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1、利用峰面积分析混合 DNA 羊品【关键词】阴道混合物，强奸，dna 【】d919.2；q75 1 b【】1007-9297(20 xx)01 0051 03 在法医 dna 检验过程中，经常会遇到多个体的混合羊本，如受害人和 嫌疑人的混合羊品，几个嫌疑人的混合羊品。荧光 标记自动分析 str 系统，不仅能根据位点等位基因的个数判断羊品是否为混合羊品，而 且还能根据等位基因峰面积(谱带荧光总强度)确定混合羊品中各组分 的混合比例，推断混合羊品中各 组分的基因分型_1j。gill等建立了利 用峰面积分析混合样品的 方法_2 o 本文利用该法对一宗案件中的混合羊品进行了分析，推断混合样品各组分的比例
2、及各组分的基因分型 材料和方法 20 xx 年于中山某地发生一宗强奸案，送检材料为事主血纱，嫌疑人 1 血纱，嫌疑人 2 血纱，以及在嫌疑人 2 住处提取的一根 带毛囊的阴毛（上沾有少量分泌液），分别编为广 4 号样品。按 chelex 100 法 提取 dna,采用 ampfi str identifiler 复合扩 增试剂盒（美国 abi 公司）同时扩增 d8sl179v d21sll、d7s820、（f1p0 v 193S135&tho1、d13s317v d16s539、d2s1338、d19s433、vwa、tpox、d18s51 x d5s818、fga 等 1 5 个位点和性 别
3、位点 amelogenin,扩增产物在 abi310 遗传分析仪上进行电泳 分离，genescan30 软件分析结果，genotypern 2.5软件进行 因分型 人的混合羊品几个嫌疑人的混合羊品荧光标记自动分析系统不仅能根据位点等位基因的个数判断羊品是否为混合羊品而且还能根据等位基因峰面积谱带荧光总强度确定混合羊品中各组分的混合比例推断混合羊品中各组分的基因分型的比例及各组分的基因分型材料和方法年于中山某地发生一宗强奸案送检材料为事主血纱嫌疑人血纱嫌疑人血纱以及在嫌疑人住处提取的一根带毛囊的阴毛上沾有少量分泌液分别编为广号样品按法提取采用复合扩增试剂盒美国公司样品分型结果见表表样品分型结果二
4、结果分析结果分析方法参照文献一确定是否有混合样品根据谱带数目正常情况下进行常染色体分型时纯合子应检出一条带杂合子检出条带混合样品会出现谱带数目增多号样品在等个位点检出个等结果、样品分型 样品分型结果见表 1。表 1 样品分型结果 二、结果分析 结果分析方法参照文献2（一）确定是否有混合样品 1 根据谱带数目。正常情况下进行常染色体 str 分型时，纯合子应检出一条带，杂合子检出 2 条带，混合样品会出现谱带 数目增多。4 号样品在 d8sl179 等 3 个位点检出 4 个等位基因（表现为 4 条谱带），在 d21s11 等 6 个位点检出 3 条谱带，提示 人的混合羊品几个嫌疑人的混合羊品荧
5、光标记自动分析系统不仅能根据位点等位基因的个数判断羊品是否为混合羊品而且还能根据等位基因峰面积谱带荧光总强度确定混合羊品中各组分的混合比例推断混合羊品中各组分的基因分型的比例及各组分的基因分型材料和方法年于中山某地发生一宗强奸案送检材料为事主血纱嫌疑人血纱嫌疑人血纱以及在嫌疑人住处提取的一根带毛囊的阴毛上沾有少量分泌液分别编为广号样品按法提取采用复合扩增试剂盒美国公司样品分型结果见表表样品分型结果二结果分析结果分析方法参照文献一确定是否有混合样品根据谱带数目正常情况下进行常染色体分型时纯合子应检出一条带杂合子检出条带混合样品会出现谱带数目增多号样品在等个位点检出个等该样品为混合样品。2.等位基
6、因峰面积的不对称。理论上对于杂合子来说，两个等位基因 的峰面积应大致相等，比例接近于 1;而混合样品由 于等位基因的叠加，可能会出现不正常的杂合子现象，两个等位 基因 的峰面积差异会增大。表 2 列出了混合比例为 1：10、1：1、10:1 时出现 2 个等位基因时峰面积的比例。4 号样品在 th01、d13s317x tpoXx d18s51、amelogene 等位点均检出 2 条带，类似 杂合子，但 2 条带的峰面积明显不平衡（见表 3）,同样提示 4 号 样本为混合样本，且为男女混合。（-）确定混合样品中供体的数目 样品 4 所有位点出现的等位基因数最多为 4 个，提示供体数为 2 人
