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1、ICS67.180.20 CCSB 23T ZNZ浙 江 省 农 产 品 质 量 安 全 学 会 团 体 标 准T/ZNZ 1832023薯类直链、支链淀粉的测定双波长分光光度法Determination of amylose and amylopectin in tubersDual wavelength spectrophotometry2023-04-24 发布2023-05-24 实施浙江省农产品质量安全学会发 布T/ZNZ 1832023I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文的发布
2、机构不承担识别这些专利的责任。本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。本文件起草单位：浙江大学、农业农村部农产品品质评价与营养健康重点实验室、农业农村部农产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室（杭州）。本文件主要起草人：陆柏益、徐涛、李也。T/ZNZ 18320232薯类直链、支链淀粉的测定 双波长分光光度法1范围本文件规定了双波长分光光度法测定薯类直链和支链淀粉的原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算和表述及精密度。本文件适用于木薯、马铃薯等薯类的直链、支链淀粉含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日
3、期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 5009.3 食品安全国家标准 食品中水分的测定GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样中的直链淀粉和支链淀粉在碱溶液中加热溶解后，与碘试剂结合形成蓝色（直链淀粉）和紫红色（支链淀粉）的复合物。根据直链淀粉和支链淀粉标准溶液吸光度扫描曲线分别确定两个最大吸收波长并绘制标准曲线。在两个波长下测定样品的吸光度值，由吸光度值的加和性结合标准曲线联立方程，解方程可求得样品中直链淀粉和支链淀粉的浓度。5试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析
4、纯，水为GB/T 6682推荐使用的三级水。5.1试剂5.1.1氢氧化钠（NaOH，CAS 号：1310-73-2）。5.1.2乙酸（CH3COOH，CAS 号：64-19-7）。5.1.3无水乙醇（C2H5OH，CAS 号：64-17-5）。5.1.4甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1）。5.1.5碘（I2，CAS 号：7553-56-2）。5.1.6碘化钾（KI，CAS 号：7681-11-0）。5.2试剂配制5.2.1氢氧化钠溶液（1 mol/L）：称取 4.0 g 氢氧化钠（5.1.1），用水溶解并定容至 100 mL。5.2.2乙酸溶液（1 mol/L）：称取 6.0 g
5、乙酸(5.1.2)，用水溶解并定容至 100 mL。5.2.3碘试剂（2 g/L）：称取碘（5.1.5）0.2 g，碘化钾（5.1.6）2.0 g，混合，用水溶解并定容至100 mL。碘试剂室温保存，有效期为 3 天。T/ZNZ 183202335.3标准品5.3.1直链淀粉（CAS 号：9005-82-7）：直链淀粉标准品应与待测样品来源于同一薯类；凝胶排阻色谱直链淀粉峰面积占比在 95%以上；淀粉的含量在 99%以上（以干基计）。5.3.2支链淀粉（CAS 号：9037-22-3）：支链淀粉标准品应与待测样品来源于同一薯类；凝胶排阻色谱支链淀粉峰面积占比在 95%以上；淀粉的含量在 99%
6、以上（以干基计）。5.4标准溶液配制5.4.1直链淀粉标准溶液（1 mg/mL）：称取 0.05 g（精确到 0.1 mg）直链淀粉（5.3.1）于三角烧瓶中，加入 0.5 mL 无水乙醇（5.1.3）分散样品，加入 5 mL 氢氧化钠溶液（5.2.1），95加热搅拌 10 min，冷却至室温后转移至 50 mL 容量瓶中，用水定容，摇匀。直链淀粉标准溶液现配现用。5.4.2支链淀粉标准溶液（1 mg/mL）：称取 0.05 g（精确到 0.1 mg）支链淀粉（5.3.2）于三角烧瓶中，加入 0.5 mL 无水乙醇（5.1.3）分散样品，加入 5 mL 氢氧化钠溶液（5.2.1），95加热搅拌
7、 10 min，冷却至室温后转移至 50 mL 容量瓶中，用水定容，摇匀。支链淀粉标准溶液现配现用。6仪器和设备实验室常用仪器及以下仪器：6.1分光光度计：波长范围包括 400 nm800 nm。6.2天平：感量为 0.1 g 和 0.0001 g。6.3恒温鼓风干燥箱。6.4数显恒温水浴锅。6.5索氏抽提器：250 mL。6.6粉碎机。6.7筛网：80 目。7分析步骤7.1试样制备7.1.1鲜薯取鲜薯样品50 g以上，洗净、去皮、切成厚度0.5 cm以下的薄片，于4050烘箱烘干至恒重，粉碎后过80目筛，用甲醇（5.1.4）进行脱脂，以5滴/s6滴/s的速度回流抽提4 h6 h，将脱脂后的样
