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1、发育生物学试验教案试验一模式生物蛙、海胆胚胎发育各阶段切片观看一、试验目的了解模式生物发育过程中的形态变化. 二、试验原理在多种动物中,胚胎发育经受受精、桑椹胚、囊胚、原肠时期、神经时期,不同时期具有不同的特点,在发育中其形态和构造经受明显的阶段性变化.三、试剂与材料1. 试验试剂香柏油、显微镜2. 试验材料模式生物切片、装片蛙、海胆四、试验步骤观看模式生物发育各时期的胚胎外形变化. 五、试验作业记录形态学变化.试验二模式生物鲫鱼、鸡胚胎发育各阶段切片观看一、试验目的了解模式生物发育过程中的形态变化. 二、试验原理在多种动物中,胚胎发育经受受精、桑椹胚、囊胚、原肠时期、神经时期,不同时期具有不
2、同的特点,在发育中其形态和构造经受明显的阶段性变化.三、试剂与材料1. 试验试剂香柏油、显微镜2. 试验材料模式生物切片、装片鲫鱼、鸡四、试验步骤观看模式生物发育各时期的胚胎外形变化. 五、试验作业记录形态学变化.试验三两栖类变态过程的观看一、试验目的了解两栖类动物变态过程中的形态变化. 二、试验原理在多种动物中,胚胎发育经受一个幼虫期,幼虫具有与成体格外不同的特点,在发育中其形态和构造经受明显的阶段性变化,其中有一些器官退化消逝,有些得到改造,有些生出来, 从而完毕幼虫期,建成成体构造,这种现象统称为变态.三、试剂与材料1. 试验试剂何尔夫列他溶液氧化钠 0.35g,氯化钾 0.005g,二
3、氯化钙 0.01g,碳酸氢钠 0.02g,蒸馏水100mL.2. 试验材料蛙的蝌蚪四、试验步骤人工饲养青蛙,观看其变态过程中的形态变化. 五、试验作业记录蛙变态过程中的形态学变化.附 蛙的饲养方法卵和蝌蚪的培育最好用干净的自来水,并加上稀释 5-6 倍的何尔夫列他液氧化钠 0.35g, 氯化钾 0.005g,二氯化钙 0.01g,碳酸氢钠 0.02g,蒸馏水 100mL,这样可以增加胚胎和蝌蚪发育所必需的钠、钙、钾离子.培育水要多而清洁,否如此会因缺氧而致死.蝌蚪主要吃植物性饲料,如水藻等.煮过的菠菜和莴苣是最适宜的食物,但投喂时不宜煮 得太熟,并留意除去纤维.初次投食量要小,以后可不断增加.
4、每天定时定量投喂,不宜过多,以防 残渣腐败,造成水体污染.假设用缸、盆培育,或水体较小,一般 3-5d 换一次水较好.当蝌蚪发育成带有短尾的幼体开头用肺呼吸时,假设用池塘培育,水中必需放些水草,或小木条,以供其登 陆用.假设为缸、盆培育,水里可放一些泡沫塑料.成体主要吃昆虫之类的动物性食物,以直翅目、鞘翅目、膜翅目、蜻蜓目为最多,其次为双翅目、脉翅目、半翅目等昆虫.有时也食蛛形动物、蚯蚓,甚至也以谷粒、鱼苗或蝌蚪与小蛙为食.试验四 鸟类胚胎发育的观看一、试验目的生疏鸟类胚胎发育的过程. 二、试验原理鸟类胚胎发育是典型的体外发育,利用人工孵化的家禽,可以便利观看其发育过程. 鸡胚胎发育可分为两个
5、阶段：成蛋阶段和成雏阶段.1胚胎在卵形成过程中的发育即母体内的发育,也即是成蛋阶段的发育.这个阶段的发育过程是,受精卵+卵裂+囊胚期+ 原肠期.当胚胎发育到原肠期时,已分化形成上胚层和下胚层,从外观上看形如一个圆盘状体 即为胚盘,当卵排出体外,因温度下降,胚胎生长发育随即停顿.2胚胎在孵化过程中的发育卵排出体外后,保存在 18以下的环境中,胚胎发育根本处于静止状态.当人孵后,胚胎即开头发育.胚胎在孵化过程中发育的时期称孵化期.鸡的孵化期为 21 天.种蛋人孵后,胚胎在原肠期形成的同时,上胚层像个碟状圆盘,在其末端,细胞不断地向中 线集中,形成一条细胞带,称原条.原条细胞通过原沟的底部渐渐转人上
