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1、微生物的培养需要适宜条件微生物的培养需要适宜条件微生物培养基无菌技术大肠杆菌菌落电镜下新冠病毒高倍光学显微镜下的酵母菌人们为满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的需求而配置的混合人们为满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的需求而配置的混合养料。养料。只培养目标微生物，排除非目标微生物的干扰。只培养目标微生物，排除非目标微生物的干扰。人们对所有形体微小、肉眼不可见的生物的统称。人们对所有形体微小、肉眼不可见的生物的统称。成分作用主要来源碳源氮源无机盐水生长因子一、成分一、成分培养基主要作能源物质无机碳(CO2)或有机碳(糖类)合成蛋白质等有机物N2，NH3，铵，硝酸盐尿素，牛肉膏，蛋白胨调节渗透压等Na
2、Cl、CaCl2作为溶剂调节促生长维生素，氨基酸，碱基等不同种类的微生物代谢特点不同，请问不同的微生物对培养基中营养物质的需求是否相同？思考？自养型自养型微生物异养型异养型微生物碳源可来自大气中的COCO2 2碳源必须由含碳有机物提供，如蔗糖、葡萄糖等不能固氮微生物固氮固氮微生物如衣藻、硝化细菌等如根瘤菌等氮源可来自大气中的N2、硝酸盐、NH3等氮源必须由含氮有机物提供，如尿素、牛肉膏等特殊需求：特殊需求：满足微生物对 _的需求培养培养厌氧微生物厌氧微生物时，需要时，需要提供提供_的条件。培养培养乳酸杆菌乳酸杆菌时，需要在培养基中添加时，需要在培养基中添加_；培养培养霉菌霉菌时，需要将培养基调
3、至时，需要将培养基调至_；培养培养细菌细菌时，需要将培养基调至时，需要将培养基调至_；维生素维生素酸性中性或弱碱性无氧pH、特殊营养物质、氧气细菌喜荤，霉菌喜素细菌喜荤，霉菌喜素 细菌中性偏碱，霉菌中性偏酸细菌中性偏碱，霉菌中性偏酸 分类依据种类特点应用物理性质化学成分用途二、培养基的分类二、培养基的分类液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂（加凝固剂（琼脂琼脂）工业生产工业生产微生物的分离、鉴定、微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏活菌计数、保藏天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基含化学成分不明的天然物质含化学成分不明的天然物质培养基成分明确或培养基成分明确或
4、用一定化学物质配制用一定化学物质配制选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基添加某物质添加某物质，抑制杂菌生长，抑制杂菌生长，促进所需微生物生长促进所需微生物生长根据微生物的代谢特点，在根据微生物的代谢特点，在培养基中培养基中加入某种指示剂加入某种指示剂或或化学药品化学药品培养培养分离出特定微分离出特定微生物生物鉴别微生物鉴别微生物工业生产工业生产分类、鉴定分类、鉴定液体培养基和固体培养基液体培养基和固体培养基液体培养基固体培养基在液体培养基中加入琼脂后制成的在液体培养基中加入琼脂后制成的琼脂固体培养琼脂固体培养基基，是实验室中最常用的培养基之一，是实验室中最常用的培养基之一呈液态状态呈液态状
5、态菌落微生物在琼脂固体培养微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长形成基表面或内部生长形成肉眼可见的肉眼可见的菌落菌落1.蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化纳 0.5g，1g琼脂，加水50mL配制的LB培养基属于何种类型？思考？2.尿素CO(NH2)2含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的些细菌分解成NH3,NH3再转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3,NH3可作为细菌生长的氮源。讨论1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方
