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1、2781某研究小组从牛的瘤胃中采集样本，进行分解尿素的微生物的分离与计数。实验基本步骤如下：（1）分解尿素的微生物含有，因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成使培养基的碱性增强。（2）配制培养基时，需添加琼脂，琼脂起作用；培养基中添加作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。（3）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是灭菌。A高压蒸汽 B干热 C添加抗生素 D过滤 E紫外线照射 F.70%酒精浸泡（4）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后将 1mL 瘤胃样液稀释 1000 倍，在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1mL 稀释液；经适当培养
2、后，3个平板的菌落数分别为 49、47 和 45据此可得出每升瘤胃样液中分解尿素的微生物活菌数为，理论上，统计的菌落数往往（低、等、高）于接种的实际活菌数目。2临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性回答下列问题：（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用法或法将样本借种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得（2）取该单菌落适当稀释，用法接种于固体培养基表面，在 37培养箱中培养 24h，使其均匀生长，布满平板（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有 A，B，C，D 四种抗生素的
3、滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含 A 的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A；含 B 的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素 B；含 C 的滤纸片周围的透明圈比含 A 的小，说明；含 D 的滤纸片周围的透明圈也比含 A 的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素 D 的第二十三练生物技术实践2024名优专供高三生物培优专题练习册（24练）第23练 生物技术实践279（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素3人们的日常生活与传统发酵技术密不可分。在葡萄成熟的季节里，有很多家庭开始酿制葡萄酒，甚至是葡萄醋。回答
4、下列问题：（1）葡萄酒的制作离不开微生物的作用，该过程常用的微生物是，其细胞呼吸类型是。（2）在葡萄酒制作的过程中，要将温度严格控制在。若要随时了解不同发酵时期发酵液中的活菌数，则可选择法进行计数，其计数原则一般选择菌落数在个的平板计数。（3）若盛放果酒的瓶口封闭不严，则放置一段时间后，会发现果酒带有明显的酸味，使果酒变酸的主要微生物是。若用于发酵的葡萄汁中混有该微生物，则在果酒发酵旺盛时期，该微生物（填“能”或“不能”）将果汁中的糖发酵形成酸，其原因是。4尿素是一种重要的氮肥，农作物不能将其直接吸收利用，而是通过土壤中的细菌将其分解为氨和 CO2后才能被农作物利用。请回答下列问题：（1）土壤
5、中的某些细菌能分解尿素是因为该种细菌能合成。（2）为筛选尿素分解菌而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外，还包括水、碳源等，该培养基能筛选出目的菌株的原因是。（3）般依据尿素分解菌菌落的、隆起程度和颜色等特征来统计菌落数目。现将 10mL 尿素分解菌悬液进行梯度稀释，分别取 0.1mL 稀释倍数为 106的样液接种到 3 个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为 39、42、45，则 1mL 悬液中活细菌数量为个。上述过程采用的接种方法是。（4）为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是。5柑橘营养丰富，其维生素 C 含量比苹果、梨多几倍，具有很高的经济价值请回答下列问题：（1）如果