8、品铺开放置两天后，保存待测。7.1.2干薯片及薯粉干薯片经粉碎机粉碎后，过80目筛网，薯粉直接过80目筛网，用甲醇（5.1.4）进行脱脂，以5滴/s6滴/s的速度回流抽提4 h6 h，将脱脂后的样品铺开放置两天后，保存待测。7.2标准曲线绘制7.2.1最大吸收波长确定取2.0 mL直链淀粉标准溶液（5.4.1）或5.0 mL支链淀粉标准溶液（5.4.2）于25 mL容量瓶中，加入3.0 mL乙酸溶液（5.2.2），加入1.0 mL碘试剂（5.2.3），用水定容，混匀，避光静置15 min。以不加淀粉标准溶液为空白参比，将显色后的标准溶液在400-800 nm波长下扫描，测定吸光度。以波长为横T
9、/ZNZ 18320234坐标，吸光度为纵坐标，绘制直链淀粉和支链淀粉吸收曲线。取直链淀粉和支链淀粉的最大吸收波长分别为1和2。7.2.2直链淀粉标准曲线绘制分别取直链淀粉标准溶液（5.4.1）0、0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL于25 mL容量瓶中，加入3.0 mL乙酸溶液（5.2.2）,加入1.0 mL碘试剂（5.2.3），用水定容，混匀，避光静置15 min。得含有0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mg直链淀粉的系列标准溶液。以不加直链淀粉标准溶液为空白参比，将显色后的直链淀粉的系列标准溶液在1和2波长下测定吸光度为A1直、A2直。以吸光度为横坐标，直链
10、淀粉质量（mg）为纵坐标，绘制直链淀粉在1和2波长下的标准曲线。7.2.3支链淀粉标准曲线绘制分别取支链淀粉标准溶液（5.4.2）0、0.5、1.0、2.0、2.5、2.8、2.9 mL于25 mL容量瓶中，加入3.0 mL乙酸溶液（5.2.2），加入1.0 mL碘试剂（5.2.3），用水定容，混匀，避光静置15 min。得含有1.0、1.5、2.0、2.5、2.8、2.9 mg支链淀粉的系列标准溶液。以不加支链淀粉标准溶液为空白参比，将显色后的支链淀粉的系列标准溶液在1和2波长下测定吸光度为A1支、A2支。以吸光度为横坐标，支链淀粉质量（mg）为纵坐标，绘制支链淀粉在1和2波长下的标准曲线。
11、7.3样品测定称取0.1 g（精确到0.1 mg）待测样品（7.1）于50 mL三角烧瓶中，加入1 mL无水乙醇（5.1.3）分散样品，加入10 mL氢氧化钠溶液（5.2.1），95加热搅拌10 min，冷却至室温后转移至100 mL容量瓶中，用水定容，摇匀。吸取样品液3.0 mL于25 mL容量瓶中，加入3.0 mL乙酸溶液（5.2.2），加入1.0 mL碘试剂（5.2.3），用水定容，混匀，避光静置15 min。以不加样品液为空白参比，将显色后的样品溶液在1和2波长下测定吸光度为A1、A2，每个样品重复2次。按照GB 5009.3中第一法测定待测样品（7.1）的水分含量。8结果计算样品直链
12、淀粉和支链淀粉的干基含量按下列式（1）和（2）计算：W直=2 支11 支21 直2 支1 支2 直3.0（1）100.(1)W支=2 直11 直21 支2 直1 直2 支3.0（1）100.(2)式中：W直直链淀粉占样品干重的含量（%）W支支链淀粉占样品干重的含量（%）k1直直链淀粉在1 波长下的标准曲线的斜率；k2直直链淀粉在2 波长下的标准曲线的斜率；k1支支链淀粉在1 波长下的标准曲线的斜率；k2支支链淀粉在2 波长下的标准曲线的斜率；A1显色后的样品溶液在1 波长下的吸光度；A2显色后的样品溶液在2 波长下的吸光度；m样品重量（mg）；w脱脂后样品水分含量（%）；T/ZNZ 18320
13、235V样品液显色后定容体积，100（mL）；3.0样品糊化后用于显色体积（mL）。以 2 次平行测定的算术平均值表示测定结果，计算结果表示到小数点后两位。9精确度9.1重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内，对同一被测对象，独立进行测试获得的两次独立测试结果差的绝对值，大于重复性限r的情况不超过5%。直链淀粉和支链淀粉的重复性限r以质量分数表示，分别按式（3）和（4）计算：r（直链淀粉）=0.0226 W直+0.4258.(3)r（支链淀粉）=0.0158 W支+0.5123.(4)式中：W直两次测定直链淀粉结果的平均值，单位为克每百克（g/100 g）。W支两次测定支链淀粉结果的平均值，单位为克每百克（g/100 g）。9.2再现性在不同实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被测对象，独立进行测试获得的两次独立测试结果差的绝对值，大于再现性限R的情况不超过5%。直链淀粉和支链淀粉的再现性限R以质量分数表示，分别按式（5）和（6）计算：R（直链淀粉）=0.0663 W直+0.8539.(5)R（支链淀粉）=0.0387 W支+0.3114.(6)式中：W直两次测定直链淀粉结果的平均值，单位为克每百克（g/100 g）。W支两次测定支链淀粉结果的平均值，单位为克每百克（g/100 g）。