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1、高中生物选修一知识点 专题一 传统发酵技术的应用 课题 1 果酒和果醋的制作 一、果酒的制作原理 1、酵母菌属于真核生物，新陈代谢类型异养兼性厌氧型。酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要)、分裂生殖、孢子生殖。2、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O66O26CO26H2O 3、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。C6H12O62C2H5OH6CO2 4酵母菌发酵的最佳环境 在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气，有利于酵母菌生长、繁殖，再隔绝氧气进行发酵。20左右最适合酵母菌繁殖，酒精发酵的最佳温度是在 1825，pH 最好是弱酸性（4.0-5.8）。5、传统发酵技术所
2、使用的酵母菌的来源：附着在葡萄皮上的野生型酵母菌。为提高果酒的品质，更好地抑制其它微生物的生长，可以直接在果汁中加入人工培养的酵母菌。6、在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.7、简易制作法（果酒实验流程示意图）挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒 注意：（1）、冲洗葡萄时应先冲洗，后除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。（2）防止发酵液被污染的措施：榨汁机、要清洗干净，并晾干；发酵装置要清洗干净，并用 70%酒精消毒，或用洗洁精洗涤；装入葡萄汁后，封闭冲气口，每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。二、果醋的制作原理 1、醋酸菌属
3、于原核生物,代谢类型是异养需氧型,繁殖方式为二分裂 2、若氧气、糖源充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸，其反应式：C6H12O6 3CH3COOH（醋酸）3、若缺少糖源，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，其反应式：2C2H5OH+O2 2CH3CHO（乙醛）+2H2O 2CH3CHO+O2 2CH3COOH（醋酸）4、果醋实验流程示意图。挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵醋酸发酵果醋（1）、最佳培养温度：30350C （2）、培养时间：78d 三、实验步骤注意事项 1.制作果醋时，也可以在果酒中加入醋酸菌。2.葡萄汁装入发酵瓶中要留 13 的空间，目的是:让酵母菌进行有氧呼吸，有利于酵母菌生长
4、、繁殖，耗尽氧气后进行酒精发酵，每隔一段时间拧松瓶盖一下，防止发酵过程中产生 CO2，造成发酵液的溢出。3、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。四、注意事项 1、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；2、排气口是在酒精发酵时用来排出 CO2的；3、出料口是用来取样的。4、排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接，其目的是防止空气中微生物的污染。5、使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应将充气口连接气泵，输入氧气。6、制葡萄酒时，为什么要将温度控制在 1825？制葡萄醋时，为什么要将温度控制在 3035？20左右最适合
5、酵母菌的繁殖。醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为 3035。课题 2 腐乳的制作 一、实验原理 1参与豆腐发酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多种，其中起主要作用的是毛霉。2毛霉属于真核生物，代谢类型是异养需氧型。生殖方式是孢子生殖。3.原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪 水解为甘油和脂肪酸。4、实验流程：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制 二、实验步骤（注意事项）1.豆腐的含水量为 70左右，水分过多则腐乳不易成形。2.粽叶的作用：提供菌种和保温作用。气候干燥时，将平盘用保鲜膜包裹，但不要封严，以免湿度太高，不利于毛霉的生长。3.温
6、度保持在 1518。注意：1、毛霉的来源：（1）.来自空气中的毛霉孢子，（2）.直接接种优良毛霉菌种 2、加盐腌制：将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中，同时逐层加盐，随着层数的加高而增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些。出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签
7、负责患者亲属代理人签名与患者3、食盐的作用：（1）.抑制微生物的生长，避免腐败变质。（2）.析出水分，使豆腐变硬，在后期制作过程中不易酥烂 注意控制盐的用量：盐的浓度过低，不足以抑制微生物的生长，可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高，会影响腐乳的口味。4、配制卤汤：卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的。卤汤中酒的含量一般控制在 12%左右。5、酒的作用：（1）.防止杂菌污染以防腐 （2）.与有机酸结合形成酯，赋予腐乳风味 注意：酒精含量过高，腐乳成熟期延长；酒精含量过低，不足以抑制微生物的生长，导致豆腐腐败变质。6、香辛料的作用：（1）.调味作用 （2）.杀菌防腐作用 （3）.参与并促进发酵过程 7
8、、防止杂菌污染：用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。豆腐装瓶加入卤汤后，要用胶条将瓶口密封。封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。8、豆腐生长的白毛是毛霉的白色菌丝。严格地说是直立菌丝，在豆腐中还有匍匐菌丝。9、腐乳外部有一层致密的“皮”。这层“皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的匍匐菌丝，对人体无害。它能形成腐乳的“体”，使腐乳成形。课题三 制作泡菜 1、制作泡菜所用微生物是：乳酸菌，其代谢类型是：异养厌氧型。在无氧条件下，将糖分解为乳酸。分裂方式是：二分裂。反应式为：C6H12O6酶2C3H6O3+能量 常见的乳酸菌有：乳酸链球菌和乳酸杆菌。乳酸杆菌常用于：生产酸奶。