6、用柑橘果肉来发酵生产果酒，需接种的菌种是酵母菌，其最适合繁殖的温度为左右若从混杂的微生物中分离酵母菌应使用培养基通常选用的接种方法有平板划线法和（2）柑橘果酒制作是否成功，需发酵后用来鉴定，在酸性条件下，该物质与酒精反应呈现色（3）提取橘皮精油，常采用法而不用蒸馏法，原因是为提高出油率，需要将橘皮，并用石灰水浸泡（4）橘皮中含有丰富的胡萝卜素，从橘皮中提取胡萝卜素时，由于胡萝卜素，可以用萃取的方法提取，萃取的效率主要取决于6人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值为了增强发酵效280果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究请回答下
7、列问题：（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是（填序号）酒精灯培养皿显微镜无菌水（2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是（3）向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是（4）刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应研究人员在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落（见图 1）图中降解圈大小与纤维素酶的有关图中降解纤维素能力最强的菌株是（填图中序号）（5）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株 J1 和 J4，在不同温度和 pH 条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图 2
8、 推测菌株更适合用于人工瘤胃发酵，理由是7氨基丁酸（GABA）是具有降血压、抗焦虑等功能的水溶性氨基酸。科研人员通过实验研究了白方腐乳在前发酵、盐腌和后发酵过程中 GABA 的含量变化，为寻找生产富含 GABA 腐乳的工艺奠定基础。实验步骤如下：豆腐白坯表面接种毛霉孢子后，在适宜的温度和湿度下培养 48h，获得毛坯。将毛坯分层整齐地摆放在瓶中，盐腌 5d。腌制后加入卤汤，置于 28恒温箱中后发酵 90d。分别采集各时段的腐乳坯样品，测定 GABA 含量，结果如下。请分析回答：（1）通常含水量为左右的豆腐适合做腐乳；毛霉生长的适宜温度为。（2）前发酵过程中，毛坯的 GABA 含量发生明显变化的原
9、因是。281（3）步骤中，加盐腌制的正确方法是。此过程腐乳干重中的 GABA 含量下降，一方面与食盐抑制毛霉生长，酶活性降低有关；另一方面部分 GABA 会而导致测定值减小。（4）后发酵过程中，GABA 含量再次增加的原因是，后发酵d 后的白方腐乳出厂销售比较适宜。8将没有吃完的西瓜，盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。（1）该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基一般都含有水、碳源、和。一般采用法对培养基进行灭菌
10、。（2）为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板（填“正置”或“倒置”）。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用法接种。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。（3）在培养 20 小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有（填“一种”或“多种”）细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越（填“高”或“低”）。9杨梅是浙江省的特色水果之一，为对其进行深加工，某厂进行了杨梅酒和杨梅醋的研制，基本工艺流程如图 1：请回答：（1）在制备杨梅酒过程中，为了提高杨梅的出汁率，在压榨前可加入一定浓度的纤维素酶和酶。甲罐顶上弯管中加水的主要目的是。发酵一定时间后
11、，观察到发酵罐内液面不再有，说明发酵基本完毕。（2）在制备杨梅醋过程中，乙罐内先填充经处理的木材刨花，然后加入含菌的培养液，使该菌在刨花上，再让甲罐中发酵完毕的杨梅酒流入乙罐进行杨梅醋发酵，杨梅醋的 pH 可通282过控制杨梅酒的来调节。（3）若甲罐中的杨梅酒全部流经乙罐制成杨梅醋，则乙罐中 CO2的产生量是。A甲罐的两倍B与甲罐的相等C甲罐的一半D几乎为零（4）在杨梅酒和杨梅醋发酵的整个过程中，某物质浓度随时间变化的趋势如图 2 所示，该物质是。10银杏酒以高粱和银杏叶为主要原料制作而成，适宜中老年人群饮用。请回答：（1）在酿制银杏酒的开始时一般要先通气，其目的是。（2）在酿制时，不需要对高
12、粱、银杏叶等进行严格的消毒处理也能抑制杂菌生长，这是因为在。（3）制作成功的银杏酒（低度）若暴露在空气中酒味会逐渐消失而出现醋酸味，尤其是气温高的夏天更易如此，分析其原因是。写出该过程发生的反应式。（4）银杏叶中的银杏黄酮常采用萃取法提取，萃取前对银杏叶进行干燥时，要求温度，时间，而萃取时则要求温度，时间。采取以上措施的原因是。11科研人员开展海藻酸钠固定化乳酸菌的相关研究，得到如下实验结果。请回答下列问题：表：海藻睃钠浓度对乳酸发酵的影响海藻酸钠浓度/%成珠状況01.0成珠较易，但强度较低1.5成珠容易，强度适中2.0成珠较难，强度较髙2.5成珠困难，强度高（1）本研究中固定化细胞的技术属于
