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1、ICS 67.180. 20CCS B 23T/ZNZ浙江省农产品质量安全学会团体标准T/ZNZ 1832023薯类直链、支链淀粉的测定双波长分光光度法Determination of amylose and amylopectin in tubersDual wavelength spectrophotometry2023 -05-24 实施2023-04-24 发布浙江省农产品质量安全学会发布本文件按照GB/T 1. 1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由浙江省农产品
2、质量安全学会提出并归口。本文件起草单位：浙江大学、农业农村部农产品品质评价与营养健康重点实验室、农业农村部农产 品贮 藏保鲜质量安全风险评估实验室（杭州）。本文件主要起草人：陆柏益、徐涛、李也。薯类直链、支链淀粉的测定双波长分光光度法1范围本文件规定了双波长分光光度法测定薯类直链和支链淀粉的原理、试剂和材料、仪器和设备、分析 步 骤、结果计算和表述及精密度。本文件适用于木薯、马铃薯等薯类的直链、支链淀粉含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改
3、单)适用于本文件。GB 5009. 3食品安全国家标准食品中水分的测定GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样中的直链淀粉和支链淀粉在碱溶液中加热溶解后，与碘试剂结合形成蓝色(直链淀粉)和紫红 色(支链淀粉)的复合物。根据直链淀粉和支链淀粉标准溶液吸光度扫描曲线分别确定两个最大吸收波长 并绘制标准曲线。在两个波长下测定样品的吸光度值，由吸光度值的加和性结合标准曲线联立方程，解方程 可求得样品中直链淀粉和支链淀粉的浓度。5试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682推荐使用的三级水。5.1 试剂5.1.1 氢
4、氧化钠(NaOH, CAS 号：1310-73-2)。5.1.2 乙酸(CH3COOH, CAS 号:64-19-7)。5.1.3 无水乙醇(CHQH, CAS 号：64-17-5)。5. 1.4 甲醇(CHQH, CAS 号：67-56-1)。5. 1.5 碘(I2, CAS 号：7553-56-2)。5. 1.6 碘化钾(KI, CAS 号：7681-11-0)。5.2 试剂配制5.2.1 氢氧化钠溶液(1 mol/L)：称取4.0 g氢氧化钠(5. 1. 1),用水溶解并定容至100 mLo5.2.2 乙酸溶液(1 mol/L)：称取6. 0 g乙酸(5. 1.2),用水溶解并定容至10
5、0 mL,5.2.3 2.3碘试剂(2 g/L)：称取碘(5.1.5) 0. 2 g,碘化钾(5.1.6) 2. 0 g,混合，用水溶解并定容至 100 mLo碘试剂室温保存，有效期为3天。5.3 标准品5. 3.1直链淀粉（CAS号：9005-82-7）：直链淀粉标准品应与待测样品来源于同一薯类；凝胶排阻色 谱直链淀粉峰面积占比在95%以上；淀粉的含量在99%以上（以干基计）。6. 3.2支链淀粉（CAS号：9037-22-3）：支链淀粉标准品应与待测样品来源于同一薯类；凝胶排阻色 谱支链淀粉峰面积占比在95%以上；淀粉的含量在99%以上（以干基计）。5.4 标准溶液配制5. 4.1直链淀粉
6、标准溶液（1 mg/mL）：称取0. 05 g （精确到0. 1 mg）直链淀粉（5.3. 1）于三角烧瓶 中，加入0.5mL无水乙醇（5.1.3）分散样品，加入5mL氢氧化钠溶液（5.2.1） , 95加热搅拌lOmin, 冷却至室温后转移至50 mL容量瓶中，用水定容，摇匀。直链淀粉标准溶液现配现用。6. 4. 2支链淀粉标准溶液（1 mg/mL）：称取0. 05 g （精确到0. 1 mg）支链淀粉（5. 3. 2）于三角烧瓶 中，加入0.5 mL无水乙醇（5.1.3）分散样品，加入5mL氢氧化钠溶液（5.2.1） , 95加热搅拌10min, 冷却至室温后转移至50 mL容量瓶中，用水
7、定容，摇匀。支链淀粉标准溶液现配现用。6仪器和设备实验室常用仪器及以下仪器：7. 1分光光度计：波长范围包括400 nm800 nm06. 2天平：感量为0. 1 g和0. 0001 go6.2 恒温鼓风干燥箱。6.3 数显恒温水浴锅。6.4 索氏抽提器:250 mLo6.5 粉碎机。6.6 筛网：80目。7分析步骤6.7 试样制备6.7.1 鲜薯取鲜薯样品50 g以上，洗净、去皮、切成厚度0.5 cm以下的薄片，于4050C烘箱烘干至恒重， 粉碎后过80目筛,用甲醇（5.1.4）进行脱脂,以5滴/s6滴/s的速度回流抽提4 h6 h,将脱脂后的 样品铺开放置两天后，保存待测。6.7.2 干薯
