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1、专题十六生物技术实践考纲专题解读考点分布考题示例考查内容考试指导传统发酵技术i i i i2017 课标 H,374 5 分微生物发酵选修内容的考查方式略有变化，有选修与必修知识综合考查的趋势。考查形式也略有变化，减少了填空题，增加了问答题，有侧重考查学生的关键能力、核心素养的趋势。选修对必备知识的考查倾向于综合性、应用性、创新性。微生物的分离与培养、培养基对微生物的选择作用仍是高考命题的热点，试题常用创设情境、联系生产生活实际的方式加以考查2016 课标 n,39果酒和果醋的制作2013 课标 I,39泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定微生物的培养与应用 .2017 课标 I,37105分微生物的培
2、养、培养基对微生物的选择作用2016 课标 I,39微生物的培养、微生物数量的测定2016 课标HI,39微生物的分离与培养2015 课标 I,39培养基对微生物的选择作用、微生物数量的测定2014 课标 I,39微生物的分离与培养、培养基对微生物的选择作用2014 课标 H,39微生物的培养、微生物数量的测定2013 课标 H,39微生物的分离与培养、培养基对微生物的选择作用生物技术在其他方面的应用444A2017 课标m,373 0 分从生物材料中提取特定的成分2015 课标 II,39从生物材料中提取特定的成分考点各个击破V传统发酵技术第 c步试真题1.（2 0 1 7.课标H,3 7,
3、1 5 分）豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并在3 2 h内定期取样观测发酵效果。回答下列问题：（1）该 实 验 的 自 变 量 是、o（2）如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是（3）如果在实验后，发现3 2 h内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事情是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
4、 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _（4）从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质转变为，脂肪转变为 o【答案】（1）菌 种 发 酵 时 间（2）好 氧 菌（3）延长发酵时间，观测发酵效果,最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间（4）氨基酸和肽脂肪酸和甘油2.（2 0 1 6 课标H,3 9,1 5 分）苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的，回答下列问题：（1）酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。图中过程和是苹果醋生产的第一阶段，在酵母菌细胞的 中进行，其产物乙醇与 试剂反应呈现灰绿色，这一反应
5、可用于乙醇的检验；过程在酵母菌细胞的中进行，与无氧条件相比，在有氧条件下，酵母菌的增殖速度 O(2)第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，根据醋酸杆菌的呼吸作用类型，该过程需要在 条件下才能完成。(3)在生产过程中，第一阶段和第二阶段的发酵温度不同，第一阶段的温度(填“低于”或“高于”)第二阶段的。(4)醋酸杆菌属于 核生物，其 细 胞 结 构 中(填“含有”或“不含有“)线粒体。【解析】图示过程和分别表示无氧呼吸的第一、二阶段，场所均为细胞质基质，橙色的重铭酸钾溶液，在酸性条件下与乙醇发生化学反应，变为灰绿色。过程表示有氧呼吸的第二、三阶段，均在线粒体中进行。与无
