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1、血清天门冬氨酸氨基转移酶血清天门冬氨酸氨基转移酶 IFCCIFCC 推荐方法测定作业指导书推荐方法测定作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理： 国际临床化学学会 (IFCC)推荐的紫外 连续监测法。 L-天门冬氨酸 + -酮戊二酸 AST 草酰乙酸 +L-谷氨酸 草酰乙酸 + NADH +H+ MDH 苹果酸脱氢酶 L-苹果酸 +NAD+H2O 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备： 12 小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。 3 3. . 标标本本存存放放： 3 天内的活性损失： 28保存： 8%；1525保存： 10%；标本稳定性： -20保存 至少可稳定 3
2、个月。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 标本溶血、细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂：申能 AST 测定试剂盒（货号： 141 26017170 1 试剂 1：664ml；试剂 2：616ml） 6.1.1 试剂组成 试剂 1（R1）： Tris 缓冲液 pH7.8 80mmol/L L-天门冬氨酸 240mmol/L MDH(苹果酸脱氢酶 ) 600U/L LDH(乳酸脱氢酶 ) 600U/L 试剂 2(R2)： a-酮戊二酸 12mmol/L NADH 0.18mmol/L 磷酸吡哆醛试剂： Go
3、ods 缓冲液 pH9.6 0.7mmol/L 磷酸吡哆醛 0.09mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 试剂保存于 28，若无污染，可稳定至失效期。 试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防 腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的 预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用 DiaSys 公司提供的 TruCal U 校准 品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和 质控品 .SOP
4、 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪项目测定参数 .SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪操作规程 .SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质
5、控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal U 复合校准品 AST 校准值 校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告 可靠的检测结果。不使用校准品进行AST 活力检测， 可以直接使用 A/min 均值乘以计算因子得到结果， 但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算 ALT 活力的计算因子见下表： A A/ /m mi in n因因子子 = = A AS ST T 活活力力 U U/ /L L 底物起始的反应（ 37） 样品起始的反应 （37） 340 nm 2143 1745 334 nm 2184 1780 365
6、nm 3971 3235 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 4 不含磷酸吡哆醛 含磷酸吡哆醛 女性 31U/L 1035U/L 男性 37U/L 1050U/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 1 1, ,2 2 丙氨酸氨基转移酶（ ALT）旧称谷丙转氨酶 （GPT） ，天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草转 氨酶（ GOT） 。它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基转 移酶催化氨基从氨基酸转移给-酮酸的反应。 ALT 是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。 而 AST 水平
7、的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损 害等都有关。因此同时进行ALT 和 AST 的检测用于鉴 别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT 比率可用于 肝病的鉴别诊断。比率 1 和严重肝病有关，常见慢性肝病。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围 2-800U/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 不含磷酸吡哆醛 批内精密 度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 天间精密 度 n=20 x (U/L)
8、 s (U/L) CV (%) 样品 1 25.10.823.25 样品 1 25.71.134.40 样品 2 51.31.573.06 样品 2 48.60.671.38 样品 3 1160.900.77 样品 3 1150.800.69 含磷酸吡哆醛 批内精密 度 x (U/L) s (U/L) CV (%) 天间精密 度 x (U/L) s (U/L) CV (%) n=20n=20 样品 1 43.61.102.51 样品 1 44.01.593.61 样品 2 74.51.792.41 样品 2 77.03.053.97 样品 3 1743.181.83 样品 3 1873.371
9、.80 14.3 方法学比较：不含磷酸吡哆醛 本公司不含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试 剂盒(x)，同时对 78 个样品进行 AST 活力检测，将检 测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.98x- 0.51U/L；r =0.999。 含磷酸吡哆醛 本公司含磷酸吡哆醛 的试剂盒 (y)与某商品化试剂 盒(x)，同时对 80 个样品进行 AST 活力检测，将检测 结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.97x- 0.79U/L；r=0.995。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为2U/L。 14.5 病人结果可报告范围 2-800U/L。 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果
10、处处理理： 本法对 AST 活力检测的最大 A/min 在 340、334nm 为 0.16，在 365nm 为 0.08。 当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠 溶液作 1+9 稀释，重新测定，结果乘以10。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理 无。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法对 AST 活力检测的最大 A/min 在 340、334nm 为 0.16,在 365nm 为 0.08。当样品测定值 超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液作 1+9 稀 释，重新测定，结果乘以10。 17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度 170
11、4mol/L，胆红素浓度 684mol/L，甘油三酯浓 度22.6mmol/L 时没有观察到干扰。红细胞内富含 AST，因此溶血血清检测结果明显偏高。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献： 1.Thomas L. Alanine aminotransferase(ALT), Aspartate aminotransferase (AST) . In： Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt： TH-Books
12、 Verlagsgesellschaft; 1998.p.55-65. 2.Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In： Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia： W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721. 3.Bergmeyer HU, Horder M, Rej R. International Federation of Clinical Chemistry (
13、IFCC) Scientific Committee, Analytical section： approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 3. IFCC method for alanine aminotransferase(L-alanine： 2- oxoglutarate aminotransferase, EC 2.6.1.2). J Clin Chem Clin Biochem 1986; 24：481-95. 4. Lorentz K, Rohle G, Siekmann L. Einfuhrung der neuen Standardmethoden 1994 zur Bestimmung der katalytischen Enzymkonzentrationen bei 37. DG Klinische Chemie Mitteilungen 1995;26：190-2 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。