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1、细菌转化实验原理和操作步骤 时间：2021.03.02 创作：欧阳数 转化(transformation)是指一段同源或异源的DNA转 入受体细胞并得到表达的水平基因的转移过程，是现代分 子生物学研究和基因工程不可缺少的重要技术。关键词：细菌转化细菌转化 一.实验目的 1以pGLO质粒转化大肠杆菌为例，学习转化的基本原理 及方法。2验证DNA是遗传物质，加深对屮心法则的理解。二.实验原理 转化(transformation)是指一段同源或异源的DNA转 入受体细胞并得到表达的水平基因的转移过程，是现代分 子生物学研究和基因工程不可缺少的重要技术。目前常用 的转化方法有CaCl 2法(化学转化法
2、)和电转化法。本实验是用pGLO细菌转化试剂盒中提供的pGLO质粒来转 化大肠杆菌，所用方法为CaCl 2转化法。pGLO质粒：pGLO质粒上主要含有两个基因，一个为编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因，一个为抗生素氨节青霉素抗性基因。此 外，该质粒还整合有一个特殊的参与受体细胞中绿色荧光蛋白表达的基因调控体系，转化细胞屮的绿色荧光蛋白基 因只有在培养基中存在阿拉伯糖时才能启动表达。转化子 细胞将在不含阿拉伯糖的培养基上呈白色而在含阿拉伯糖 的培养基上显绿色荧光，这种荧光在长波紫外灯下即可观 察到。三.实验材料 受体菌：E.coliK12 HB101 质粒：pGLO plasmid 转化液（CaC
3、12）氨节青霉素（amp）阿拉伯糖（ara）培养基：固体LB、液体LB 接种环、移液器等 四.实验步骤 1.准备平板：每组：1块LB平板，2块LB/amp平 板，1块LB/amp/ara平板 araGFP操纵子 转移过程是现代分子生物学研究和基因工程不可缺少的重要技术关键词细菌转化细菌转化一实验目的以质粒转化大肠杆菌为例学习转化的基本原理及方法验证是遗传物质加深对屮心法则的理解二实验原理转化是指一段同源或异源的的转化方法有法化学转化法和电转化法本实验是用细菌转化试剂盒中提供的质粒来转化大肠杆菌所用方法为转化法质粒质粒上主要含有两个基因一个为编码绿色荧光蛋白的基因一个为抗生素氨节青霉素抗性基因外
4、该质粒还整合有一阿拉伯糖时才能启动表达转化子细胞将在不含阿拉伯糖的培养基上呈白色而在含阿拉伯糖的培养基上显绿色荧光这种荧光在长波紫外灯下即可观察到操纵子三实验材料受体菌质粒转化液氨节青霉素阿拉伯糖培养基固体液体接种环移2）在上述两管中分别加入 250 J 转化液。2.准备感受态细胞：用250 u 1无菌水或转化液悬浮试 剂盒屮提供的大肠杆菌菌粉，此即感受态细胞。3.活化受体细胞：挑取1环E.coliK12 HB101菌液，于 LB培养基上37 C活化16-24h。4.转化:1）在两只无菌禽心管上分 别标 记+DNA,DNA a 4）各挑取活化好的受体菌 的一 个单菌落，悬浮于两管转 化液中。5
5、）在标有+DNA的管中加 入一 环质粒 DNA,而标有-DNA 的管中不加。3）迅速置于冰上。Is 6）将上述两管于冰上放置 lOmin o 7）在准备好的培养基底部 如左图。crA 转移过程是现代分子生物学研究和基因工程不可缺少的重要技术关键词细菌转化细菌转化一实验目的以质粒转化大肠杆菌为例学习转化的基本原理及方法验证是遗传物质加深对屮心法则的理解二实验原理转化是指一段同源或异源的的转化方法有法化学转化法和电转化法本实验是用细菌转化试剂盒中提供的质粒来转化大肠杆菌所用方法为转化法质粒质粒上主要含有两个基因一个为编码绿色荧光蛋白的基因一个为抗生素氨节青霉素抗性基因外该质粒还整合有一阿拉伯糖时才
6、能启动表达转化子细胞将在不含阿拉伯糖的培养基上呈白色而在含阿拉伯糖的培养基上显绿色荧光这种荧光在长波紫外灯下即可观察到操纵子三实验材料受体菌质粒转化液氨节青霉素阿拉伯糖培养基固体液体接种环移10）从+DNA小管中分别 吸取100 1 I滴加在两个标 有+DNA的平板上，从-DNA小管中分别吸取 100 卩 I滴加在两个标有-DNA的 平板上。11）用无菌接种环将滴加 的液体均匀涂布在平板上。8）两只小管放入 42 C水 浴中处理 50 秒，再迅速放 于冰上 2 min。9）在两只小管中分别加入 250 p I LB-肉汤。12）将上述四只平板固 左，并于 42 C培养箱中培 养 2 天。13）
7、在长波紫外灯下观察 结果，记录各平板上的菌落 数 时间：2021.03.02 创作：欧阳数 Ice 5N氏 转移过程是现代分子生物学研究和基因工程不可缺少的重要技术关键词细菌转化细菌转化一实验目的以质粒转化大肠杆菌为例学习转化的基本原理及方法验证是遗传物质加深对屮心法则的理解二实验原理转化是指一段同源或异源的的转化方法有法化学转化法和电转化法本实验是用细菌转化试剂盒中提供的质粒来转化大肠杆菌所用方法为转化法质粒质粒上主要含有两个基因一个为编码绿色荧光蛋白的基因一个为抗生素氨节青霉素抗性基因外该质粒还整合有一阿拉伯糖时才能启动表达转化子细胞将在不含阿拉伯糖的培养基上呈白色而在含阿拉伯糖的培养基上显绿色荧光这种荧光在长波紫外灯下即可观察到操纵子三实验材料受体菌质粒转化液氨节青霉素阿拉伯糖培养基固体液体接种环移