6、胚层与下胚层之间,并 分别向两侧扩展,这些迁移至上下胚层之间的细胞称为中胚层.原条细胞也渐渐转人上胚层与 内胚层之间,并分别向前伸展,伸展的构造称为头突,后发育成脊索.脊索是胚胎期的纵轴支持 器官,最终为脊柱所代替,随着胚胎的不断发育,由外、中、内三个胚层渐渐形成各种腺体、器官、骨骼、肌肉、皮肤、羽毛和喙,最终形成的机体雏鸡.三、试剂与材料鸡的种蛋四、试验步骤1. 观看比较种蛋受精与非种蛋未受精内部构造的差异.2. 观看教学片,生疏鸡的胚胎发育过程.2. 人工孵化种蛋,记录鸡的孵化进程与特征. 五、试验作业拍照记录鸡孵化进程中的特征变化.附1. 鸡胚发育进程与特征1 胚龄：蛋黄外表有一颗颜色稍
7、深,四周稍亮的圆点,俗称“鱼眼珠或白光珠.2 胚龄：可看到卵黄囊血管区,其外形很象樱桃形,故俗称为为“樱桃珠.3 胚龄：卵黄囊血管的外形象静止的蚊子,俗称“蚊虫珠.卵黄颜色稍深的下部似月牙状,俗称“月牙.4 胚龄：蛋转动时,卵黄不易跟随着转动,俗称为“钉壳.5 胚龄：明显看到黑色的眼点,谷称“起珠、“单珠、“起眼假设为 5 天整,还可见到些羊水.6 胚龄：胚胎形似“筒,一端是头部,另一端为弯增大的躯干部,俗称“双珠.可以看到羊毛.7 胚龄：白茫茫的羊水增多,胚胎活动尚不强,胚胎在羊水中不易看清,似沉在羊水中,俗称“沉.正面已布满扩大的卵黄和血管.8 胚龄：胚胎较易看到,象在羊水中浮游一样,俗称
8、“浮.从反面看,卵黄已扩大到反面,蛋转动时二边卵黄不易晃动,俗称为“边口发硬.9 胚龄：蛋转动时,二边卵黄简洁晃动,反面尿囊血管快速伸展越出卵黄,故俗称为“发边.10 胚龄：尿囊血管连续伸展,在蛋的小头合拢,整个蛋除气室外都布满了血管,俗称为“合拢、“长足.11 胚龄：血管开头加粗,血管颜色开头加深,解剖背部消灭绒毛,腺胃明显可辨.12 胚龄：血管加粗、颜色渐渐加深.解剖身躯掩盖绒毛.13 胚龄：主要观看小头发亮的局部随着胚龄的增长而逐日缩小.头部和身体大局部掩盖绒毛, 跖、趾消灭角质鳞片原基.14 胚龄：小头发亮的局部随着胚龄增长而逐日缩小,蛋内黑影局部随着胚龄增长而加大,胚胎全身掩盖绒毛,
9、头向气室,胚胎开头转变横着的位置,渐渐与蛋长轴平行.15 胚龄：蛋内黑影局部增大.解剖观看,翅已完全成形,跖、趾的鳞片开头形成,眼脸闭合.体内外的器官大体上部形成了.16 胚龄：黑影连续燕大,解剖冠和肉髯明显,绝大局部蛋自己进入羊膜腔.17 胚龄：以小头对准光源,再看不到发亮的局部,俗称“封门.躯干增大,脚、翅、颈变大、眼、头日益显小,两腿紧抢头部.喙向气室.18 胚龄：气室向一方倾斜,这是胚胎转身的原因,俗称为“斜口、“转身.解剖头弯曲在右翼下,眼开头睁开.19 胚龄：喙进气室,开头呼吸,颈、翅突入气室,头埋右翼下,两腿弯曲朝头部,呈抢头姿势,以便于破壳时挣扎.雏胚开头啄壳,可闻雏鸣叫.照蛋
10、时,可见气室有翅膀、喙、颈部的黑影闪动,俗 称“闪毛.20 胚龄：起初是胚胎喙部穿破壳膜,伸入气室内,称为“起嘴；接着开头啄壳,称“见嘌、“ 啄壳.胚龄：出壳.2. 鸡的人工孵化鸡属鸟类,鸟类与哺乳动物胚胎发育不同,受精卵种蛋排出母体后完全依靠外界环境条件连续发育.第 1-4 天为内部器官发育阶段；5-14 天为外部器官形成阶段；15-19 天为胚胎生长阶段；20-21 天为出壳阶段.在整个孵化过程中,温度,湿度,通风换气与翻蛋等外界条件将是保证胚胎正常发育,并使孵化获得成功的关键因素.1温度：温度是孵化过程的首要条件,发育中的鸡胚对温度最敏感,只有在适宜的温度下,才能保证鸡胚的正常生长发育和
