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1、艾滋病检测技术及诊断1检测依据和行业标准2样品的采集和处理n样品种类及用途n血液标本的采集n抗凝剂的选择n样品的保存n样品的运送3样品种类及用途 n全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液及干血斑（DBS）样品可用于HIV抗体检测。n全血、血清、血浆、病毒培养上清液可用于HIV抗原检测。n抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。n血浆、DBS可用于HIV-1病毒载量、基因型和耐药检测。n淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞（PBMC）及全血可用于HIV核酸定性与定量、基因型检测和HIV-1分离培养。4血液标本的采集n抗凝全血：消毒局部皮肤，用有抗凝剂的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注
2、射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒混匀68次，备用。n血浆：将采集的抗凝全血15003000r/min离心15分钟，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。n血清：根据需要，用不含抗凝剂的真空采血管抽取510ml静脉血，或一次性注射器抽取静脉血，转移至无抗凝剂的试管中，室温下自然放置12小时，待血液凝固、血块收缩后再用15003000r/min离心15分钟，吸出血清，置于合适的容器中，备用。5抗凝剂选择 nCD4+和CD8+T淋巴细胞检测：EDTA、肝素、枸橼酸钠n病毒分离、核酸检测：EDTA、枸橼酸钠6样品的保存 n抗体检测：血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于
3、28，一周以上应存放于-20 以下。n核酸检测：48h内分离血浆，4天内检测可存放于4,3个月内存放于-20 以下，3个月以上-70 以下保存。nCD4+T淋巴细胞检测：室温保存，时间不超过24h。如果用CD45设门，样品保存不超过72h。7样品的保存n筛查阳性样品应及时进行补充试验，筛查阴性样品，可根据具体需要决定保存时间，建议至少保存1个月。特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。补充试验阳性样品按照国家生物样品管理的有关规定执行。8样品的运送n标本筛查阳性（复检需用三代试剂），送检单位必须联系受检者，在仔细核实受检者身份等信息后重新采集1份全血。将筛查阳性的血清与重新采集的全血
4、共2份样品一同送至本中心。要求送检血清量不得少于0.5ml，送检单位对重新采集的全血不得做任何处理。标本的标识须用正楷字标明受检者姓名、性别和采集时间（年/月/日）。n筛查阳性的血清应装于1.5ml冻存管内，如果没有也可装于真空采血管内，禁止使用除此之外的其他容器。9样品的运送n包装要求：应采用WHO提出的三级包装系统 第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第
5、一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。10样品的运送n用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送，用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下（1825 ）运送。用于病毒载量检测的样品应在-20 以下运输。DBS和尿液样品应在室温下运送。11样品的运送12样品的运送n带螺帽、垫圈的血清冻存管。13样品的运送n禁止使用EP管14样品的运送n禁止使用内旋盖冻存管15样品的运送n在冻存管外套带盖的第二层容器16样品的运送n置于带冰袋的第三层容器中17样品的运送 HIV
6、抗体筛查检测报告的填写n筛查阳性的标本应填写HIV抗体筛查检测报告，加盖公章后送检。n报告单不得有空项，必须按规范要求认真完成筛查、复检（第一次）、复检（第二次）三次试验。n在检测结果空白处填写送检样品的S/CO值或发光值。nHIV筛查实验室筛查不能使用快速检测方法。n两次复检需使用三代试剂，三代试剂检测结果阳性方可送检。1819HIV抗体检测nHIV抗体检测的实验室要求nHIV抗体检测的目的和要点n常规HIV抗体检测方法n结果报告n质量控制20HIV抗体检测 HIV抗体检测的实验室要求n应符合国家对实验室生物安全的有关要求n实验室的质量控制按全国艾滋病检测技术规范（2015）相关章节规定执行
7、21HIV抗体检测 HIV抗体检测的目的和要点n目的：1、HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。2、以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状 况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需 要进行的体检等。3、以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播 HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。4、以监测为目的的检测是为了了解不同人群HIV感 染率及其变化趋势，包括高危人群、重点人群和 一般人群。222023/2/223HIV抗体检测n要点：1、根据目的选择检测方法及检测策略。2、严格遵守实验室SOP。3、结果判定以试剂盒说明书为标准。4、筛查试验有反应，须做补充试验。补充试验包 括抗体确证试
