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1、血清天门 冬氨酸氨基转移酶速率法测 定作业指 导 书1 .实验原理Vitros AST试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干 片。将一滴患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。在 磷酸毗哆醛的催化作用下，谷草转氨酶使天门冬氨酸的氨基向酮戊二酸转移生成谷氨 酸和草酰乙酸，草酰乙酸在草酰乙酸脱羟酶的作用下生成丙酮酸和二氧化碳。随后丙酮酸 被丙酮酸氧化酶氧化生成乙酰磷酸酶和过氧化氢。最后是过氧化氢与白色染剂在过氧化物 酶的催化下生成一种有色染剂。在37c用反射仪可以测定白色染剂的氧化率，然后再将某 一线性范围内反射强度变化率转化为以U/L为单位的酶
2、活性度。干片支撑层上的短波滤光 剂可以减少入射光在有色染剂形成过程中的影响。测定方式：速率法波长：670nm测试时间和温度：37约5分钟反应过程：AST,磷酸毗哆醛天门冬氨酸+ 酮戊二酸草酰乙酸+谷氨酸草酰乙酸脱羟酶草酰乙酸丙酮酸+二氧化碳丙酮酸氧化酶丙酮酸+磷酸盐+02*过氧化氢+乙酰磷酸酶过氧化物酶过氧化氢+白色染剂有色染剂2 .标本：2. 1病人准备：无特殊。2.2样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。2. 3标本采集与处理：样品采集后3天内以1000g最少离心10分钟，然后吸出血清。特 别要注意：样品不能含细胞物质，因为血小板中AST活性也很高，既使离心不足10分钟 的新鲜血浆与新鲜血清
3、的测试结果相比都有很大差异。处理样品时要将其当成生物污染品。 3,标本的存放：血清、血浆室温下最多3天；48冷臧最多1周；样品冷冻保存可达3 个月。4 .标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。5 .标本拒收的标准：由于用草酸钾/氟化钠，枸掾酸和EDTA抗凝的标本结果负偏差50%, 因此不能使用。此外，因为红细胞中AST活性很高，溶血标本也不能使用。6 .试验材料：6. 1测试AST所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3； Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA 稀释液。xx厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期 限和储藏温度。6.
4、 1. 1试剂组成：干片成分：反应成份是天门冬氨酸钠；a 一酮戊二酸钠；磷酸叱哆醛钠； 磷酸钠；2- （3, 5一二氧甲基一 4 一羟苯）一4,5一二（4 一甲氨基）咪唾（白色染料）；氧 化丙酮酸；过氧化物酶以及草酰乙酸脱羟酶。其它成份有酶辅助因子，染色剂，粘合齐I， 缓冲剂，表面活性剂，稳定剂，染料溶剂，滤色剂，净化剂及聚合物交叉连接剂。干片标 记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。6. 1. 2试剂准备：从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器 之前必须使其达到室温状态18-28o因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放置 60分钟
5、，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。去除内包装后立即将干片盒放入 仪器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24小时之内必须将其装入仪器中。6. 1. 3试剂稳定性与贮存未开封的干片盒：存储在-18或低于该范围。说明：为了缩短预温时间或者当冷冻 空间有限时，未开封的试剂盒在28 （3646OF）下最多可以冷藏三个月。在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过2周，否则要更换新试剂。 当仪器关闭时间不超过2个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下情形要做质控检 测：仪器关闭时间超过2小时；再次装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确， Vitros AST干片可保质到包装
6、盒上标明的有效期限。参见VITROS 250干化学分析仪试剂 稳定性及贮存.SOP文件。6. 1.4变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。6. 1. 5注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干片盒；不要让尖利物 刺入内包装。6. 2校准品：用Vitros化学定标物Kit3。血清、血浆都用相同的定标液，不过各自的SAVs 值不同。有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITR0S250 干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：使用Vitros特制的质控物品；若使用其它的一些质控物品，当与别的AST 测试方法比较时就会出现差异，如：用人血清/血浆
7、混合物分离制成的质控物品；含有高 浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂的质控物品；猪或牛血清质控品的淀粉酶值会偏低，还会因测试方法不同而变化；酶的活性可能会由于酶源，稀释温度和复溶活化时间的不同 而发生变化；乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使用。有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITR0S250干化学分析仪校准品和质 控品.SOP文件。7 .仪器美国XX厂家VITR0S250全自动干式生化分析仪。具体测试程序请参阅操作手册的介 绍。8 .操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器5分后自动打印结果。具体 测试程序请参阅VITR0S250操作手册.SOP。具体定标程序：参阅操作手
