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1、酶的提取纯化与活力测定酶的提取纯化与活力测定酶的提纯酶的提纯l由细胞内产生后分泌到胞外发挥作用的酶，称为细胞外酶。由细胞内产生后分泌到胞外发挥作用的酶，称为细胞外酶。这类酶大这类酶大部分属于水解酶。此类酶通常含量高部分属于水解酶。此类酶通常含量高，容易得到。，容易得到。l在细胞内合成后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化作用，称为细在细胞内合成后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化作用，称为细胞内酶，该类酶在细胞内胞内酶，该类酶在细胞内往往与细胞器结合往往与细胞器结合，不仅有一定的区域性，不仅有一定的区域性，而且而且催化的反应具有一定顺序性催化的反应具有一定顺序性。（1）了解所分离酶在细胞中分布）
2、了解所分离酶在细胞中分布1.1.酶提取的基本方法酶提取的基本方法（2）材料的获取）材料的获取在在提提取取某某一一酶酶时时，首首先先应应当当根根据据需需要要，选选择择含含此此酶酶最最丰丰富富的的材材料料。由由于于从从动动物物内内脏脏或或植植物物果果实实中中提提取取酶酶制制剂剂受受到到原原料料限限制制，成成本本又又很很大大，因因此此，目目前前工工业业上上大大多多采采用用培培养养微微生生物物的的方方法来获得大量的酶制剂。法来获得大量的酶制剂。（3）酶分离纯化的主要步骤）酶分离纯化的主要步骤 抽提：抽提：破碎细胞，动植物组织一般可用组破碎细胞，动植物组织一般可用组织捣碎机；或者加石英砂研磨，将材料做成
3、丙织捣碎机；或者加石英砂研磨，将材料做成丙酮粉或进行冰冻融解；对细菌，常采用加砂或酮粉或进行冰冻融解；对细菌，常采用加砂或加氧化铝研磨和超声波振荡方法破碎。加氧化铝研磨和超声波振荡方法破碎。大大多多数数酶酶一一般般都都用用缓缓冲冲液液进进行行抽抽提提，缓缓冲冲液液的的类类型型决决定定于于酶酶的的种种类类和和理理化化特特性性，抽抽提提液液pH最最好好远远离离等等电电点点。温温度度一一般般控控制制在在1-4。l浓缩：浓缩：抽提液或发酵液中酶浓度往往很低，抽提液或发酵液中酶浓度往往很低，必须浓缩富集。常用的浓缩方法有：加中必须浓缩富集。常用的浓缩方法有：加中性盐或冷乙醇沉淀后再溶解，聚乙二醇浓性盐或
4、冷乙醇沉淀后再溶解，聚乙二醇浓缩、凝胶过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。缩、凝胶过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。l纯化：纯化：要提高酶的纯度，另一方面却也使酶的总量不可避免有所损失。要提高酶的纯度，另一方面却也使酶的总量不可避免有所损失。l结晶：结晶：浓缩液经过各种方法的纯化，可得到较纯的结晶产品。浓缩液经过各种方法的纯化，可得到较纯的结晶产品。酶分离纯化的相关指标酶分离纯化的相关指标 酶酶活活力力就就是是酶酶促促反反应应的的能能力力。酶酶活活力力大大小小就就是是指指在在一一定定条条件件所所催催化化的的某某一一化化学学反反应应速速率率的的快快慢慢，即即酶酶催催化化的的反反应应速速率率越越快快，酶酶活活力
5、力越越高，反之则表示该酶活力低。高，反之则表示该酶活力低。酶酶酶酶酶酶的的的的的的定定定定定定量量量量量量就就就就就就是是是是是是测测测测测测定定定定定定酶酶酶酶酶酶的的的的的的活活活活活活力力力力力力，也也也也也也即即即即即即测测测测测测定酶促反应的速率。定酶促反应的速率。定酶促反应的速率。定酶促反应的速率。定酶促反应的速率。定酶促反应的速率。酶活力及其测定酶活力及其测定 国际单位国际单位 (IU)(IU)在在标标准准条条件件（25、最最适适pH、最最适适底底物物浓浓度度）下下，1min内内催催化化1mol底物转化所需的酶量定义为底物转化所需的酶量定义为1个国际单位个国际单位(IU)。酶活力
6、单位酶活力单位 （2 2）KatalKatal在在最最适适条条件件下下，每每秒秒钟钟催催化化1mol底底物物转转化化所所需需酶酶的的量量定定义义为为1个个Kat。1 Kat=6101 Kat=6107 7 IU IU 自定义的活力单位自定义的活力单位这这种种单单位位简简单单方方便便，省省去去了了许许多多计计算算；但但只只能能进行酶活力的相对比较进行酶活力的相对比较。酶习惯上或测定时使用酶习惯上或测定时使用反应速度的单位反应速度的单位定义为酶的活力单位。定义为酶的活力单位。有有的的甚甚至至直直接接用用测测得得的的物物理理量量，如如单单位位时时间间内内吸吸光光值值的的变变化化 (DA/t)表示酶活
7、力单位。表示酶活力单位。比活力是酶制剂纯度的常用指标比活力是酶制剂纯度的常用指标比活力越大，表示酶越纯比活力越大，表示酶越纯指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数比活力比活力 酶活力单位数（酶活力单位数（U U）酶蛋白质量（酶蛋白质量（mgmg）酶的比活力酶的比活力 纯化倍数纯化倍数纯化倍数纯化倍数=每次比活力每次比活力每次比活力每次比活力/第一次比活力第一次比活力第一次比活力第一次比活力产率产率产率产率(回收率回收率回收率回收率%)%)=每次总活力每次总活力每次总活力每次总活力/第一次总活力第一次总活力第一次总活力第一次总活力 100100酶的纯度酶的纯度