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1、发育生物学试验教案试验一模式生物蛙、海胆胚胎发育各阶段切片观看一、试验目的了解模式生物发育过程中的形态变化. 二、试验原理在多种动物中;胚胎发育经受受精、桑椹胚、囊胚、原肠时期、神经 时期;不同时期具有不同的特点 ;在发育中其形态和构造经受明显的阶段性变化.三、试剂与材料1. 试验试剂香柏油、显微镜2. 试验材料模式生物切片、装片蛙、海胆四、试验步骤观看模式生物发育各时期的胚胎外形变化. 五、试验作业记录形态学变化.试验二模式生物鲫鱼、鸡胚胎发育各阶段切片观看一、试验目的了解模式生物发育过程中的形态变化. 二、试验原理在多种动物中;胚胎发育经受受精、桑椹胚、囊胚、原肠时期、神经时期;不同时期具
2、有不同的特点 ;在发育中其形态和构造经受明显的阶段性变化.三、试剂与材料1. 试验试剂香柏油、显微镜2. 试验材料模式生物切片、装片鲫鱼、鸡四、试验步骤观看模式生物发育各时期的胚胎外形变化. 五、试验作业记录形态学变化.试验三两栖类变态过程的观看一、试验目的了解两栖类动物变态过程中的形态变化. 二、试验原理在多种动物中;胚胎发育经受一个幼虫期 ;幼虫具有与成体格外不同的特点;在发育中其形态和构造经受明显的阶段性变化 ;其中有一些器官退化消逝;有些得到改造;有些生出来;从而完毕幼虫期;建成成体构造; 这种现象统称为变态.三、试剂与材料1. 试验试剂何尔夫列他溶液氧化钠 0.35g;氯化钾 0.0
3、05g;二氯化钙 0.01g;碳酸氢钠 0.02g;蒸馏水 100mL2. 试验材料蛙的蝌蚪四、试验步骤人工饲养青蛙;观看其变态过程中的形态变化. 五、试验作业记录蛙变态过程中的形态学变化. 附 蛙的饲养方法卵和蝌蚪的培育最好用干净的自来水;并加上稀释 5-6 倍的何尔夫列他液氧化钠 0.35g;氯化钾 0.005g;二氯化钙 0.01g;碳酸氢钠 0.02g;蒸馏水 100mL;这样可以增加胚胎和蝌蚪发育所必需的钠、钙、钾离子.培育水要多而清洁;否则会因缺氧而致死.蝌蚪主要吃植物性饲料;如水藻等.煮过的菠菜和莴苣是最适宜的食物;但投喂时不宜煮得太熟;并留意除去纤维.初次投食量要小;以后可不断
4、增加.每天定时定量投喂;不宜过多;以防残渣腐败;造成水体污染.假设用缸、盆培育;或水体较小;一般 3-5d 换一次水较好.当蝌蚪发育成带有短尾的幼体开头用肺呼吸时;假设用池塘培育;水中必需放些水草;或小木条; 以供其登陆用.假设为缸、盆培育;水里可放一些泡沫塑料.成体主要吃昆虫之类的动物性食物 ;以直翅目、鞘翅目、膜翅目、蜻蜓目为最多;其次为双翅目、脉翅目、半翅目等昆虫.有时也食蛛形动物、 蚯蚓;甚至也以谷粒、鱼苗或蝌蚪及小蛙为食.试验四 鸟类胚胎发育的观看一、试验目的生疏鸟类胚胎发育的过程. 二、试验原理鸟类胚胎发育是典型的体外发育 ;利用人工孵化的家禽 ;可以便利观看其发育过程.鸡胚胎发育
5、可分为两个阶段：成蛋阶段和成雏阶段.1 胚胎在卵形成过程中的发育即母体内的发育 ;也即是成蛋阶段的发育 .这个阶段的发育过程是 ; 受精卵+卵裂+囊胚期+原肠期.当胚胎发育到原肠期时 ;已分化形成上胚层和下胚层;从外观上看形如一个圆盘状体即为胚盘 ;当卵排出体外;因温度下降;胚胎生长发育随即停顿.2 胚胎在孵化过程中的发育卵排出体外后;保存在 18以下的环境中;胚胎发育根本处于静止状态.当人孵后;胚胎即开头发育 .胚胎在孵化过程中发育的时期称孵化期.鸡的孵化期为 21 天.种蛋人孵后;胚胎在原肠期形成的同时;上胚层像个碟状圆盘;在其末 端;细胞不断地向中线集中;形成一条细胞带;称原条.原条细胞