6、氧条件相比，有氧条件下产生的能量更多，酵母菌的增殖速度快。(2)醋酸杆菌是一种好氧菌，在氧气充足的条件下才能进行旺盛的生命活动，将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，需栗在有氧条件下才能完成。(3)第一阶段即果酒的制作，所控制的温度范围是1825;第二阶段即果醋的制作，所控制的温度范围是3035 C,所以第一阶段的温度低于第二阶段的。(4)醋酸杆菌属于原核生物，其细胞结构中不含线粒体等复杂的细胞器。【答案】(1)细 胞 质 基 质 重 铭 酸 钾 线 粒 体 快(2)有 氧(3)低 于(4)原 不 含 有3.(2013课标I,39,15分)回答下列有关泡菜制作的问题：(1)制作泡菜时，所用盐水
7、需煮沸，其目的是。为了缩短制作时间，有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的作用是(2)泡菜制作过程中，乳酸发酵的过程即为乳酸菌进行 的过程。该过程发生在乳酸菌细胞的 中。(3)泡 菜 制 作 过 程 中 影 响 亚 硝 酸 盐 含 量 的 因 素 有、和等。(4)从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸。这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是，原因是。【答案】（1）杀 灭 杂 菌 增 加 乳 酸 菌 数 量（2）无 氧 呼 吸 细 胞 质（3）温度腌 制 时 间 食 盐 用 量（4）乳酸菌数量增多，杂菌数量减少乳酸菌比杂菌更为耐酸第 步 理 能 力一、与传统
8、发酵有关的几种微生物的比较项目酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物学分类真核生物原核生物真核生物原核生物生活方式异养兼性厌氧异养需氧异养需氧异养厌氧适宜温度_ _发酵条件_一直需氧一直需氧_主要用途酿酒、发面酿醋制作腐乳制作酸奶、泡菜二、果酒和果醋的制作1.果酒、果醋的制作原理及发酵条件比较项目果酒制作果醋制作制作原理菌种酵母菌醋酸菌反应式有氧条件下，大量繁殖：C6Hl 2。6+6。2-*6c。2+6H2。；无氧条件下，酒精发酵：C6H l 2。6 2c2H50H+2CO2氧气、糖源充足时：C6H|2O6+O2-CH3coOH；缺少糖源、氧气充足时：C2H5OH+O2 CH3COOH+H2O发酵条件温度
9、酒精发酵的适宜温度为1825;繁殖的最适温度为_ _ _ _ _ _ _ _ 左右最适生长温度为3035 p H耐酸耐酸氧气前期需氧，后期不需氧需要充足氧气时间10-12 d7-8 d2.发酵装置发酵进程的检测通过观察、嗅、尝进行直观检测，也可通过显微镜观察酵母菌形态和数目检测，也可用橙色的_ _ _ _ _ _ _ _ 在浓硫酸酸化下与酒精发生_ _ _ _ _ _ _的颜色反应的程度检测通过观察变酸的酒的表面菌膜的形成、嗅、尝直观检测，也可用_ _ _ _ _ _ _ _比较醋酸发酵前后的pH检测，还可通过显微镜观察并统计醋酸菌数目检测制作流程图挑选葡萄f冲洗f榨汁f酒精发酵f醋酸发酵1
10、1果酒 果醋发酵装置图部位操作充气口审个尸充气口制 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 时关闭充气口，制_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 时连接充气泵输入无菌空气排气口CH出料口长而弯曲的胶管出料口便于取料，及时监测发酵进行的情况a带盖的瓶子在发酵过程中，每隔12h左右将瓶盖拧松一次，以放出C02,此后再拧紧瓶盖。当发酵产生酒精后，再将瓶盖打开，盖上一层纱布，进行制葡萄醋的发酵3.操作注意事项项目注意事项材料的选择与处理选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗，除去灰尘和杂物的同时保留野生菌种，然后除去枝梗，以防葡萄汁流失及污染防止发酵液被污染(1)榨汁机要清洗干净，并晾干
11、发酵瓶等要清洗干净,用体积分数为_ _ _ _ _ _ 的酒精进行消毒，或用洗洁精洗涤清洗葡萄时要先清洗后除枝梗(4)发酵瓶排气管用曲颈管不用直管，可有效防止空气中微生物进入造成的污染装入葡萄汁后，封闭充气口发酵条件的控制(1)葡萄汁装入发酵瓶时，要留约_ _ _ _ _ _ 的空间，目的是先让酵母菌进行有氧呼吸，快速繁殖，耗 尽。2后再进行酒精发酵，还能防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液的溢出在制葡萄酒时，要将温度严格控制在18 25 C,时间控制在_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _左右，需封闭充气口(3)在制葡萄醋时，要将温度严格控制在30 35 C,时间控制在_ _ _ _