13、法，其优点是。（2）实验中需要先将溶化的海藻酸钠溶液冷却至后，才能加入乳酸菌。为保证配制的海藻酸钠浓度准确，在海藻酸钠完全溶化后需要。（3）根据实验结果，研究人员认为海藻酸钠浓度以 1.5%为宜，这是因为用较低浓度的海藻酸钠固定时，凝胶珠内部网格较大，有利于，乳酸发酵速度快。而与浓度为 1.0%比较，1.5%时形成的凝胶珠，有利于凝胶珠的重复利用。（4）利用固定化乳酸菌发酵时，凝胶珠添加量过髙会抑制菌株生长，进而使乳酸产量下降。试写出探究凝胶珠适宜添加量的实验思路。12图 1 为某同学设计的用于制作果酒和果醋的发酵装置。图 2 为某研究小组的同学在对杨梅酒和杨梅醋283的生产工艺进行考察后，绘
14、制出的基本工艺流程图。请据图回答：（1）图示发酵过程中所需的酵母菌可以从自然界中分离出来，要得到较纯菌种，应配制培养基（按培养基的功能分），常采用法对培养基进行灭菌。然后用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种。（2）用图 1 装置制作果酒过程中，要关闭（“充气”或“排气”）管上的夹子。（3）用图 1 装置制作果酒过程中，因某一步骤操作失误导致发酵瓶瓶塞被冲开，该操作失误是。对该装置进行的改进是。（4）图 2 中甲罐顶上的排气管被设计成了弯曲状的管，其目的是。发酵一定时间后，观察到发酵罐内液面不再有产生，说明发酵基本完毕。（5）在制备杨梅醋过程中，乙罐内先填充经灭菌处理的木材刨花，然后加入含菌的培
15、养液，使该菌附着在刨花上，再让甲罐中发酵完毕的杨梅酒流入乙罐进行杨梅醋发酵。13我国科学家屠呦呦因从事抗疟疾药物青蒿素的研究荣获 2015 年诺贝尔生理学和医学奖。青蒿素是从黄花蒿（植物）中分离出的化合物，具有速效和低毒的特点，是疟疾治疗特效药。但青蒿素在 60以上会被破坏，给提取造成了一定的困难。青蒿中的药用成分含有挥发性强的青蒿精油和非挥发性 2个部分。（1）鉴于青蒿精油具有强挥发性，可以采取法提取之，使用该方法形成油水混合物后，向其中加入，就会出现明显的油层与水层。分离出油层，一般可加入一些，以吸收流程中的水分。（2）使用上述（1）的提取方法会存在影响青蒿精油的产量等多种因素。下表是青蒿
16、精油出油率与蒸馏时间的变化关系，一般蒸馏时间最好控制在小时。蒸馏时间（小时）012345出油率（%）000.0630.1210.1330.133（3）若非挥发成分用萃取法提取，则可知该成分（易、难）溶于有机溶剂，难溶于水。萃取的284效率主要取决于，同时还受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响。已知石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯和四氯化碳的沸点分别为 90120、77、35、80和76，仅从浓缩角度考虑，选择试剂用于萃取最佳。14豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的 A、B 两桶煮熟大豆中并混匀，再将
17、两者置于适宜条件下进行发酵，并在 32h 内定期取样观测发酵效果。回答下列问题：（1）该实验的自变量是、。（2）如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是微生物。（3）如果在实验后，发现 32h 内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，可在原操作的基础上，继续（填具体操作），最好的发酵效果所对应的时间即为最佳的发酵时间。（4）从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质被转化为，脂肪被转化为。15宣木瓜为蔷薇科落叶灌木植物贴梗海棠的成熟果实，以安徽宣城所产最为著名，距今已有二千多年的栽培历史。宣木瓜中含有
18、十九种氨基酸、十八种矿物微量元素，以及大量维生素 C，有舒筋活络、祛风湿痹等功效。近年来利用宣木瓜果实加工果酒、果醋等保健品和美容化妆品。如图是某同学制备宣木瓜酒的简易装置图。请回答下列问题：（1）制备果酒时阀 a 和阀 b 的开闭情况为。装置的温度控制在。宣木瓜酒呈淡黄色，是因为随酒精度数的提高，进入发酵液。（2）为提高果酒的品质，可以直接在木瓜汁中加入人工培养的酵母菌，为了培养和分离出酵母菌，淘汰细菌和放线菌，培养基要用。A较多的氮源物质B较多的碳源物质C青霉素类似物D高浓度食盐（3）若是制备果醋，除接种醋酸菌外，还应对上述装置作何处理？。（4）若是从宣木瓜中提取类胡萝卜素，一般采用法。为