8、验（WB、RIBA/LIA）和核酸 试验（定性和定量）。24HIV抗体检测常规HIV抗体检测方法 酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA）快速检测法（RT）：金标法、硒标法、明胶颗粒凝集 试验（PA）蛋白免疫印迹试验（WB）、条带/线性免疫试验（RIBA /LIA）筛查方法抗体确证试验25HIV抗体检测 结果报告n筛查报告：筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”（本中心只提供WB试验），报告为“HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。n确证报告
9、：符合HIV-1阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性”，符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性”；符合阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性”；符合不确定判定标准，报告“HIV抗体不确定”，备注中注明“24周后复检”。26质量控制n酶免或发光法抗体检测的室内质量控制n快速法抗体检测质控27质量控制 酶免或发光法抗体检测的室内质量控制n试剂盒内部对照：试剂盒内提供的阴阳性对照血清，用于判断每次实验的有效性，但不能作为室内质控品用。n室内质控品（外部对照）：1、为试剂盒组分的外部质控品，是为监控检测的重复性而设置，质控品定值必须为弱阳性。2、可判断该批样品检测的有效性，因此，每次实
10、验必须含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。28质量控制nLevey-Jennings质控图l质控图参数：算术平均值（X）、标准差（S）、变异系数（CV）及控制限。l控制规则：告警（12S）、失控（13S）29质量控制1、告警（12S）：当外部对照的S/CO值超过2S范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。警告:12S规则违背30质量控制2、失控（13S）：当外部对照的S/CO值超过3S范围时，系统处于失控状态，本次结果不能被接受。失控:13S规则违背31质量控制n质控图的分析及失控处理 实验室应建立质控图分析及失控情况处理的程序。当出现失控时，必须找出发生问题的
11、原因，找出解决问题的方法，并消除原因。32质量控制 快速检测质控n试剂内对照 在质控窗口内出现质控带，该质控带是试剂自带的内部过程质控，说明实验操作全部完成并且实验所用材料处于工作状态。清洁的检测区背景是内部阴性过程质控。如试验完成后未呈现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，该试验结果无效，样品必须重检。33实验室质量控制n室内质控品对照1、可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳性 样品和阴性样品。不能使用酶联试验的外部质控品。更换试剂批号 更换检测人员2、下列情况需做质量控制 更换包装 更换厂家 3、建议：每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检测量大于50份样品，至少应做2次质
12、控。34实验室检测策略n窗口期：从HIV感染人体到感染者血清中的抗体、抗原或核酸等感染标志物能被检测出之前的时期。（在窗口期内的血液已有感染性。现有诊断技术检测HIV抗体、抗原和核酸的窗口期分别为感染后的3周、2周和1周左右。）nHIV抗体筛查试验：初步了解机体血液或体液中有无HIV 抗体的检测方法，也包括同时检测抗体和抗原的方法。nHIV补充试验：在获得筛查试验结果后，为了准确判断，继续检测机体血液或体液中有无HIV抗体或核酸的方法，包括抗体确证试验和核酸试验。35实验室检测策略36实验室检测策略n使用抗体检测试剂的筛查检测流程（三代试剂）试剂1有反应无反应两种试剂均有反应一有，一无均无反应
13、补充试验报告HIV抗体阴性37实验室检测策略n使用抗原抗体检测试剂的筛查流程（四代试剂）抗原抗体检测试剂有反应抗体检测均有反应一有，一无补充试验均无反应HIV-1核酸试验或P24抗原试验或24周后随访无反应报告HIV抗体阴性，P24抗原阴性38HIV感染/AIDS的诊断n诊断原则 以实验室检测为依据，结合临床表现和参考流行病学资料综合进行。HIV抗体和病原学检测是确诊HIV感染的依据；流行病学史是诊断急性期和婴幼儿HIV感染的重要参考；CD4+T淋巴细胞检测和临床表现是HIV感染分期诊断的主要依据；AIDS的指征性疾病是AIDS诊断的重要依据。39HIV感染/AIDS的诊断nHIV感染的诊断l
14、成人、青少年及18个月以上儿童符合下列一项即可诊断：HIV抗体筛查试验有反应和HIV抗体确证试验阳性；HIV抗体筛查试验有反应和核酸定性试验阳性；HIV抗体筛查试验有反应和核酸定量试验5000cps/ml；有流行病学史或艾滋病相关临床表现，两次HIV核酸检测均为阳性；HIV分离试验阳性。40HIV感染/AIDS的诊断l18个月龄及以下儿童符合下列一项即可诊断：为HIV感染母亲所生和两次HIV核酸检测均为阳性（第二次检测需在出生4周后采样进行）；有医源性暴露史，HIV分离试验结果阳性或两次HIV核酸检测均为阳性；为HIV感染母亲所生和HIV分离试验阳性。41HIV感染/AIDS的诊断nAIDS的诊断l成人及15岁（含15岁）以上青少年符合下列一项即可诊断：HIV感染和CD4+T淋巴计数200/mm3；HIV感染和伴有至少一种成人AIDS指征性疾病。42HIV感染/AIDS的诊断l15岁以下儿童符合下列一项即可诊断：HIV感染和CD4+T淋巴细胞百分比25%(12月龄)，或20%(12月龄36月龄)，或15%(37月龄60月龄)，或CD4+T淋巴细胞计数200/mm3(514岁)；HIV感染和至少伴有一种儿童AIDS指征性疾病。43442023/2/245