6、该如何设计？2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？设计一种选择培养基选择培养基，用尿素作为唯一氮源尿素作为唯一氮源，可以将分解尿素的细菌分离出来这种培养基与普通培养基相比，区别只是用尿素作为唯一氮源，培养基的其区别只是用尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分基本相同他营养成分基本相同。三、无菌技术三、无菌技术1.1.概念：概念：_的培养微生物的操作技术的培养微生物的操作技术3.3.手段：手段：主要包括主要包括_和和_。（1）对实验操作的）对实验操作的_、操作者的、操作者的_，进行，进行清洁清洁和和消毒消毒。（2）将用于微生物培养的）将用于微生物培养的_、_和和_等进行等进行灭菌灭菌。防
7、止杂菌污染防止杂菌污染消毒消毒灭菌灭菌空间空间衣着和手衣着和手器皿器皿接种用具接种用具培养基培养基2.2.目的：目的：（1 1）防止培养物被污染）防止培养物被污染（2 2）防止感染实验操作者）防止感染实验操作者煮沸消毒巴氏消毒100煮沸5-6min70-75 30min /8015min紫外线消毒化学药剂消毒酒精、氯气等消毒剂紫外线照射30min化学药剂消毒消毒消毒消毒消毒（1）概念：）概念：指使用指使用较为温和较为温和的的物理、化学或生物等方法物理、化学或生物等方法杀死物体表杀死物体表面或内部面或内部一部分微生物一部分微生物。（2）常用的消毒方法）常用的消毒方法煮沸消毒法煮沸消毒法：1001
8、00煮煮沸沸5 56min6min，可可以以杀杀死死微微生生物物的的营营养养细细胞胞和和一部分芽孢。一部分芽孢。巴氏消毒法巴氏消毒法：62626565下消毒下消毒30min30min或或80809090处理处理30s30s1min1min适合一些适合一些不耐高温的液体不耐高温的液体，如牛奶。可以杀死牛奶中的绝大多，如牛奶。可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且不破坏牛奶的营养成分。数微生物，并且不破坏牛奶的营养成分。用用70%70%酒精擦拭双手酒精擦拭双手、用、用氯气消毒水源氯气消毒水源等。等。化学药剂消毒法化学药剂消毒法:紫外线消毒法紫外线消毒法：接种室、接种箱或超净工作台在使用前可接种室、接
9、种箱或超净工作台在使用前可用紫外用紫外线照射线照射30min30min。可杀死物体表面和空气中的微生物。在照射前，。可杀死物体表面和空气中的微生物。在照射前，适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。使用前将实验工具放到超净工作台上，打使用前将实验工具放到超净工作台上，打开紫外灯和过滤风，灭菌开紫外灯和过滤风，灭菌30min30min。超净工作台灭菌灭菌（1）概念：）概念：指使用指使用强烈的理化方法强烈的理化方法杀死物体内外杀死物体内外所有的微生物，包所有的微生物，包括芽孢和孢子括芽孢和孢子。（2）常用的灭菌方法）常用的灭菌方法
10、高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌：以水蒸气为介质，在压力以水蒸气为介质，在压力100kPa100kPa、温度、温度121121条件下，维持条件下，维持151530min30min来灭菌的来灭菌的工具为工具为高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅，常用于培养基、无菌水等的灭菌，常用于培养基、无菌水等的灭菌。灼烧灭菌：灼烧灭菌：直接在酒精灯火焰的充分燃烧层（外焰）灼烧直接在酒精灯火焰的充分燃烧层（外焰）灼烧，可以迅速彻底，可以迅速彻底地灭菌。地灭菌。适用于微生物的接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其它适用于微生物的接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其它金属用具，试管口、瓶口等容易被污染的部位金属用具，试管口、