19、提高提取效果在操作前先要将宣木瓜进行。28516如图为某同学设计的酿制苹果醋的基本流程和发酵装置示意图。回答下列问题：（1）过程需要先清洗后切块，以减少。过程发酵所需的微生物是，产生的酒精可以与（试剂）发生显色反应。（2）过程为醋酸发酵，在变酸的酒表面观察到的菌膜是在液面大量繁殖而形成的。若要对该菌进行初步分离纯化，比较便捷的操作是采用（“平板划线”或“稀释涂布平板”）法将它们接种到（填“固体”或“液体”）培养基上，依据菌落特征进行分离。（3）过程需要将发酵装置中的充气口开关。果醋的制作是否成功，除了通过观察菌膜的形成、嗅味和品尝进行初步鉴定外，还可以通过检测和比较进一步鉴定。17圆褐固氮菌是
20、生活在土壤中的一种可通过分解腐殖质获得能量的固氮微生物，能将大气中的 N2转化为氮，从而增加土壤肥力。现在要从土壤中选择具有固氮能力的圆褐固氮菌。请回答下列问题：（1）培养圆褐固氮菌的固体培养基应含有（营养物质），并需加入。（2）对培养圆褐固氮菌的培养基，进行高压蒸汽灭菌的目的是杀死物体内外的所有微生物，包括；无菌技术除了防止实验室的培养物被外来微生物污染外，还有的目的。（3）能在该培养基上生长的是的微生物，可根据菌落的（至少答出两项）鉴別出圆褐固氮菌。若要统计样品中圆褐固氮菌的数目，通常采用法接种。测定土壤中微生物的数量，细菌一般选用 104、105、106倍的稀释液，测定真菌数量一般选用
21、102、103、104倍的稀释液，原因是。18生物柴油是用动物植物油脂或脂肪酸与甲醇酯化合成的脂肪酸甲酯，是一种可再生的清洁能源。请回答下列相关问题：（1）生物柴油产业推广的难点之一在于动植物油脂原料成本较高，所以科研人员将寻找原材料的目光投向了富含脂肪酸的微藻，以下是从微藻中提取脂肪酸的简要流程：因脂肪酸具有的性质，故选用有机溶剂萃取法进行提取。溶剂浸提之前需将材料混干的原因是。（2）传统生产生物柴油是用酸或碱进行催化，会对环境造成污染。科研人员欲分离筛选能产生催化该反应的脂肪合成酶的微生物，用生物酶法生产生物柴油。286自然界中产脂肪合成酶的微生物较少，应在的环境取土样，在将样品稀释涂布到
22、固体培养基上分离纯化前可先进行选择（富集）培养以达到的目的。由于反应物甲醇可以使蛋白质变性而影响催化效率，要得到酶活性较高的菌种，可以在培养基中添加一定浓度的，从培养基的用途看，这属于培养基。分离纯化的菌种还要发酵培养检测以确定其经济价值。19“贵州茅台”被誉为我国的国酒，虽然工艺并不复杂，但是大家公认其独特品质的关键是当地的独特气候、水质、以及当地空气或环境中存在独特的微生物。为了提取当地环境中的独特菌种，某研究小组以优质高粱、上等小麦为原料，制作培养基，搜集、分离空气中的微生物。回答下列问题：（1）该培养基按成分分类，属于培养基，培养基在接种微生物前，必须先进行（灭菌方式）。（2）将上述培
23、养基暴露在空气中培养一段时间后，取 10g 该培养基，用无菌水制成 100mL 样品溶液，再将样品溶液稀释 104倍后，各取样品溶液 0.1mL 在 5 个细菌培养基平板上接种，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为 13、156、462、178 和 191该过程采取的接种方法是，每克培养基样品中的细菌数量为108个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较实际值，原因是。（3）生产酒的主要微生物是酵母菌，其代谢类型是，其产物乙醇与试剂反应呈现灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验。20山鸡椒是一种在南方分布广泛的野生芳香植物，山鸡椒油具有较好的抑菌作用。请回答：（1）植物芳香油的组成成
24、分主要包括。（2）一般采用水气蒸馏法来提取山鸡椒油，原因是；常选取山鸡椒的新鲜果实和叶片作为提取材料，原因是。提取过程中使用无水硫酸钠，其作用是。（3）为研究山鸡椒油对细菌、真菌的抑制作用，及热处理对山鸡椒油作用的影响，进行了相关实验研究，结果如表。供试菌种抑菌圈直径（mm）常温 60 80 100大肠杆菌23.75 21.75 23.50 23.15金黄色葡萄球菌 15.60 16.00 16.15 16.60枯草芽孢杆菌19.25 18.80 19.20 19.50黄曲霉42.15 41.75 41.50 41.25287根霉39.50 38.90 39.60 39.40酵母菌39.15
25、38.80 38.70 38.60本实验的自变量是。本实验得到的结论有。（4）若对实验所用样品中的酵母菌含量进行测定，可将 1mL 样液稀释 100 倍，在 3 个平板上分别接入0.1mL 稀释液并均匀涂布，经适当培养后平板上的菌落数分别是 32、34、36据此可得出每升样品中的活菌数为；实验中采用的接种方法是。3711【分析】1、接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞。微生物的营养物质有 5 类，分别是水、无机盐、碳源、氮源及生长因子。2、由于细菌分解在尿素的过程中合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，会使培养基碱性增强，PH 升高，所以可以用检
