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1、实验一 紫外分光光度法测定维生素 C 片中的 VC含量 一、实验目的 1、了解紫外分光光度计的主要结构及工作原理。2、掌握紫外分光光度计的操作方法及紫外定性定量分析方法 3掌握紫外分光光度法测定水中维生素 C 含量的原理与分析条件的选择。二、实验原理 维生素 C是人体重要的维生素之一，它影响胶元蛋白的形成，参与人体多 种氧化-还原反应,并且有解毒作用。人体不能自身制造 Vc，所以人体必须不断 地从食物中摄入 Vc，通常还需储藏能维持一个月左右的 Vc。缺乏时会产生坏血 病，故又称抗坏血酸。维生素 C 属水溶性维生素，分子式 C6H8O6。分子结构中具有二烯醇结构，其结构 如下：它易溶于水，微溶
2、于乙醇，不溶于氯仿或乙醚。分子中的二烯醇基具极强的还原 性，性质活泼，易被氧化为二酮基而成为脱氢抗坏血酸。维生素 C 分子结构中 有共轭双键，固在紫外光区有较强的吸收。根据维生素 C 在稀盐酸溶液中，Vc 吸收曲线比较稳定，在最大吸收波长处，其吸收值 A的大小与维生素 C的浓度 c 的大小成正比，符合郎伯比尔定律：A=bc 其中 A为吸收度；c 为试样中维生素 C的浓度，molL-1；b 为吸收池厚度，cm；为摩尔吸收系数，Lmol-1cm-1。若在最大吸收波长下，首先绘制出维生素 C 在最大吸收波长下的标准曲线，然后在相同条件下测定出吸光度 A，由测得的吸 光度 A在标准曲线上查得浓度,换算
3、为药品中含量（mg/片）。三、实验仪器与试剂 1仪器 TU1810型紫外分光光度计。电子天平 1 台，研钵 1 个，50mL容量 瓶7只和 500mL容量瓶 1只,10mL 移液管 2支，100 mL、1000 mL烧杯 2只。2试剂 维生素 C标准品（抗坏血酸），市售维生素 C含片（100mg/片），冰 醋酸，蒸馏水。四、实验步骤 1.配制维生素 C标准贮备液 500mL（浓度约为 1.5 10-4mol/L）:称取约 0.0132g 维生素 C 标准品于 100mL的烧杯中，用超声波助溶后定容于 500mL容量瓶中，摇匀，配成贮备液。2.配制标准系列：分别吸取上述贮备液 1.00、2.00
4、、4.00、8.00、16.00mL于 50mL容量瓶中，用蒸馏水定容。3.确定最大吸收 以蒸馏水为参比，在 320220nm范围内测出维生素 C 的吸收光谱，并确定 最大吸收波长。4.绘制标准曲线 以蒸馏水为参比，用上述标准系列溶液在 max 处分别测出吸光度，并绘制 标准曲线。5样品测定 光光度计的操作方法及紫外定性定量分析方法掌握紫外分光光度法测定水中维生素含量的原理与分析条件的选择二实验原理维生素是人体重要的维生素之一它影响胶元蛋白的形成参与人体多种氧化还原反应并且有解毒作用人体不能酸维生素属水溶性维生素分子式分子结构中具有二烯醇结构其结构如下它溶于水微溶于乙醇不溶于氯仿或乙醚分子中的
5、二烯醇基具极强的还原性性质活泼被氧化为二酮基而成为脱氢抗坏血酸维生素分子结构中有共轭双键固在紫外光的大小成正比符合郎伯比尔定律其中为吸收度为试样中维生素的浓度为吸收池厚度为摩尔吸收系数若在最大吸收波长下首先绘制出维生素在最大吸收波长下的标准曲线然后在相同条件下测定出吸光度由测得的吸光度在标准曲线上查取 3片 Vc片剂研细,准确称取 0.02g 于 100mL烧杯中,以去离子水稀释至 500mL。移取样品溶液 5.00mL于 50mL容量瓶中,定容。在 m ax处测吸光度。五、实验结果和讨论 1.绘制吸收曲线，确定最大吸收波长。2.以标准溶液浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线图。3
6、.在标准曲线的纵坐标上找到试液的吸光度，然后在横坐标处查得相应 的浓度。4.计算维生素片剂中 VC的含量。六、注意事项 1.维生素 C会缓慢氧化成脱氢抗血酸，所以每次实验时必须配制新鲜溶液，并滴加几滴醋酸。2.使用石英比色皿。3.实验结束时，先关氘灯，再关主机电源开关。七、思考题 1.具有哪些结构特征的有机物常在紫外光区有吸收?2.VC 结构中有哪些生色团？那些助色团？VC 光光度计的操作方法及紫外定性定量分析方法掌握紫外分光光度法测定水中维生素含量的原理与分析条件的选择二实验原理维生素是人体重要的维生素之一它影响胶元蛋白的形成参与人体多种氧化还原反应并且有解毒作用人体不能酸维生素属水溶性维生素分子式分子结构中具有二烯醇结构其结构如下它溶于水微溶于乙醇不溶于氯仿或乙醚分子中的二烯醇基具极强的还原性性质活泼被氧化为二酮基而成为脱氢抗坏血酸维生素分子结构中有共轭双键固在紫外光的大小成正比符合郎伯比尔定律其中为吸收度为试样中维生素的浓度为吸收池厚度为摩尔吸收系数若在最大吸收波长下首先绘制出维生素在最大吸收波长下的标准曲线然后在相同条件下测定出吸光度由测得的吸光度在标准曲线上查