9、3、亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水，在食品生产中用作食品添加剂。4、膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，亚硝酸盐被吸收后随尿液排出体外，但在适宜 pH、温度和一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者硝
10、酸发酵时间（d）5、一般在腌制 10 天后亚硝酸盐含量开始降低，故在 10 天之后食用最好 6、制作泡菜时，清水与盐的质量比为4:1。6、泡菜中亚硝酸盐含量的测定（1）方法：比色法（2）原理是：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应 后，与 N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显 色液目测比较，估算泡菜中亚硝酸盐含量。7、泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有温度、腌制时间、食盐用量。专题二 微生物的培养与应用 课题一 微生物的实验室培养 一、培养基：1、概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。2、培养基的类型：分类标准
11、 培养基种类 特点 用途 按 照 物理 性 质分 液体培养基 不加凝固剂 用于：工业生产 半固体培养基 加凝固剂如：琼脂 用于：观察微生物的运动及菌种保藏等。固体培养基 用于：微生物的分离和鉴定，按化学成分分 合成培养基 用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确 用于:微生物的分离鉴定 天然培养基 用化学成分不明的天然物质配制而成 用于:工业生产。按培养基选择培养基 指在培养基中加入某种化学物 质，以抑制不需要的微生物生 例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院
12、将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者的用途分 长，促进所需要的微生物的 生长。可以选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。鉴定培养基 根据微生物的特点，在培养基中 加入某种指示剂或化学药品配 制而成的，用以鉴别不同类别的 微生物。用伊红美篮培养基鉴定水中是否含有大肠杆菌，如有，菌落呈深紫色，并
13、带有金属光泽。二、培养基的化学成分包括：水、无机盐、碳源、氮源等。1、碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如 CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。2、氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如 N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用 N2。3、培养基还要满足微生物生长对 PH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如：培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素；培养霉菌时须将培养基的 pH 调至酸性；培养细菌是需要将 pH 调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提
14、供无氧的条件 三、无菌技术：获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。1、无菌技术的目的：防止实验室的培养物被其他外来微生物污染、有效避免操作者自身被微生物感染。2、消毒与灭菌的区别（1）消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法、巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有
15、化学药剂（如酒出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。（2）灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。灭菌方法：接种环、接种针
16、、试管口等使用灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。四、制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。五、倒平板操作的讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到 50左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.接种需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的：防止瓶口的微生物污染培养基。3.倒平板的目的：使培养基表面的水分更好地挥发，
17、防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。4.在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板不能用来培养微生物，原因：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，污染培养基。六、纯化大肠杆菌（1）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。（2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。在数次划线后培养，可以分离到单细胞菌落。（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散
18、成单个细胞，从而能在出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。七、平板划线操作 1.操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环的目的是：答：操作的第一步灼烧接
19、种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死接种环上残留的菌种。划线结束后灼烧接种环，杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线。答：线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。八、涂布平板操作 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。同时操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不