26、测 pH 的变化的方法来判断尿素是否被分解，可在培养基中加入酚红指示剂，尿素被分解后产生氨，PH 升高，指示剂变红。3、实验室常用的灭菌方法：灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为 100 kPa，温度为 121的条件下，维持 1530 min。
27、【解答】解：（1）分解尿素的微生物含有脲酶（分解尿素的酶），因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成氨（NH3）使培养基的碱性增强。（2）配制培养基时，需添加琼脂，琼脂起凝固剂作用；培养基中添加酚红作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。（3）由于尿素在高温下会分解，所以对尿素溶液的灭菌要采用 G6 玻璃漏斗过滤的方法。（4）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格；然后将 1mL 瘤胃样液稀释 1000 倍，在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1mL 稀释液；经适当培养后，3 个平板的菌落数分别为 49、47 和
28、 45因此据此可得出每升瘤胃样液中分解尿素的（1L1000mL）中的活菌数10001010004.7108由于每个菌落可能是一个或多个活菌增殖而来，统计的菌落数往往低于接种的实际活菌数目。故答案为：第二十三练生物技术实践372（1）脲酶（分解尿素的酶）氨（NH3）（2）凝固剂酚红（3）D（4）检测培养基平板灭菌是否合格4.7108低【点评】本题主要考查微生物的培养、分解尿素的细菌的鉴定等知识点，明确相关的知识点，正确的解答相关的试题。2【分析】（1）接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群体菌落（2
29、）根据材料分析，透明圈的出现，说明该菌不能生长【解答】解：（1）分离菌落常用稀释涂布平板法或划线涂布法（2）取该单菌落适当稀释，使其“均匀生长”的方法是用涂布法接种于固体培养基表面，适宜温度培养（3）在抗药性检验过程中，如果在菌落周围出现透明的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌；透明圈的大小表示着此种抗生素抗菌的强弱据此可判断抗菌强弱依次是 A、C、B；D 的透明圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性（4）根据（3）的分析，实验结果抗生素 A 对该致病菌的作用最好故答案为：（1）划线稀释涂布（或涂布）（2）涂布（3）敏感不敏感该致病菌对 C 的敏感性比对 A 弱耐药菌（4）A【点评
30、】本题的知识点是微生物培养过程中的接种方法，以及分析实验结果获取结论的能力和，利用所学的微生物知识解决生活问题的能力，解决问题的关键是运用所学过的知识点“透明圈”，进行知识点的迁移、类比，然后解决问题3【分析】果酒和果醋制作过程中的相关实验操作：（1）材料的选择与处理：选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗，除去枝梗。（2）灭菌：榨汁机要清洗干净，并晾干。发酵装置要清洗干净，并用 70%的酒精消毒。（3）榨汁：将冲洗除枝梗的葡萄放入榨汁机榨取葡萄汁。（4）发酵：将葡萄汁装人发酵瓶，要留要大约的空间，并封闭充气口。制葡萄酒的过程中，将温度严格控制在 1825，时间控制在 1012d 左右，可通过
31、出料口对发酵的情况进行。及时的监373测。制葡萄醋的过程中，将温度严格控制在 3035，时间控制在前 78d 左右，并注意适时通过充气口充气。【解答】解：（1）参与果酒制作的微生物是酵母菌，其细胞呼吸类型是兼性厌氧型。（2）果酒制作的适宜温度是 1825接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可用于微生物计数，其计数原则一般选择菌落数在 30300 个的平板计数。（3）若盛放果酒的瓶口封闭不严，则放置一段时间后，会发现果酒带有明显的酸味，使果酒变酸的主要微生物是醋酸菌。在果酒发酵旺盛时期，醋酸菌不能将果汁中的糖发酵形成酸，其原因是醋酸菌是嗜氧菌，而果酒发酵时的缺氧环境会抑制
32、醋酸菌的生长（或果酒发酵时的缺氧环境能引起醋酸菌死亡）。故答案为：（1）酵母菌兼性厌氧型（2）1825稀释涂布平板30300（3）醋酸菌不能果酒发酵时的缺氧环境能抑制醋酸菌生长（或果酒发酵时的缺氧环境能引起醋酸菌死亡）【点评】本题考查果酒和果醋的制作，要求考生识记参与果酒和果醋制作的微生物及其代谢类型，掌握果酒和果醋制作的原理、条件等知识，能结合所学的知识准确答题。4【分析】计算微生物的方法：检测土壤中细菌总数，可以看出采用的计数方法是稀释涂布平板法进行计数。用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布 3 个平板，选择菌落数在 30300 的进行记数，求其平均
