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1、高效液相色谱仪第一节第一节高效液相色谱仪高效液相色谱仪主要部件主要部件2023/12/262023/12/262023/12/261.高压泵高压泵要求：耐腐蚀、压力平稳、流量稳定可调要求：耐腐蚀、压力平稳、流量稳定可调一、输液系统一、输液系统2023/12/262023/12/26（1）等度洗脱）等度洗脱：以固定配比的流以固定配比的流以固定配比的流以固定配比的流动动动动相洗脱相洗脱相洗脱相洗脱组组组组分，分，分，分，类类似似GC的的等温度洗脱等温度洗脱。特点特点：仅需仅需仅需仅需一台泵一台泵一台泵一台泵。缺点：缺点：缺点：缺点：对于对于对于对于极性差别较大的复杂组分极性差别较大的复杂组分极性差
2、别较大的复杂组分极性差别较大的复杂组分很难实现分离很难实现分离很难实现分离很难实现分离2023/12/262.梯度洗脱装置梯度洗脱装置2023/12/26低压梯度洗脱低压梯度洗脱通过比例调节阀，将两通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶种或多种不同极性的溶剂按一定的比例先混合剂按一定的比例先混合后，再用高压输液泵压后，再用高压输液泵压入色谱柱系统入色谱柱系统特点特点：需需需需一台泵一台泵一台泵一台泵。（2）梯度洗脱梯度洗脱按一定程序改变配比按一定程序改变配比2023/12/262023/12/26高压梯度洗脱：高压梯度洗脱：两种或多两种或多种流动相分别用泵加压后，种流动相分别用泵加压后，按一
3、定比例混合，再输入色按一定比例混合，再输入色谱柱系统谱柱系统特点特点：需需需需两台或多台泵两台或多台泵两台或多台泵两台或多台泵。2023/12/262023/12/26二、二、进样系统进样系统 可可分为自动改进样阀和手动进样阀，其中手动进样阀最分为自动改进样阀和手动进样阀，其中手动进样阀最常的是常的是六六通通阀阀。2023/12/262023/12/26三三 、分离系统、分离系统 1.柱管为柱管为直型直型不锈钢管不锈钢管，内径，内径16 mm，柱长，柱长540 cm。2.一般在分离一般在分离前备有一个前备有一个前置柱前置柱使淋洗溶剂由于经过前置柱为其使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和中
4、的固定相饱和，使它在流过分，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相离柱时不再洗脱其中固定相。2023/12/262023/12/26四、检测系统四、检测系统l l紫紫紫紫外外外外-可见光检测器可见光检测器可见光检测器可见光检测器l l示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器l l荧光检测器荧光检测器荧光检测器荧光检测器2023/12/262023/12/261.紫紫外外-可见光检测器可见光检测器 特点特点：灵敏度高；：灵敏度高；线性范围宽线性范围宽 适用于适用于：有紫有紫外外-可见光吸收的可见光吸收的物质物质缺缺点点：只只适适用用于于检检测测能能吸吸收收紫紫外外-可可见见光光的的
5、物物质质，流流动动相相选选择择受受限限制制。要要求求流流动动相相在在测定波长下无吸收。测定波长下无吸收。2023/12/262023/12/26分类分类分类分类l固定波长检测器l可变波长检测器l二极管阵列检测器可变波长紫外-可见光检测器光路示意图双光束光电二极管阵列检测器光路示意图2023/12/262.荧光检测器荧光检测器 特特 点点：高选择性；高选择性；高灵敏度高灵敏度 适用于适用于：有有荧荧光的物光的物质质，如如维生素维生素B、黄曲霉素、黄曲霉素、药物、氨基酸等药物、氨基酸等。缺缺 点点：适用范围小。适用范围小。2023/12/262023/12/263.示差折光检测器示差折光检测器 特点特点：灵敏度低：灵敏度低（10-6g）；受温度的影响受温度的影响较较大大 (精密恒温在精密恒温在0.001)适用于适用于：所有物质所有物质，尤其是无紫，尤其是无紫 外吸收的化合物，如糖类外吸收的化合物，如糖类缺点缺点：不适于梯度洗脱不适于梯度洗脱。2023/12/26