6、通过原沟 的底部渐渐转人上胚层与下胚层之间 ;并分别向两侧扩展 ;这些迁移至上下胚层之间的细胞称为中胚层 .原条细胞也渐渐转人上胚层与内胚层之间;并分别向前伸展;伸展的构造称为头突;后发育成脊索.脊索是胚胎期 的纵轴支持器官;最终为脊柱所代替;随着胚胎的不断发育;由外、中、内 三个胚层渐渐形成各种腺体、器官、骨骼、肌肉、皮肤、羽毛和喙 ;最终形成的机体雏鸡. 三、试剂与材料鸡的种蛋四、试验步骤1. 观看比较种蛋受精与非种蛋未受精内部构造的差异.2. 观看教学片;生疏鸡的胚胎发育过程.2. 人工孵化种蛋;记录鸡的孵化进程及特征. 五、试验作业拍照记录鸡孵化进程中的特征变化.附1. 鸡胚发育进程及
7、特征1 胚龄：蛋黄外表有一颗颜色稍深;四周稍亮的圆点;俗称“鱼眼珠”或白 光珠.2 胚龄：可看到卵黄囊血管区 ;其外形很象樱桃形 ;故俗称为为“樱桃珠”.3 胚龄：卵黄囊血管的外形象静止的蚊子;俗称“蚊虫珠”.卵黄颜色稍深 的下部似月牙状;俗称“月牙”.4 胚龄：蛋转动时;卵黄不易跟随着转动;俗称为“钉壳”.5 胚龄：明显看到黑色的眼点;谷称“起珠”、“单珠”、“起眼”假设为 5 天整; 还可见到些羊水.6 胚龄：胚胎形似“ 筒”;一端是头部;另一端为弯增大的躯干部;俗称 “双珠”.可以看到羊毛.7 胚龄：白茫茫的羊水增多;胚胎活动尚不强;胚胎在羊水中不易看清;似沉 在羊水中;俗称“沉”.正面
8、已布满扩大的卵黄和血管.8 胚龄：胚胎较易看到;象在羊水中浮游一样;俗称“浮”.从反面看;卵黄 已扩大到反面;蛋转动时二边卵黄不易晃动;俗称为“边口发硬”.9 胚龄：蛋转动时;二边卵黄简洁晃动;反面尿囊血管快速伸展越出卵黄 ; 故俗称为“发边”.10 胚龄：尿囊血管连续伸展;在蛋的小头合拢;整个蛋除气室外都布满了血 管;俗称为“合拢”、“长足”.11 胚龄：血管开头加粗;血管颜色开头加深;解剖背部消灭绒毛;腺胃明显 可辨.12 胚龄：血管加粗、颜色渐渐加深.解剖身躯掩盖绒毛.13 胚龄：主要观看小头发亮的局部随着胚龄的增长而逐日缩小.头部和身 体大局部掩盖绒毛;跖、趾消灭角质鳞片原基.14 胚
9、龄：小头发亮的局部随着胚龄增长而逐日缩小;蛋内黑影局部随着胚 龄增长而加大;胚胎全身掩盖绒毛 ;头向气室;胚胎开头转变横着的位置 ; 渐渐与蛋长轴平行.15 胚龄：蛋内黑影局部增大.解剖观看;翅已完全成形;跖、趾的鳞片开头 形成;眼脸闭合.体内外的器官大体上部形成了.16 胚龄：黑影连续燕大;解剖冠和肉髯明显;绝大局部蛋自己进入羊膜腔.17 胚龄：以小头对准光源;再看不到发亮的局部;俗称“封门”.躯干增大; 脚、翅、颈变大、眼、头日益显小;两腿紧抢头部.喙向气室.18 胚龄：气室向一方倾斜;这是胚胎转身的原因;俗称为“斜口”、“转身”.解剖头弯曲在右翼下;眼开头睁开.19 胚龄：喙进气室;开头
10、呼吸;颈、翅突入气室;头埋右翼下;两腿弯曲朝头部;呈抢头姿势;以便于破壳时挣扎.雏胚开头啄壳;可闻雏鸣叫.照蛋时; 可见气室有翅膀、喙、颈部的黑影闪动;俗称“闪毛”.20 胚龄：起初是胚胎喙部穿破壳膜;伸入气室内;称为“起嘴”；接着开头啄壳;称“见嘌”、“啄壳”.20.5-21 胚龄：出壳.2. 鸡的人工孵化鸡属鸟类;鸟类与哺乳动物胚胎发育不同 ;受精卵种蛋排出母体后完全依靠外界环境条件连续发育.第 1-4 天为内部器官发育阶段；5-14 天为外部器官形成阶段；15-19 天为胚胎生长阶段；20-21 天为出壳阶段.在整个孵化过程中;温度;湿度;通风换气与翻蛋等外界条件将是保证胚胎正常发育;并
11、使孵化获得成功的关键因素.1 温度：温度是孵化过程的首要条件 ;发育中的鸡胚对温度最敏感 ;只有在适宜的温度下;才能保证鸡胚的正常生长发育和物质代谢 .所以正确地把握孵化温度是提高孵化率的关键. 在 1-18 天中孵化的最适温度是37.5C-38.6C；19-21 天则应稍低于此温度是 36.1C-37.5C.假设温度过高胚胎发育快速 ;孵化期缩短;胚胎死亡增加.温度过低则会延长种蛋的孵化时间;同时胚胎发育缓慢并带来死亡.2 湿度：水是温度的良导体;空气中的湿度对鸡胚胎发育有很大作用 .一般要求 1-18 天相对湿度 40%-60%；19-21 天相对湿度 65%-75%.假设湿度过高会阻碍蛋