33、值，再通过计算得出土壤中细菌总数。【解答】解：（1）分解尿素的细菌中含有脲酶，能将尿素分解。（2）微生物的培养基中需含有水、无机盐、碳源和氮源，尿素作为氮源。因为只有含有脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源生长，因此该培养基能筛选出分解尿素的细菌。（3）一个菌落为一个细菌繁殖的后代，不同的微生物的菌落不同，菌落的特征包括形状、大小、隆起程度，据此来统计菌落的数目。微生物计数的方法采用稀释涂布平板法接种，1m 悬液中细菌的数目为（39+42+45）30.11064.2108个。（4）单独设置一个灭菌后不接种样液的含培养基的培养皿进行培养，观察该培养基上是否出现菌落，从而判断灭菌是否合格。故答案为：（1
34、）脲酶（2）无机盐只有以尿素作为唯一氮源的细菌才能在该培养基上生长374（3）形态、大小4.2108稀释涂布平板法（4）单独设置一个灭菌后不接种样液的培养皿（含培养基）进行培养【点评】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的成分、菌落的特征、尿素分解菌的筛选原理、微生物计数的方法，属于考纲识记和理解层次的考查。5【分析】1、微生物常见的接种的方法：平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可
35、形成单个菌落2、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型果酒制作的原理：（1）在有氧条件下，反应式如下：C6H12O6+6H2O+6O26CO2+12H2O+能量；（2）在无氧条件下，反应式如下：C6H12O62CO2+2C2H5OH+能量3、胡萝卜素的性质：胡萝卜素是橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂【解答】解：（1）酵母菌繁殖的适宜温度是 1825，因此酵母菌繁殖的最适温度为 20左右从混杂的微生物中分离酵母菌应使用选择培养基接种微生物常用稀释涂布平板法和平板划线法（2）酒精可用酸性重铬酸钾溶液鉴定，溶液的颜色由橙色变成灰绿色（3
36、）水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解，因此提取橘皮精油时，常采用压榨法而不用蒸馏法 为提高出油率，需要将橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡（4）胡萝卜素易溶于有机溶剂，所以可以用萃取的方法提取胡萝卜素；萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和使用量故答案为：（1）20选择稀释涂布平板法（2）重铬酸钾灰绿（3）压榨水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解干燥去水（4）易溶于有机溶剂萃取剂的性质和使用量【点评】本题考查果酒和果醋的制作、提取芳香油、微生物的分离和培养，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的方法、实验现象及结论等，需要考生在平时的学习过程中注意积累3756【分析】1、微生物
37、培养的关键是无菌操作，无菌技术包括消毒和灭菌消毒灭菌概念使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌适用对象操作空间、某些液体、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等2、微生物培养过程中除考虑营养条件外，还要考虑 pH、温度和渗透压等条件，需对培养基和培养皿进行消毒3、微生物常见的接种的方法平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线
38、的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落4、可以通过稀释涂布平板法或显微镜计数法进行统计计数5、刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌【解答】解：（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，需要使用酒精灯对接种环进行灭菌，对培养皿进行灭菌，用无菌水稀释菌液，故选（2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量过多会在培养基表面出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果，所以不能过多（3）分装含琼脂的培养