11、瓶口等容易被污染的部位高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅操作步骤操作要领加水将内层灭菌桶取出，向外层锅内加水，水面与三角形搁架平齐装锅将灭菌物品放在灭菌桶中将灭菌物品放在灭菌桶中(不要装得太满不要装得太满)，加盖，对称固定螺栓，加盖，对称固定螺栓加热排气加热排气加热加热灭菌锅，灭菌锅，打开排气阀，等冷空气完全排尽后，关闭排气阀打开排气阀，等冷空气完全排尽后，关闭排气阀保温保压100 kPa、121 下，保温保压1530 min出锅出锅 1.关闭电源关闭电源 2.2.压力表降至压力表降至“0”0”点，点，（温度下降）打开排气阀打开排气阀，3.旋开固定螺栓，取出灭菌物品高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法高压蒸
12、汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅培养皿试管三角瓶移液枪枪头移液管涂布器接种环原理：G6玻璃砂漏斗孔径小,细菌不能滤过G6玻璃砂漏斗适用于化合物在较高温度下会分解的物质。如含尿素的培养基。适用于化合物在较高温度下会分解的物质。如含尿素的培养基。消毒与灭菌比较消毒与灭菌比较 无菌技术无菌技术对比项目对比项目消毒消毒灭菌灭菌技术方法特点技术方法特点杀菌程度杀菌程度常见杀菌对象常见杀菌对象常用方法常用方法较温和较温和强烈强烈物体表面或内部一部物体表面或内部一部分微生物分微生物物体内外所有微生物物体内外所有微生物（包括（包括芽孢和孢子芽孢和孢子）操作空间、操作者衣着操作空间、操作者衣着和手和手培养器皿、接种用具培
13、养器皿、接种用具和培养基和培养基煮沸消毒、巴氏消毒、煮沸消毒、巴氏消毒、紫外线消毒、消毒液消紫外线消毒、消毒液消毒毒高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌过滤灭菌灭菌方法适用材料或用具灭菌条件灭菌时间灼烧灭菌 高压蒸汽灭菌 G6玻璃砂漏斗常用灭菌方法的比较接种环、接种针或其他金属用具在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧直至烧红操作器具、普通培养基等1kg/cm2,121 15min500g/cm2,90以上 30min尿素、酶等化学物质选择不同孔径的型号含葡萄糖培养基等四、倒平板和制备斜面培养基四、倒平板和制备斜面培养基倒平板的步骤既可以防止培养基表面的水分既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖
14、上的水挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。珠落入培养基，造成污染。搁置斜面五、接种五、接种灼烧接种环，直至灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红接种环金属丝烧红在火焰旁冷却接种环，拔在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞出酵母菌培养液试管的棉塞试管口通过火焰试管口通过火焰在火焰附近用接种在火焰附近用接种环蘸取一环菌液环蘸取一环菌液试管口通过火焰，试管口通过火焰，并塞上棉塞并塞上棉塞将皿盖打开将皿盖打开一条缝隙，一条缝隙，用用接种环接种环在培养在培养基表面迅速基表面迅速划划三至五三至五条平行条平行线，盖上皿盖线，盖上皿盖接种是使目标微生物在配制好的培养基上生长的操作六、配制可用于
15、培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基六、配制可用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基20%马铃薯蔗糖培养基的配方：去皮马铃薯丝（或小块）20g,蔗糖2g，琼脂1.52g，水100mL(自然pH)。1.20%马铃薯浸汁为酵母菌生长提供了哪些成分？2.蔗糖属于该培养基的什么成分？3.琼脂的作用？4.琼脂可以作为酵母菌生长的碳源吗？水、碳源、氮源、无机盐、生长因子碳源作为凝固剂不能，酵母菌没有分解琼脂的酶思考思考讨论1.你认为生活中的哪些现象会使人联想到用马铃薯浸汁制备培养基？2.本实验中，煮沸后的马铃薯浸汁为酵母菌的生长提供了哪些成分？3.培养基中的琼脂能否成为酵母菌生长的碳源？在生活中人们可以见到久置的煮熟马铃薯上长出微生物，这意味着马铃薯能为微生物的生长提供它们所需的营养物质。本实验中，煮熟后的马铃薯浸汁给酵母菌的生长提供了水、碳源、氮源、无机盐、生长因子等成分。琼脂不会被酵母菌分泌的酶所分解，所以琼脂不能成为酵母菌生长的碳源。