8、册的相关章节内容。 何时进行定标：一一在维护和保养时更换了仪器的重要部件。一一质控结果持续超出线性 范围内时，详情参阅操作手册。管理条例上指定的时间，在美国，CLIA要求至少每6 个月定标一次。9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制.操作建议：将质控物质当成生物污染品来处理；将质控液与患者样品同时 进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关 性；其它详情参阅操作手册质控章节的有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际 质控检测(IQCT)的内容。在每一批标本中都应把质控血清做为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限，3s为失控限，绘制质控图，判断是否在
9、控。质控规则参见生化室室内质控 操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以用Vitros化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直 接报告可靠的检测结果，以U/L报告。12 .参考值范围 国际单位(U/L)成人15-46女性14-36男性17-59此参考范围是测试189位健康成人，然后取靶值附近95%的结果计算所得。参考值因 性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自 己的参考值。13 .临床意义.谷草转氨酶在人体的心脏，骨骼肌和肝脏中活性较高。心肌梗塞，肺栓塞， 骨骼肌创伤，酒精性肝硬化，病毒性肝炎和药物引发的肝炎多造成血清中谷草转氨酶活性 上升
10、。14 .操作性能15 . 1线性范围 血清/尿液：3. 0-750U/Lo14. 2精密度：在Vitros 250生化仪上用质控液来测精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都 会影响结果的重复性。日间精密度血清X(U/L)S(U/L)CV(%)室间精密度 n = 31 天X(U/L)S(U/L)CV (%)样品1n=238290. 5样品1290. 72. 4样品2 n=2342543. 1样品22544. 31. 7样品3n = 23682727. 9样品382728. 83. 5*日间精密度是将2至3份相同的样品在一
11、天中运行两次，然后对测试结果进行统计 计算。*室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进行统计计算。 14. 3方法学比较：用Vi tros700仪器和IFCC参考方法分别测试相同血清样品，对比结果显示Vi tros方 法的准确度良好。用Vitros250仪器与Vitros700仪器测试相同的血清样品，对比结果显 示 Vitros250 方法的准确度良好，血清：Y= 1. 03X-6. 54（ r = 0. 999, N = 60,检测范围 15-644U/L）。 14.4灵敏度：本试剂的检测下限为血清为3U/L。14. 5特异性：经测试，以下物质对Vitros AST干片法
12、均无干扰（偏差5. 4U/L）。乙酰乙 酸20mg/dl 扑热息痛20mg/dL丙酮60mg/dL阿司匹林35mg/dL阿昔洛韦10mg/dL 硫酸舒喘宁1. 84ug/mL别口票醇5mg/dL三噪安定0. 02mg/dL、硫酸阿米卡星40mg/dL 两性霉素B3. 5mg/dL、氨卞青霉素200mg/dL、盐酸阿米替林2. 5ug/mL、抗坏血酸盐6mg/dL、 硫哇喋吟Img/dL、叠氮胸背30mg/dL未结合胆红素20mg/dL咖啡因35mg/dL 卡托普 利2mg/dL卡马西平12mg/dL.头抱唾咻400mg/dL头抱曲松250mg/dL氯霉素25mg/dL 利眠宁2mg/dL盐酸普
13、鲁卡因10ug/dL、胆固醇340 mg/dL.西咪替丁 10mg/dL,克林霉 素 20mg/dL 可乐定 0. 2ug/mL 可待因 1. 7mg/dL 可的素 0. 23mg/dL 环胞菌素 4ug/mL 地塞米松1.35ug/mL、安定2mg/dL、地高辛4ug/mL、地尔硫卓0.2mg/dL、苯海拉明7mg/dL 安乃近50mg/dL,多巴胺3ug/mL,红霉素20mg/dL、乙醇394mg/dL,氟安定15mg/dL.吠 塞米10mg/dL、焦硫酸盐50mg/dL、庆大霉素12mg/dL、龙胆酸25mg/dL等等。14 . 6病人结果可报告范围：血清3-750U/L。15 .超出范
14、围结果处理：本法线性上限为血清750U/Lo如果样品中AST浓度超出系统的测 试线性范围，请按下列步骤进行稀释：用7% BSA稀释样品；重新测试；将测试结果乘以 稀释倍数，就得到原始样品中AST的活性；如果样品中AST的活性仍然超出系统的线性范 围，加大稀释倍数，重新测试，然后将测试结果乘以新的稀释倍数。16 .病危报警值的处理17 .方法局限性17 . 1本法线性上限为血清750U/L。如果样品中AST浓度超出系统的测试线性范围，请按 下列步骤进行稀释：用7% BSA稀释样品；重新测试；将测试结果乘以稀释倍数，就得到 原始样品中AST的活性；如果样品中AST的活性仍然超出系统的线性范围，加大
15、稀释倍数， 重新测试，然后将测试结果乘以新的稀释倍数。18 . 2干扰物质：我们对Vitros AST方法的干扰物质进行了筛查，下列物质在表中所示浓 度会引起一定的结果偏差。在妥拉磺胭浓度为40mg/dL, AST浓度为25U/L时，平均偏差 -16U/L；在乙酰半胱氨酸（NAC）浓度为180mg/dL, AST浓度为25U/L时，平均偏差-8U/L。 有些药物和患者自身状况也会影响AST的测试值。19 .补救措施：仪器出了故障可联系仪器厂家，进行紧急修理，如一时不能修好，用OLYMPUS AU1000生化分析仪测定病人标本。20 .参考文献xx厂家提供的方法学手册20其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处理.SOP文件处理。