11、物质代谢.所以正确地把握孵化温度是提高孵化率的关键 .在 1-18 天中孵化的最适温度是 37.5C-38.6C；19-21 天如此应稍低于此温度是 36.1C-37.5C.假设温度过高胚胎发育快速,孵化期缩短,胚胎死亡增加.温度过低如此会延长种蛋的孵化时间,同时胚胎发育缓慢并带来死亡.2湿度：水是温度的良导体,空气中的湿度对鸡胚胎发育有很大作用.一般要求 1-18 天相对湿度40%-60%；19-21 天相对湿度 65%-75%.假设湿度过高会阻碍蛋内水分蒸发,使胚胎发育所产生的大量代谢水不能与时排出,严峻时可导致胚胎畸形.假设湿度过低,将加速蛋内水分蒸发, 造成失水过多,阻碍代谢废物的排出
12、与所需氧气的摄入.易引起胚胎和壳膜粘连.3通风换气：通风换气的主要目的是帮助胚蛋中的胚胎与外界进展气体交换和热能交换,同时调整机内的温度.胚胎发育过程中需要不断的吸入氧气 ,排出二氧化碳气和水分.孵化初期,胚胎需要少量氧气可通过酶的作用从蛋黄中获得,而后利用气室的空气,再后如此利用尿囊循环与蛋壳上的气孔同外界进展气体交换,19 天后胚胎开头用肺呼吸.随着胚龄的增加,胚胎的气体交换量也不断增加.因此除胚胎发育初期外,胚胎的气体交换都是由通风换气解决.通风换气还与温度、湿度有亲热的关系.通风良好时,空气能充分流通还能与外界不断的进展热能交换.温度、相对湿度都可保证.4翻蛋：翻蛋的主要作用是转变胚胎
13、方位,促进羊膜运动,防止胚胎、蛋黄、蛋白与蛋壳之间粘连. 胚蛋放置位置必需适当,在 1-18 天进展定时翻蛋,每 2 小时翻蛋一次,翻蛋角度以 90 度为宜.种蛋孵化到 18 天时,将种蛋移到出雏盘上叫落盘.这时胚胎发育完成,在 20-21 天时开头出壳.出壳时胚胎已经完全长成雏鸡.这时雏鸡的头位于气室中即鸡蛋的大头局部,强健的雏鸡先把蛋壳啄开一个小孔,然后渐渐的将小孔向两侧扩大,直至破壳到一半以上时,雏鸡的头便可脱壳而出,而后身体也渐渐自行摆脱出来.1 胚龄2 胚龄3 胚龄4 胚龄 5 胚龄 6 胚龄7 胚龄8 胚龄9 胚龄10 胚龄11 胚龄12 胚龄13 胚龄14 胚龄15 胚龄16 胚
14、龄17 胚龄18 胚龄19 胚龄替补试验试验五20 胚龄胚龄精子形态观看与体外获能试验一、试验目的1. 生疏哺乳类精子的形态构造.2. 了解精子体外获能的方法. 二、试验原理哺乳动物的精子离开精巢后并没有受精力量,必需要经过成熟和获能才能使卵子受精.精 子在附睾中成熟.成熟过程中,在附睾中多种物质的作用下,精子质膜的脂类、糖蛋白、唾液酸、吸取抗原、外表 ATP 酶等很多成分发生变化,负电荷增加,与凝集素的结合力也发生转变.精子射出后,经阴道和子宫到达输卵管,在壶腹部与卵子结合,完成受精.X 明觉、Austin 1951 年觉察兔子和大白鼠直接排出的精子不能使卵受精,必需在生殖道中停留一段时间后
15、才具备受精 力量,这一现象称为精子的获能.后来争论觉察,精子在体外也能完成获能,液、输卵管分泌物、血清、房水等多种液体都可使精子获能,pH、Ca2+浓度等环境条件对获能也有影响.精子在获能过程中发生一系列的形态与生理生化的变化,呼吸明显加强,运动形态和速度也发生很大变化,由直线前进变为曲线运动.体外获能一般分为两步：一是精子的洗涤,经 1 次或屡次离心后除去杂质、死精子、低活力精子、冻精保护液与稀释液等；二是精子的获能处理,主要是使用高离子强度液His、钙离子载体、肝素等,以促进钙离子进入精子顶体并刺激精子内部 pH 上升,从而诱发精子获能.三、试剂与材料1. 试验试剂IVF 液NaCl 5.