39、基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净以防杂菌污染（4）在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落，降解圈大小与纤维素酶的多少和活性有关纤维素酶的量越多，活性越强，分解的纤维素越多，透明降解圈越大，所以图中降解纤维素能力最强的菌株是（5）由于胃部 PH 值较低，根据题意和图示分析可知，发酵过程会产热和产酸，J4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高，所以推测菌株 J4 更适合用于人工瘤胃发酵376故答案为：（1）（2）培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果（3）防止杂菌污染（4）量与活性（5）J4发酵过程会产热和产酸，J4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高
40、【点评】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记无菌技术，掌握接种微生物常用的两种方法，能结合题中和图中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查7【分析】腐乳的制作过程主要是：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制。1、让豆腐上长出毛霉：将豆腐块平放在笼屉内，将笼屉中的温度控制在 1518，并保持在一定的湿度。约 48h 后，毛霉开始生长，3d 之后菌丝生长旺盛，5d 后豆腐块表面布满菌丝。豆腐块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子。2、加盐腌制：将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中，同时逐层加盐，随着层数的加高而增高盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些。加盐研制的时间约为 8d 左右。加盐可
41、以析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，在后期的制作过程中不会过早酥烂。同时，盐能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质。3、加卤汤装瓶：卤汤直接关系到腐乳的色、香、味。卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的。卤汤中的酒可以选用料酒、黄酒、米酒、高粱酒等，含量一般控制在 12%左右。加酒可以抑制微生物的生长，同时能使腐乳具有独特的香味。香辛料种类很多，如胡椒、花椒、八角、桂皮、姜、辣椒等。香辛料可以调制腐乳的风味，也具有防腐杀菌的作用。可据个人口味配置卤汤。4、密封腌制。【解答】解：（1）做腐乳所用豆腐的含水量为 70%左右，水分过多则腐乳不易成形，且容易腐败变质；制作腐乳时主要的微生物是毛霉，毛霉生长的适
42、宜温度为 1518。（2）据图中曲线可知，前发酵过程中，毛坯的 GABA 含量明显升高，其发生明显变化的原因是毛霉产生的蛋白酶促进蛋白质水解产生 GABA。（3）将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中，同时逐层加盐，随着层数的加高而增高盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些，盐能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质。此过程腐乳干重中的 GABA含量下降，一方面与食盐抑制毛霉生长，酶活性降低有关；另一方面部分 GABA 会溶解于水而导致测定值减小。（4）后发酵过程中，GABA 含量再次增加的原因是毛霉产生的蛋白酶继续发挥作用，后发酵 60d 后的白方腐乳出厂销售比较适宜。377故答案为：（1）70%1
43、518（2）毛霉产生的蛋白酶促进蛋白质水解产生 GABA（3）逐层加盐，随着层数的加高增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些溶解于水（不存在于腐乳块中）（4）毛霉产生的蛋白酶继续发挥作用60【点评】本题考查腐乳的制作，要求考生识记腐乳制作的原理、过程及各步骤中需要注意的细节问题，掌握腐乳制作的原理，能结合所学的知识准确答题，试题难度适中。8【分析】1、培养基的成分主要包括水、无机盐、碳源、氮源，培养微生物时还需要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。2、微生物常见的接种的方法：平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连