7、的混合羊品几个嫌疑人的混合羊品荧光标记自动分析系统不仅能根据位点等位基因的个数判断羊品是否为混合羊品而且还能根据等位基因峰面积谱带荧光总强度确定混合羊品中各组分的混合比例推断混合羊品中各组分的基因分型的比例及各组分的基因分型材料和方法年于中山某地发生一宗强奸案送检材料为事主血纱嫌疑人血纱嫌疑人血纱以及在嫌疑人住处提取的一根带毛囊的阴毛上沾有少量分泌液分别编为广号样品按法提取采用复合扩增试剂盒美国公司样品分型结果见表表样品分型结果二结果分析结果分析方法参照文献一确定是否有混合样品根据谱带数目正常情况下进行常染色体分型时纯合子应检出一条带杂合子检出条带混合样品会出现谱带数目增多号样品在等个位点检出
8、个等个。（三）确定混合样品中各供体的基因型组合对于杂合子来说，两个等 位基因的峰面积应大致相等，比例接近于 1o 基于此原理，分析者可 以通过观察到的峰面积来推断可能的基因型组合和各组分的比例。对 确定是二供体组成的混合样本来说，分型结果可以表现为一带型、二 带型 三带型或四带型。除一带型外，其余各种表现均可提供基因型 组合的信息。其中.四带型由于直观地表现出 2 个供体的基因型，所以最易于 通过其推断 2 个供体的基因型组合及其比例。假设某一位点出现的 4 个等位基因依片段由小到大的顺序 人的混合羊品几个嫌疑人的混合羊品荧光标记自动分析系统不仅能根据位点等位基因的个数判断羊品是否为混合羊品而
9、且还能根据等位基因峰面积谱带荧光总强度确定混合羊品中各组分的混合比例推断混合羊品中各组分的基因分型的比例及各组分的基因分型材料和方法年于中山某地发生一宗强奸案送检材料为事主血纱嫌疑人血纱嫌疑人血纱以及在嫌疑人住处提取的一根带毛囊的阴毛上沾有少量分泌液分别编为广号样品按法提取采用复合扩增试剂盒美国公司样品分型结果见表表样品分型结果二结果分析结果分析方法参照文献一确定是否有混合样品根据谱带数目正常情况下进行常染色体分型时纯合子应检出一条带杂合子检出条带混合样品会出现谱带数目增多号样品在等个位点检出个等定为 a、b、c、d,观察到的面积分别为 paa、pab、pac、pad,定 mx 为所有位点都接
10、近相等，然后给出一个估计的混合比例(mx)，如果解释正确的话，观察值和期望值应接近，这对任意基因型组 合可用峰面积的剩余值 eq 来检验，峰面积的剩余值 eq=(T(pa 观察值一 pa 期望值)，峰面积的剩余值越低，该基因型组 合的可能性越高。以 4 号样品的 d8sl179 位点为例，混合物中 检出 10(a)、14(b)、15(c)、16(d),据 eq 值可推断混合比例(mx)bc/ad=O.62,相反混合比例(mx)ad/bc=0.38,其他的 基因型组合（如 ab,cd）不可能存在，因为 eq 不可能接近零 表 4 列出了对出现 4 个等位基因的位点的分析，在列出某个位点的 人的混
11、合羊品几个嫌疑人的混合羊品荧光标记自动分析系统不仅能根据位点等位基因的个数判断羊品是否为混合羊品而且还能根据等位基因峰面积谱带荧光总强度确定混合羊品中各组分的混合比例推断混合羊品中各组分的基因分型的比例及各组分的基因分型材料和方法年于中山某地发生一宗强奸案送检材料为事主血纱嫌疑人血纱嫌疑人血纱以及在嫌疑人住处提取的一根带毛囊的阴毛上沾有少量分泌液分别编为广号样品按法提取采用复合扩增试剂盒美国公司样品分型结果见表表样品分型结果二结果分析结果分析方法参照文献一确定是否有混合样品根据谱带数目正常情况下进行常染色体分型时纯合子应检出一条带杂合子检出条带混合样品会出现谱带数目增多号样品在等个位点检出个等
12、所有可能的基因型组合后，计算他们各自的 eq 值最小的 eq 基因型组合作为推断的基因型组合列入表 4 中。取表 4 计算出的 mx 的平均值 0.36,并定义 mx 为所有位点 都接近 相等，计 内容仅供参考 人的混合羊品几个嫌疑人的混合羊品荧光标记自动分析系统不仅能根据位点等位基因的个数判断羊品是否为混合羊品而且还能根据等位基因峰面积谱带荧光总强度确定混合羊品中各组分的混合比例推断混合羊品中各组分的基因分型的比例及各组分的基因分型材料和方法年于中山某地发生一宗强奸案送检材料为事主血纱嫌疑人血纱嫌疑人血纱以及在嫌疑人住处提取的一根带毛囊的阴毛上沾有少量分泌液分别编为广号样品按法提取采用复合扩增试剂盒美国公司样品分型结果见表表样品分型结果二结果分析结果分析方法参照文献一确定是否有混合样品根据谱带数目正常情况下进行常染色体分型时纯合子应检出一条带杂合子检出条带混合样品会出现谱带数目增多号样品在等个位点检出个等