测咨询医疗机构主动提供检测咨询）快速检测策略和流程快速检测策略和流程当检测点上有两种快速检测试剂时：常规检测当检测点上有两种快速检测试剂时：常规检测当检测点上有两种快速检测试剂时：常规检测当检测点上有两种快速检测试剂时：常规检测当检测点上有两种快速检测试剂时：应急检测当检测点上有两种快速检测试剂时：应急检测当检测点上有两种快速检测试剂时：应急检测当检测点上有两种快速检测试剂时：应急检测当检测点上只有一种快速检测试剂时当检测点上只有一种快速检测试剂时当检测点上只有一种快速检测试剂时当检测点上只有一种快速检测试剂时末梢血样本采集
48、方法和注意事项末梢血样本采集方法和注意事项静脉血样本采集和注意事项静脉血样本采集和注意事项1 1、常规检测、常规检测样品样品初筛试验初筛试验快检试剂快检试剂1 1阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应复检试验复检试验快检试剂快检试剂1+1+快检试剂快检试剂2 2均阳性反应均阳性反应一阴一阳一阴一阳均阴性反应均阴性反应送确证试验室送确证试验室报告阴性报告阴性HIVHIV抗体快速检测流程图抗体快速检测流程图两种快检试剂两种快检试剂同时检测样品同时检测样品均阳性反应均阳性反应一阴一阳一阴一阳均阴性反应均阴性反应送确证试验室送确证试验室报报告告阴阴性性HIVHIV抗体快速检测流程图抗体快速检测流程图按疑似阳
49、性咨询告知按疑似阳性咨询告知按阴性咨询并告知按阴性咨询并告知2 2、应急检测、应急检测样品初筛试验快检试剂阳性反应阴性反应复检试验将样本转送筛查实验室均阳性反应一阴一阳均阴性反应送确证实验室报告阴性 HIV抗体快速检测流程图3 3、只有一种、只有一种快速试剂时快速试剂时实验记录实验记录可有数码影像资料或文字记录可有数码影像资料或文字记录文字记录：检测序列号，人群来源，受检文字记录：检测序列号，人群来源，受检者姓名，年龄，性别，检测日期，检测试者姓名，年龄，性别，检测日期，检测试剂盒的名称，批号，有效期及检测日期，剂盒的名称，批号，有效期及检测日期，检测结果与检测人等。检测结果与检测人等。对快速
50、检测呈阳性反应的就诊者，要收集对快速检测呈阳性反应的就诊者，要收集个人的真实信息，登记身份证号码和联系个人的真实信息，登记身份证号码和联系方式（包括移动电话）。填写方式（包括移动电话）。填写快速检测快速检测阳性反应样品送检单阳性反应样品送检单 快检质控快检质控1.1.样品要求唯一编号，实验前仔细核对，样品要求唯一编号，实验前仔细核对，检查。检查。2.2.检测人员每日检查室内的温湿度，实验检测人员每日检查室内的温湿度，实验环境温湿度应在试剂盒操作说明书要求的环境温湿度应在试剂盒操作说明书要求的范围内，试剂和样品应按要求存放，并做范围内，试剂和样品应按要求存放，并做好记录。好记录。3.3.检查是否