16、803g/L,KCl 0.201g/L,NaHCO3 2.106g/L,CaCl22H2O 0.264g/L,丙酮酸钠0.055g/L,60%乳酸钠3.5mL,葡萄糖1.000g/L,青霉素G 钾或钠盐0.063g/L,硫酸链霉素0.050g/L,酚红 0.010g/L,Na2HPO 12H O 0.056g/L,MgCl 6HO 0.102g/L,牛血清白蛋白BSA42222. 试验材料雄性小鼠四、试验步骤1. 断颈处死雄性小鼠.2. 翻开腹腔,剪取附睾尾尽可能除去脂肪,将每个附睾尾放入已在 37、5%CO2 培育箱预平衡 2h 的 2ml IVF 液加 30mg/ml BSA中.3. 将附
17、睾尾剪成几段,用镊子轻轻挤压之,使精子挤入培育液中,去掉附睾尾.4. 吸打均匀后,1800 r/min 离心 5min,弃上清,以 2ml IVF 液重悬.5. 将精子在 37、5%CO2 培育箱中培育 1.5h,使之获能.6. 镜检,观看获能精子的运动. 五、试验作业观看比较精子在获能前后运动形态和速度的变化.试验六植物组织培育一、试验目的了解植物细胞全能性. 二、试验原理生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,都有发育成完整个体所必需的全部基因.三、试剂与材料1. 试验试剂MS 培育基、无菌水,升汞、酒精、次氯酸2. 试验材料银杏枝叶四、试验步骤一 培育基的配制 1.母液配制
18、 母液分大量元素、微量元素、铁盐与有机物质四 类. 2.培育基的配制与分装 3.培育基的灭菌 取材、消毒与接种1先将剪下的枝条清洗干净,选择颖的花柄、嫩梢和带腋芽的茎段作为外植体,将外植体放在自来水下冲洗 12h,以冲洗掉大的土壤颗粒.2将清洗干净的外植体移入无菌操作台进展消毒,先用 75%酒精外表消毒30S,再用 0.1%洁尔灭处理 15min.消毒后用无菌水冲洗 45 次.3将消毒后的外植体放入消毒过的培育皿上,在无菌条件下切成 0.40.5 cm 长的小段单芽,用无菌滤纸吸干水,马上接种到加有不同激素浓度的MS 培育基上,每个培育基接种三个芽,并用封口膜封好. 外植体的培育接种后的外植体
19、放入用 75%酒精消毒后的干净的光照培育箱中,培育条件为：温度 27,光照周期为光照 12h/d+黑暗 12h/d,培育基的pH 值为,进展培育与愈伤组织的诱导.全部接种工作都是在严格无菌条件下进展的 , 所以要特别认真、认真、以防杂菌污染.两周后观看愈伤组织的诱导并进展生根生芽诱导五、试验作业1. 观看植物组织培育的培育物在培育中的生长状况.2. 观看植物组织培育的培育物有无污染,分析缘由？3. 以MS 为例,试说明MS 培育基中各成分各有何作用.试验七植物生长调整剂对果实发育的影响一、试验目的1. 了解 2,4-D、萘乙酸对无籽果实形成的诱导作用.2. 了解乙烯对果实的催熟作用. 二、试验
20、原理植物生长调整剂 2,4-D、萘乙酸NAA等,在适当的浓度下能诱导无籽果实形成.适当浓度的乙烯利能促进果实成熟.三、试剂与材料1. 试验试剂20mg/L2,4-D用少许 1 mmol/L NaOH 溶解 2,4-D,再用蒸馏水定容,500mg/L NAA用热水或少量 95%乙醇溶解NAA,再用蒸馏水定容,40%乙烯利2. 试验材料盆栽番茄、辣椒幼苗,香蕉或大蕉、柿子、芒果等四、试验步骤1. 无籽果实的诱导形成12,4-D 诱导无籽果实在番茄开花授粉前用 2-3 滴 20mg/L 2,4-D 溶液涂在花上,以水处理作比照.果实成熟时, 观看果实内籽粒的有无.2NAA 诱导无籽果实在辣椒开花初期,用 2-3 滴 500mg/L NAA 溶液滴在花朵上或喷花,以水处理作比照. 果实成熟时,检查是否有籽.2. 乙烯利对果实的催熟作用将采收后的香蕉或大蕉、柿子、芒果等用500mg/L 乙烯利溶液浸泡 5s,以蒸馏水浸泡作比照,取出果实分别放在箩筐或纸箱内,室温保存.5-10d 之内,观看结果.比较果皮的颜色和果实的成熟度五、须知事项1. 用植物生长调整剂处理材料的时期肯定要把握好.2. 可尝试使用不同的激素浓度,筛选出激素的最适作用浓度. 六、试验作业拍照记录试验结果包括比照并进展分析.