20、要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围。九、菌种的保存（1）对于频繁使用的菌种，采用临时保藏的方法。临时保藏方法 将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入 4的冰箱中保藏。以后每 36 个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。缺点：这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。（2）对于需要长期保存的菌种，采用甘油管藏的方法。在 3mL 的甘油瓶中，装入 1mL 甘油后灭菌。将 1mL 培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20的冷冻箱中保存。课题二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 出去向日时年月年月日时实际回院时间分
21、日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者尿素：尿素不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶 一、筛选菌株（1）实验室中微生物的筛选应用的原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、
22、温度、pH 等），同时抑制或阻止其他微生物生长。（2）选择性培养基：在选择性培养基配方中，把尿素作为培养基中唯一的氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能生长。二、统计菌落数目的方法（1）常用方法：稀释涂布平板法和显微镜直接计数。（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。为了保证结果准确，一般设置 35 个平板，选择菌落数在 30300 的平板进行计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。采用此方法的注意事项：一般选取菌落数在 30-300 之间的平板
23、进行计数 本法仅限于形成菌落的微生物 三、设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。四、实验设计流程：土壤取样样品的稀释取样涂布微生物的培养与观察细菌计数（1）土壤取样：从富含有机物、潮湿、pH 7 的土壤中取样。铲去表层土，距地表 38cm 的土壤层取样。（2）样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。测定土壤中细菌的数量，一般选用 104 105 106 测定放线菌的数量，一般选用 103 104 105 测定真菌的数量，一般选用 102 103 104 出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上
24、不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者（3）微生物的培养与观察 不同种类的微生物，需要不同的培养温度和培养时间 细菌 30-37 1-2 天 放线菌 25-28 5-7 天 霉菌 25-28 3-4 天 每隔 24 小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致
25、遗漏菌落的数目。在一定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征。（4）从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计 3 个平板，计算出平板菌落数的平均值 每克样品中的菌落数=（C/V）M 其中，C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M 代表稀释倍数（5）在以尿素为唯一的氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，说明该细菌为分解尿素的细菌。课题三 分解纤维素的微生物的分离 一、纤维素与纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，包括 C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖
26、分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养。二、纤维素分解菌的筛选 1、（1）筛选方法：刚果红染色法。能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。（2）刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理 刚果红与纤维素形成红色复合物，不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。2、分离分解纤维素的微生物的实验流程 土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产
27、生透明圈的菌落 注意:刚果红染色法的种类 出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者种类 缺点 优点 先培养微生物，再加入刚果红 操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂 显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。在倒平板时就加入刚
28、果红 1.由于纤维素和琼脂、土豆汁都含有淀粉类物质，使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。2.有些微生物具有降解色素的能力，在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。操作简便，不存在菌落混杂问题，3、课题延伸（1）检验纤维素酶对纤维素的分解方法：常用滤纸崩溃法。（2）对分解纤维素的微生物进行初步筛选，只是分离纯化的第一步，为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。纤维素酶的测定方法：是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。（3）在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对高，因此从
29、这种土样中纤维素分解菌的几率高。（3）选择培养能够“浓缩”所需的微生物的原因：在选择培养的条件下，可以使能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。专题三 植物的组织培养技术 课题一 菊花的组织培养 一、植物组织培养 1、植物组织培养的原理：细胞的全能性:2、过程：脱分化 再分化 外植体 愈伤组织 幼苗 移植 脱分化：是由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出