12、内水分蒸发 ;使胚胎发育所产生的大量代谢水不能准时排出 ;严峻时可导致胚胎畸形.假设湿度过低;将加速蛋内水分蒸发;造成失水过多;阻 碍代谢废物的排出及所需氧气的摄入.易引起胚胎和壳膜粘连.3 通风换气：通风换气的主要目的是帮助胚蛋中的胚胎与外界进展气体交换和热 能交换;同时调整机内的温度.胚胎发育过程中需要不断的吸入氧气 ;排出二氧化碳气和水分.孵化初期;胚胎需要少量氧气可通过酶的作用从蛋黄中获得 ;而后利用气室的空气;再后则利用尿囊循环与蛋壳上的气孔同外界进展气体交换 ;19 天后胚胎开头用肺呼吸.随着胚龄的增加;胚胎的气体交换量也不断增加.因 此除胚胎发育初期外;胚胎的气体交换都是由通风换
13、气解决.通风换气还与温度、湿度有亲热的关系 .通风良好时;空气能充分流通还能与外界不断的进展热能交换.温度、相对湿度都可保证.4 翻蛋：翻蛋的主要作用是转变胚胎方位;促进羊膜运动;防止胚胎、蛋黄、蛋 白与蛋壳之间粘连.胚蛋放置位置必需适当;在1-18 天进展定时翻蛋;每2 小时翻蛋一次;翻蛋角度以 90 度为宜.种蛋孵化到 18 天时;将种蛋移到出雏盘上叫落盘.这时胚胎发育完成; 在 20-21 天时开头出壳.出壳时胚胎已经完全长成雏鸡.这时雏鸡的头位于气室中即鸡蛋的大头局部 ;强健的雏鸡先把蛋壳啄开一个小孔 ;然后渐渐的将小孔向两侧扩大;直至破壳到一半以上时;雏鸡的头便可脱壳而出;而后身体也
14、渐渐自行摆脱出来.1 胚龄2 胚龄3胚龄4 胚龄5 胚龄6胚龄7 胚龄8 胚龄9胚龄10 胚 龄11 胚 龄12 胚龄13 胚龄14 胚龄15胚龄16 胚龄17 胚龄18胚龄19 胚龄20 胚龄20.5胚龄替补试验试验五精子形态观看及体外获能试验一、试验目的1. 生疏哺乳类精子的形态构造.2. 了解精子体外获能的方法. 二、试验原理哺乳动物的精子离开精巢后并没有受精力量 ;必需要经过成熟和获能才能使卵子受精.精子在附睾中成熟.成熟过程中;在附睾中多种物质的作用下;精子质膜的脂类、糖蛋白、唾液酸、吸取抗原、外表 ATP 酶等很多成分发生变化;负电荷增加;与凝集素的结合力也发生转变 .精子射出后;
15、经阴道和子宫到达输卵管;在壶腹部与卵子结合;完成受精.张明觉、Austin 1951 年觉察兔子和大白鼠直接排出的精子不能使卵受精;必需在生殖道中停留一段时间后才具备受精力量 ;这一现象称为精子的获能.后来争论觉察;精子在体外也能完成获能;液、输卵管分泌物、血清、房水 等多种液体都可使精子获能;pH、Ca2+浓度等环境条件对获能也有影响.精子在获能过程中发生一系列的形态及生理生化的变化 ;呼吸明显加强;运动形态和速度也发生很大变化;由直线前进变为曲线运动.体外获能一般分为两步：一是精子的洗涤;经 1 次或屡次离心后除去杂质、死精子、低活力精子、冻精保护液及稀释液等；二是精子的获能处 理;主要是
16、使用高离子强度液 His、钙离子载体、肝素等;以促进钙离子进入精子顶体并刺激精子内部 pH 上升;从而诱发精子获能.三、试剂与材料1. 试验试剂IVF 液 NaCl 5.803g/L;KCl 0.201g/L;NaHCO32.106g/L;CaCl2H O220.264g/L;丙酮酸钠 0.055g/L;60%乳酸钠 3.5mL;葡萄糖 1.000g/L;青霉素G 钾或钠盐 0.063g/L;硫酸链霉素 0.050g/L;酚红 0.010g/L;NaHPO 12H O2420.056g/L;MgCl22. 试验材料雄性小鼠四、试验步骤6H2O 0.102g/L;牛血清白蛋白 BSA1. 断颈处