8、片及薯粉干薯片经粉碎机粉碎后，过80目筛网，薯粉直接过80目筛网，用甲醇（5.1.4）进行脱脂，以5滴/s6滴/s的速度回流抽提4 h6 h,将脱脂后的样品铺开放置两天后，保存待测。6.8 标准曲线绘制7. 2.1最大吸收波长确定取2.0 mL直链淀粉标准溶液（5.4. 1）或5. 0 mL支链淀粉标准溶液（5. 4.2）于25 mL容量瓶中,加 入3. 0 mL乙酸溶液（5.2.2）,加入1.0 mL碘试剂（5.2.3）,用水定容，混匀，避光静置15 min。以不 加淀粉标准溶液为空白参比，将显色后的标准溶液在400-800nm波长下扫描，测定吸光度。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制直链
9、淀粉和支链淀粉吸收曲线。取直链淀粉和支链淀粉的最大吸收波长分 别为 入1和入2。7.2.2 直链淀粉标准曲线绘制分别取直链淀粉标准溶液（5.4.1） 0、0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2. 0 mL于25 mL容量瓶中,加入 3.0 mL乙酸溶液（5. 2.2），加入1.0 mL碘试剂（5. 2.3）,用水定容，混匀，避光静置15 min.得含有 0.1、0.2、（）.5、1.（）、1.5、2.0 mg直链淀粉的系列标准溶液。以不加直链淀粉标准溶液为空白参比， 将显色后的直链淀粉的系列标准溶液在X 1和 2波长下测定吸光度为A*血。以吸光度为横坐标， 直链淀粉质量（mg）为纵坐标，绘
10、制直链淀粉在入1和入2波长下的标准曲线。7.2.3 支链淀粉标准曲线绘制分别取支链淀粉标准溶液（5. 4.2） 0、0.5、1.0、2.0、2.5、2.8、2. 9 mL于25 mL容量瓶中,加入 3. 0 mL乙酸溶液（5.2.2）,加入1. 0 mL碘试剂（5. 2. 3）,用水定容,混匀，避光静置15 min。得含有 1.0、1.5、2.0、2.5、2.8、2. 9 mg支链淀粉的系列标准溶液。以不加支链淀粉标准溶液为空白参比， 将显色后的支链淀粉的系列标准溶液在入1和人2波长下测定吸光度为A支、M以吸光度为横坐标， 支链淀粉质量（mg）为纵坐标，绘制支链淀粉在入1和入2波长下的标准曲线
11、。7.3样品测定称取0. 1 g （精确到0. 1 mg）待测样品（7. I）于50 mL三角烧瓶中，加入1 mL无水乙醇（5. 1.3）分 散样品，加入10 mL氢氧化钠溶液（5.2. 1） , 95加热搅拌10 min,冷却至室温后转移至100 mL容量瓶 中，用水定容，摇匀。吸取样品液3. 0 mL于25 mL容量瓶中，加入3. 0矶乙酸溶液（5.2.2）,加入1. 0矶 碘试剂（5.2.3）,用水定容，混匀，避光静置15 min。以不加样品液为空白参比，将显色后的样品溶 液在和工2波长下测定吸光度为A小A,每个样品重复2次。按照GB 5009. 3中第一法测定待测样品 （7. 1）的水
12、分含量。8结果计算样品直链淀粉和支链淀粉的干基含量按下列式（1）和（2）计算:3.ox- i-eX100x3.oxe a-eX100式中：Wn直链淀粉占样品干重的含量（给W支一一支链淀粉占样品干重的含量（%）一一直链淀粉在X 1波长下的标准曲线的斜率; 他一一直链淀粉在X 2波长下的标准曲线的斜率; k收一一支链淀粉在入1波长下的标准曲线的斜率; k一一支链淀粉在入2波长下的标准曲线的斜率; 庆-显色后的样品溶液在、1波长下的吸光度： 尔-显色后的样品溶液在X2波长下的吸光度； m样品重量（mg）；一-脱脂后样品水分含量（%）；-一样品液显色后定容体积，100 （mL）；3.0样品糊化后用于显
13、色体积（mL）。以2次平行测定的算术平均值表示测定结果，计算结果表示到小数点后两位。9精确度9.1 重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内，对同一被测对象， 独立进 行测试获得的两次独立测试结果差的绝对值，大于重复性限r的情况不超过5机直链淀粉和支链淀粉的重复 性限r以质量分数表示，分别按式（3）和（4）计算：r (直链淀粉)=0.0226 xW比+ 0.4258(3)r (支链淀粉)=0.0158 XW支+0.5123(4)式中：wrt一一两次测定直链淀粉结果的平均值，单位为克每百克（g/100 g） ow上两次测定支链淀粉结果的平均值，单位为克每百克（g/100 g） o9.2 再现性在不同实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被测对象，独立进行 测试 获得的两次独立测试结果差的绝对值，大于再现性限R的情况不超过5机直链淀粉和支链淀粉的再现性限R 以质量分数表示，分别按式（5）和（6）计算：R （直链淀粉）=0.0663 x W直 + 0.8539（5）R （支链淀粉）=0.0387 xW4-4-0.3114（6）式中：一一两次测定直链淀粉结果的平均值，单位为克每百克（g/100 g）。 也一一两次测定支链淀粉结果的平均值，单位为克每百克（g/100 g） o