44、在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【解答】解：（1）培养基的成分一般包括水、碳源氮源和无机盐。一般采用高压蒸汽灭菌方法对培养基进行灭菌。（2）培养过程中，为了避免培养基被冷凝水污染，需要将平板倒置。将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落，因此为了确定浸出液中细菌的种类和数量，一般采用稀释涂布法接种。为了避免杂菌污染，接种时应该在酒精灯火焰附近进行。（3）在培养 20 小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有多种细菌。
45、细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越高。故答案为：（1）氮源无机盐高压蒸汽灭菌（2）倒置稀释涂布酒精灯火焰（3）多种高【点评】本题考查了微生物分离与培养的有关知识，要求考生能够识记培养基的概念、成分，识记灭菌和消毒的概念、方法以及两者之间的区别，再结合所学知识准确答题。9【分析】分析图 1：图 1 是某厂进行果酒和果醋生产的基本工艺流程，甲罐进行的是酒精发酵，参与该过程的微生物主要是酵母菌；乙罐进行的是果醋发酵，参与该过程的微生物主要是醋酸菌。378分析图 2：图 2 表示在杨梅酒和杨梅醋发酵的整个过程中，某物质浓度随时间变化的示意图。【解答】解：（1）制备杨梅酒时，在压榨前可加入一定浓度
46、的纤维素酶和果胶酶，以破除果肉细胞壁（促进细胞壁中纤维素和果胶的水解），提高杨梅的出汁率。甲罐进行的是酒精发酵，需要在无氧环境中进行，因此甲罐顶上弯管中加水的主要目的是防止空气进入；酒精发酵过程中除了产生酒精，还产生二氧化碳，若发酵一定时间后，观察到甲罐内液面不再有气泡冒出，则说明发酵基本完毕。（2）参与果醋发酵的微生物是醋酸菌，在制备杨梅醋过程中，乙罐内先填充经灭菌处理的木材刨花，然后加入含醋酸杆菌的培养液，使该菌附着在刨花上，再让甲罐中发酵完毕的杨梅酒流入乙罐进行杨梅醋发酵，杨梅醋的 pH 可通过控制杨梅酒的流速来调节。（3）若甲罐中的杨梅酒全部流经乙罐制成杨梅醋，则乙罐中的反应式为：C2
47、H5OH+O2CH3COOH+H2O，可见乙罐中几乎没有 CO2产生。（4）在杨梅酒发酵过程中，酒精浓度逐渐升高，但以杨梅酒为材料进行杨梅醋发酵的过程中，酒精浓度又逐渐降低，最终被消耗完。因此图 2 表示酒精浓度在杨梅酒和杨梅醋制作的整个过程中的变化。故答案为：（1）果胶防止空气进入气泡冒出（2）灭菌醋酸附着流速（3）D（4）酒精【点评】本题结合发酵装置图，考查果酒和果醋的制作，要求考生识记参与果酒和果醋制作的微生物及其代谢类型，掌握果酒和果醋制作的原理及发酵条件，能结合图中信息准确答题。10【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。果酒制作的原理：（1）在有氧
48、条件下，反应式如下：C6H12O6+6H2O+6O26CO2+12H2O+能量；（2）在无氧条件下，反应式如下：C6H12O62CO2+2C2H5OH+能量。2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。【解答】解：（1）参与果酒制作的微生物是酵母菌，属于兼性厌氧型生物。银杏酒制作过程中应该先通气后密封，先通气的目的是让酵母菌在有氧条件下大量繁殖。（2）由于缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应该环境而受抑制，所以酿制
49、银杏酒时，不需要对高粱、银杏叶等进行严格的消毒处理也能抑制杂菌生长。379（3）由于空气中含有醋酸菌，醋酸菌是好氧细菌，最适生长温度为 3035，所以制作成功的银杏酒若暴露在空气中酒味会逐渐消失而出现醋酸味，尤其是气温高的夏天更易如此。该过程发生的反应式为C2H5OH+O2CH3COOH+H2O。（4）黄酮易溶于有机溶剂乙醇，常采用萃取法提取果肉中的黄酮。由于干燥时温度过高，时间过长，有效成分易分解。萃取时温度高，时间长，有利于充分溶解有效成分，所以萃取前对银杏叶进行干燥时，要求温度低，时间短，而萃取时则要求温度髙，时间长。故答案为：（1）让酵母菌在有氧条件下大量繁殖（2）缺氧呈酸性的发酵液中
50、，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应该环境而受抑制（3）空气中含有醋酸菌，醋酸菌是好氧细菌，最适生长温度为 3035C2H5OH+O2CH3COOH+H2O（4）低短 髙 长干燥时温度过高，时间过长，有效成分易分解。萃取时温度高，时间长，有利于充分溶解有效成分【点评】本题考查果酒和果醋的制作，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的试剂及试剂的作用、实验步骤等，需要考生在平时的学习过程中注意积累。11【分析】采用包埋法制备固定酵母细胞的主要步骤：酵母细胞的活化（利用蒸馏水使干酵母恢复正常生活状态）海藻酸钠、CaCl2溶液的配制（在溶解海藻酸钠溶液的过程中