30、现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者再分化：愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。愈伤组织的特点：细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。二、影响植物组织培养的因素 1、材料：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。（易进行无性繁殖的植
31、物容易进行组织培养。）选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。2、营养：常用的培养基是 MS 培养基。无机营养：大量元素是 N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是 Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有机营养：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。3、植物激素：植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。4、环境条件：PH、温度、光等环境条件。进行菊花的组织培养，一般将 pH 控制在 5.8 左右，温度控制在 18-22，并且每日用日光灯
32、照射12h.三、操作流程 使用顺序 实验结果 先生长素，后细胞分裂素 有利于分裂但不分化 先细胞分裂素，后生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 生长素 细胞分裂素比值与结果 比值高时 促进根分化，抑制芽形成 比值低时 促进芽分化，抑制根形成 比值适中 促进愈伤组织生长 出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引
33、发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者配制 MS 固体培养基外植体的消毒接种培养移栽栽培 1、配制 MS 固体培养基：(1)配制培养基：应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液。配制培养基母液时，大量元素浓缩 10 倍，微量元素浓缩 100 倍，激素类、维生素类按 1mg mL 配制成母液。(2)在菊花组织培养中，可以不添加植物激素.原因:是菊花茎段组织培养比较容易。(3)与肉汤培养基相比，MS 培养基有哪些特点？肉汤培养基(即微生物培养基)以有机营养为主，MS 培养基则需提供大量无机营养。2、外植体的消毒：主要消毒剂
34、：70%的酒精、0.1%的氯化汞 外植体:先用流水冲洗加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗流水冲洗70%的酒精消毒 6-7s，无菌水清洗0.1%的氯化汞溶液中消毒 1-2min。无菌水漂洗。3、接种操作的关键：无菌操作。4、无菌技术包括：培养基灭菌和植物材料（外植体）灭菌。5、在移栽生根的菊花试管苗之前，先打开培养瓶的封口膜几日，然后用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，幼苗长状后再移栽到土壤中。专题二 月季的花药培养 一、花药组织培养 1、花粉发育过程：花粉是由花粉母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。2、被子植物花粉的发育要经历：小孢子四
35、分体时期、单核期和双核期等阶段。减数分裂 3、1 花粉母细胞 4 个小孢子 有丝分裂 1 个花粉管细胞核 有丝分裂 1 个营养细胞 每 1 个小孢子 1 个生殖细胞核 -1 个精子 出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者注意：成熟的花
36、粉粒有两类：二核花粉粒：花粉粒中含 1 个花粉管细胞核和 1 个生殖细胞核，（在花粉管中形成的）三核花粉粒：花粉粒中含 1 个花粉管细胞核和 2 个精子 二、产生花粉植株的两种途径：通过花药培养产生花粉植株（即单倍体植株）一般有两种途径。1、是花粉通过胚状体阶段发育为植物，2、是花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再诱导分化成植株。脱分化 再分化 诱导 其过程：(1)花药中的花粉 胚状体 丛芽 生根 移栽 脱分化 再分化 诱导(2)花药中的花粉 胚状体 丛芽 生根 移栽 注意：这两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。三、影响花药培养的因素 1、主要的影响因素：材
37、料的选择与培养基的组成（1）、材料的选择 不同植物诱导成功率不同。同一植物的不同生理状况（花粉早期是的花药比后期的容易产生花粉植株）合适的花粉发育期 花粉：选择初花期的花粉；花药：选择单核期花药培养成功率高，花蕾：选择完全未开放的花蕾培养成功率高）植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等。2、材料的选取：（1）选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。（2）最常用的方法是：醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色 注意事项：出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医
38、院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者1、剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织），同时彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。2、培养温度控制在 25左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照。3、植物组织培养技术与花药培养技术的相同之处是：培养基配制方法、无菌技术及
39、接种操作等基本相同。两者的不同之处在于：花药培养的选材先需摸索时期适宜的花蕾；花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；花药培养对培养基配方的要求更为严格。4、在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常发生染色体组的数目倍增，需要对培养出来的植株作进一步鉴定和筛选。专题六、植物体中有效成分的提取 课题 1、植物芳香油的提取 一、植物芳香油的来源：1天然香料的主要来源：动物和植物，还有真菌。2植物芳香油的特点：挥发性强，易溶于有机溶剂，化学成分：以萜类化合物及其衍生物为主。二、植物芳香油的提取方法：1、植物芳香油的提取方法：蒸馏、压榨、萃取等，具体采用哪种提取方法要根据植物原
