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1、第二章 微生物的纯培养和显微技术 1 微生物的分离和纯培养 1.1无菌技术 1.2用固体培养基获得纯培养 菌落（Colony）：由一个或少数几个细胞在固体培养基表面上繁殖而形成的肉眼可见的子细胞群体。涂布平板法 稀释倒平板法 平板划线 稀释摇管法 1.3 用液体培养基获得纯培养 1.4 单孢子分离 1.5 选择培养 选择平板培养 高温菌 蛋白酶产生菌 富集培养 降解某种化学物质的微生物 分离纤维素分解细菌 1.6 微生物的保藏技术 传代培养保藏细菌的短期保存 冷冻保藏长期保存 干燥保藏产孢子的微生物 2 显微镜和显微技术 决定显微镜的观察效果 分辨率：能辨别两点之间最小距离的能力 反差：样品区
2、别于背景的程度 放大倍数 种类：普通光学显微镜 最小可分辨距离0.5/nsin（越小，分辨率越高；为所用光源波长；为物镜镜口角的半数；n 为玻片与物镜间介质的折射率）暗视野显微镜 主要观察生活细菌的运动性 相差显微镜 根据细胞内各部分的折射率和厚度不同，光线通过时直射光和衍射光的光程就会有差异；把透过标本的可见光的相位差变成振幅 差，从而提高了标本内各种结构之间的对比度，使标本中的结构清晰可辨。荧光显微镜 透射电子显微镜 扫描电子显微镜 扫描隧道显微镜 个细胞在固体培养基表面上繁殖而形成的肉眼可见的子细胞群体涂布平板法稀释倒平板法平板划线稀释摇管法用液体培养基获得纯培养单孢子分离选择培养选择平
3、板培养高温菌蛋白酶产生菌富集培养降解某种化学物质的微生物分离镜和显微技术决定显微镜的观察效果分辨率能辨别两点之间最小距离的能力反差样品区别于背景的程度放大倍数种类普通光学显微镜最小可分辨距离越小分辨率越高为所用光源波长为物镜镜口角的半数为玻片与物镜间介质的折射率衍射光的光程就会有差异把透过标本的可见光的相位差变成振幅差从而提高了标本内各种结构之间的对比度使标本中的结构清可辨荧光显微镜透射电子显微镜扫描电子显微镜扫描隧道显微镜显微镜下的微生物细菌细菌的种基本形态3 显微镜下的微生物 3.1 细菌 细菌的 3 种基本形态 球状：以单细胞形式存在；聚集成特定的排列，双球菌，四联球菌，八叠球菌，链球菌
4、和葡萄球菌；杆状：eg.巨大芽孢杆菌、双歧杆菌；螺旋状：eg.幽门螺杆菌、霍乱弧菌；其他形态：放线菌 3.2 古生菌 3.3 真菌 霉菌 由分支或不分支的菌丝构成；无隔膜菌丝：根霉、毛霉 有隔膜菌丝：青霉菌、曲霉菌 酵母菌 单细胞真核微生物 芽殖、裂殖、极少数有性生殖 主要形态：卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬 个细胞在固体培养基表面上繁殖而形成的肉眼可见的子细胞群体涂布平板法稀释倒平板法平板划线稀释摇管法用液体培养基获得纯培养单孢子分离选择培养选择平板培养高温菌蛋白酶产生菌富集培养降解某种化学物质的微生物分离镜和显微技术决定显微镜的观察效果分辨率能辨别两点之间最小距离的能力反差样品区别于背景的程度放大倍数种类普通光学显微镜最小可分辨距离越小分辨率越高为所用光源波长为物镜镜口角的半数为玻片与物镜间介质的折射率衍射光的光程就会有差异把透过标本的可见光的相位差变成振幅差从而提高了标本内各种结构之间的对比度使标本中的结构清可辨荧光显微镜透射电子显微镜扫描电子显微镜扫描隧道显微镜显微镜下的微生物细菌细菌的种基本形态