17、死雄性小鼠.2. 翻开腹腔;剪取附睾尾尽可能除去脂肪;将每个附睾尾放入已在 37、5%CO2培育箱预平衡 2h 的 2ml IVF 液加 30mg/ml BSA 中.3. 将附睾尾剪成几段 ;用镊子轻轻挤压之 ;使精子挤入培育液中 ;去掉附睾尾.4. 吸打均匀后;1800 r/min 离心 5min;弃上清;以 2ml IVF 液重悬.5. 将精子在 37、5%CO2培育箱中培育 1.5h;使之获能.6. 镜检;观看获能精子的运动. 五、试验作业观看比较精子在获能前后运动形态和速度的变化.试验六植物组织培育一、试验目的了解植物细胞全能性. 二、试验原理生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全
18、套遗传物质 ;都有发育成完整个体所必需的全部基因.三、试剂与材料1. 试验试剂MS 培育基、无菌水;升汞、酒精、次氯酸2. 试验材料银杏枝叶四、试验步骤 培育基的配制 1.母液配制 母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四 类. 2.培育基的配制与分装 3.培育基的灭菌二 取材、消毒与接种 1 先将剪下的枝条清洗干净;选择颖的花柄、嫩梢和带腋芽的茎段作为外植体;将外植体放在自来水下冲洗 12h;以冲洗掉大的土壤颗粒.2 将清洗干净的外植体移入无菌操作台进展消毒;先用 75%酒精外表消毒30S;再用 0.1%洁尔灭处理 15min.消毒后用无菌水冲洗 45 次.3 将消毒后的外植体放入消毒过的
19、培育皿上;在无菌条件下切成 0.40.5 cm 长的小段单芽;用无菌滤纸吸干水;马上接种到加有不同激素浓度的 MS 培育基上;每个培育基接种三个芽;并用封口膜封好.三 外植体的培育接种后的外植体放入用 75%酒精消毒后的干净的光照培育箱中 ;培育条件为：温度 27;光照周期为光照 12h/d+黑暗 12h/d;培育基的 pH 值为5.8;进展培育与愈伤组织的诱导.全部接种工作都是在严格无菌条件下进展的 ; 所以要特别认真、认真、以防杂菌污染.四 两周后观看愈伤组织的诱导并进展生根生芽诱导五、试验作业1. 观看植物组织培育的培育物在培育中的生长状况. 2观看植物组织培育的培育物有无污染;分析缘由
20、3. 以 MS 为例;试说明 MS 培育基中各成分各有何作用. 试验七 植物生长调整剂对果实发育的影响一、试验目的1. 了解 2;4-D、萘乙酸对无籽果实形成的诱导作用.2. 了解乙烯对果实的催熟作用. 二、试验原理植物生长调整剂 2;4-D、萘乙酸 NAA 等;在适当的浓度下能诱导无籽果实形成.适当浓度的乙烯利能促进果实成熟.三、试剂与材料1. 试验试剂20mg/L2;4-D 用少许 1 mmol/L NaOH 溶解 2;4-D; 再用蒸馏水定容;500mg/L NAA 用热水或少量 95%乙醇溶解 NAA;再用蒸馏水定容;40%乙烯利2. 试验材料盆栽番茄、辣椒幼苗;香蕉或大蕉、柿子、芒果
21、等 四、试验步骤1. 无籽果实的诱导形成12;4-D 诱导无籽果实在番茄开花授粉前用 2-3 滴 20mg/L 2;4-D 溶液涂在花上;以水处理作比照.果实成熟时;观看果实内籽粒的有无.2NAA 诱导无籽果实在辣椒开花初期;用 2-3 滴 500mg/L NAA 溶液滴在花朵上或喷花;以水处理作比照.果实成熟时;检查是否有籽.2. 乙烯利对果实的催熟作用将采收后的香蕉或大蕉、柿子、芒果等用 500mg/L 乙烯利溶液浸泡 5s; 以蒸馏水浸泡作比照;取出果实分别放在箩筐或纸箱内 ;室温保存.5-10d 之内;观看结果.比较果皮的颜色和果实的成熟度五、留意事项1. 用植物生长调整剂处理材料的时期肯定要把握好.2. 可尝试使用不同的激素浓度;筛选出激素的最适作用浓度. 六、试验作业拍照记录试验结果包括比照并进展分析.