40、料的特点来决定。2、植物芳香油提取三种方法的比较 提取方法 水蒸气蒸馏法 萃取法 压榨法 实验原理 利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来 使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发后得到芳香油 通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油 方法步骤 水蒸汽蒸馏 分离油层 除水过滤 粉碎、干燥 萃取、过滤 浓缩 石灰水浸泡、漂洗 压榨过滤静置 再次过滤 适用范围 提取玫瑰油、薄荷油等挥发性 原料颗粒尽可能细小，能充分 适用于柑橘、柠檬等易焦糊出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生
41、命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者强的芳香油 浸泡在有机溶剂中 原料的提取 优点 简单易行，便于分离 出油率高，易于分离 生产成本低，能保持原料原来的结构和功能，常温下不发生化学反应，质量提高 不足 水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分部分水解等问题 使用有机溶剂处理不当会影响芳香油的质量 分离较为困难，出油率相对较低 三、玫瑰精油的提取：1、提取方法：水蒸气蒸馏法 2、实验提取装置：（1）安装蒸馏装置
42、：按照从左向右、自下到上的次序安装水蒸气蒸馏装置。（2）蒸馏时间不能过短，温度不能过高。（3）温度计的水银球应位于蒸馏烧瓶的支管处。（4）应采集盛花期的玫瑰花 3、实验流程：加 NaCl 加无水 Na2SO4 鲜玫瑰花+清水水蒸气蒸馏-油水混合物-油水分离 除水 玫瑰油 注意：氯化钠和无水硫酸钠的作用：氯化钠：促使油水混合物（乳浊液中油和水)分离。无水硫酸钠：吸收油层中的水分。四、橘皮精油的提取：1、提取方法：压榨法 2、原理：通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油 3、实验流程：石灰水浸泡 漂洗-压榨-过滤（用布袋过滤）静置再次过滤（用滤纸过滤）-橘皮油 出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时
43、年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者注意：1、新鲜的橘皮中含有大量的果蜡、果胶和水分，直接压榨，出油率较低。为了提高出油率，需要将橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡。2、石灰水的作用：防止压榨时滑脱，提高出油率。降低压榨液黏稠度，过滤不堵塞筛眼。3、为了使橘皮油易于水分离，还要
44、加入相当于橘皮质量的 0.25小苏打和 5硫酸钠，并调节PH 至 78.0.25小苏打和 5硫酸钠的作用：促进油和水的分离。4、压榨液的处理：压榨液中含有橘皮精油和大量的水分及残杂，先用布袋过滤除去固体物和残杂，然后离心进一步除去质量较小的残留固体物，再用分液漏斗或吸管将上层的橘皮油分离出来，然后静置5-7d，使杂质沉淀，用吸管吸出上层澄清橘皮油，其余部分通过滤纸过滤，滤液与吸出的上层橘油合并，成为橘皮精油。（静置处理目的：除去果蜡和水分。）5、压榨是一个机械加压过程，要求既要将原料压紧，防止原料滑脱，又要将油分挤压出来。课题 2、胡萝卜素的提取 一、胡萝卜素基础知识 1、种类：根据双键数目胡
45、萝卜素可分为、三类。-胡萝卜素是其中最主要成分。2、性质:胡萝卜素是橘黄色的晶体，化学性质稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等。3、用途：(1)医药用途：治疗缺乏维生素 A 症；抗肿瘤、抗衰老等作用(2)作添加剂（食品、饮料、饲料）：食用色素 4、工业上提取天然-胡萝卜素的方法：（1）是从植物中提取，（例：胡萝卜中含量最丰富）（2）是从大面积养殖的岩藻中获得，（例：螺旋藻含量最丰富）（3）是利用微生物的发酵产生。（例：三孢布拉霉菌）二、试验设计 1、提取胡萝卜素的方法：萃取法 出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾
46、病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者2、萃取剂的选择（1）乙醇和丙酮是水溶性有机溶剂，萃取时能与水混溶影响萃取的效果。应选择使用水不溶性有机溶剂。（2）石油醚、醋酸乙酯、乙醚、苯和四氯化碳为水不溶性有机溶剂，哪种最适宜用来提取胡萝卜素？石油醚的沸点最高，在加热萃取时不易挥发，所以石油醚最适宜用作萃取剂。3、提取胡萝卜素的实验流程 胡萝卜粉碎干
47、燥萃取过滤浓缩胡萝卜素 注意事项：（1）烘干胡萝卜时，要控制好温度和时间，温度过高、时间过长，胡萝卜素会分解。（2）冷凝管的作用：防止加热时有机溶剂的挥发（3）用水浴加热的目的：避免明火加热引起燃烧、爆炸 4.影响萃取的因素（1）主要因素：萃取剂性质和使用量。（2）次要因素：原料颗粒大小、紧密程度、含水量、温度、时间。注意事项：1、原料颗粒小,萃取温度高,时间长,需要提取的物质就能充分溶解，萃取效果就好。所以萃取前，要将胡萝卜进行粉碎和干燥。粉碎的目的：使原料颗粒变小，增大与萃取剂的接触面积，提高萃取效率。2、萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置。在萃取之前，还要进行过滤，除去萃取液中的不溶物。出去
48、向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者 三、胡萝卜素的纸层析鉴定：注意事项：1.滤纸条预先干燥处理；可用吹风机将溶剂吹干，注意保持滤纸干燥。2.点样时快速细致、样点圆点尽量细小；3.滤纸筒的竖直边缘不能接触；4.石油醚易挥发，注意层析容器
49、要密封。专题四 酶的研究与应用 课题 1 果胶酶在果汁生产中的应用 1、果胶 是植物细胞壁及胞间层的主要组成成分之一，它由半乳糖醛酸聚合而成的高分子化合物，不溶于水。2、破坏植物细胞壁的方法：用果胶酶处理。3、果胶对果汁制作的影响：影响果汁的出汁率。使果汁浑浊。4、果胶酶：果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶等。5、果胶酶在果汁制作中的作用：分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层；使果胶水解为半乳糖醛酸。提高水果的出汁率，并使果汁变得澄清。果胶酶 果胶-半乳糖醛酸 出去向日时年月年月日时实际回院时间分日时年月医院规定患者住院期间原则上不应离院外出否则医院将无法保证
50、在此期间因疾病本身或其他意外情况发生时得到及时处理和救治甚至会出现导致生命危险的不良后果因特殊原因必须期间如有紧急情况发生时应立即与我院联系小时急救电话或者可以获取当场须采取得紧急措施本人自愿承担外出期间以及因外出而引发的一切风险和后果在此免除医务人员和医疗机构的一切责任并签负责患者亲属代理人签名与患者6、酶催化能力高低的衡量标准 在一定的条件下，酶所催化的某一化学反应的反应速度来表示。酶反应速度:用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量来表示。7、影响酶活性的因素：温度 果胶酶的最适温度为 45500C pH：课题 2 探讨加酶洗衣粉的洗剂效果 一、概念：加酶洗衣粉是指含有酶制剂