12、 _ _ _ _ _ _ _ _左右，并注意适时通过充气口充气思 维 拓 展ffln ffliffl(1)在葡萄酒的自然发酵过程中，起主要作用的是_O(2)为了提高果酒的品质，更好地抑制其他微生物的生长，可以在果汁中加入_ O(3)在发酵过程中，随着酒精度数的提高，也进入发酵液，使葡萄酒呈现深红色。(4)葡萄皮上除有酵母菌外，还有其他杂菌，但制葡萄酒时一般不会引起杂菌污染，原因是在 的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制，且酒精的产生也不利于其他杂菌生长。针对训练1 (2016天津理综，10,12分)天津独流老醋历史悠久、独具风味，其生产工艺流程如下
13、图。|淀 粉 类 原 料 叫 廊郦野 迎 画画当智 成 然 酷 酷 片画画(1)在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度，这是因为酶(2)在酒精发酵阶段，需添加酵母菌。在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭。通气能提高 的数量，有利于密闭时获得更多的酒精产物。(3)在醋酸发酵阶段，独流老醋采用独特的分层固体发酵法，发 酵 3 0 天。工艺如下。成熟酒酷醛能醯格成熟辞酷发酵过程中，定期取样测定醋酸杆菌密度变化，趋势如图。据图分析，与颠倒 前 相 比，B 层醋酸杆菌在颠 倒 后 密 度 变 化 的 特 点 是,由 此 推 测，影 响 醋 酸 杆 菌 密 度 变 化 的 主 要 环 境 因 素 是乳酸含量高
14、是独流老醋风味独特的重要成因。发 酵 过 程 中，发酵缸中层醋醋有利于乳酸菌繁殖，积累乳酸。成熟醋醋中乳酸菌的种类明显减少，主要原因是发酵后期营养物质消耗等环境因素的改变，加 剧 了 不 同 种 类 乳 酸 菌 的,淘汰了部分乳酸菌种类。【解析】(1)酶的活性受温度影响，最适温度下，酶的活性最高。(2)通气会促进酵母菌有氧呼吸，促进酵母菌群的繁殖，有利于获得更多酒精产物。(3)据图知，B层醋酸杆菌为“S”型曲线增长，变化趋势为先快速增长后保持稳定。影 响 B层的主要环境因素为氧气、pH和营养条件。乳酸菌为厌氧菌，应该是下层发酵有利于其繁殖，如前面两个发酵缸中的B层，后面两个发酵缸中的A层。不同
15、种类乳酸菌之间为竞争关系。让 豆 腐 t长出毛霉【答案】（1）在最适温度条件下催化能力最强（2）酵母菌（3）先快速增长后趋于稳定 氧气、营养物质、pH颠倒前的B层和颠倒后的A（或不翻动，或下）种间竞争（或竞争）三、腐乳的制作1 .制作原理：多种微生物参与，其中起主要作用的是_ _ _ _ _ _ o 毛霉等微生物产生的 能将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸；能将脂肪水解为甘油和脂肪酸。2 .制作流程（1）毛霉的来源:传统腐乳制作,菌种来自空气中的毛霉抱子。现代腐乳生产菌种是经过筛选的优良毛霉菌和L并且直接接种在豆腐t（2）需 控 制 条 件：温度为，并保持一定的湿度（1）方 法：逐层加盐,
16、随层数加高而增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些（2）盐 的 作 用：a.,“使 豆 腐 块 变 硬,以 免 后 期 制 作 中 过 酥烂；b.避免豆腐块、腐败变质；c.调味（1）卤汤是由 及各种 配制而成,（2）泗：卤汤中的酒含量一般控制在 左 右.加酒可以抑制微生物的生长,同时使腐乳具有独特的香味（3）香辛料:可以调味,也具 的作用用酒精灯对瓶口灭菌后密封加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制3.影响腐乳品质的条件项目说明水的控制含水量约7 0%,用含水量过高的豆腐制腐乳，不易成形盐的控制盐浓度过高会影响腐乳的口味；盐浓度过低，腐乳易腐败变质酒的控制酒精含量一般控制在12%左右。酒精含量过高，使腐乳成
17、熟期延长；酒精含量过低，杂菌繁殖快，豆腐易腐败温度控制温度为15 18,适合毛霉生长香辛料具有调味和杀菌的作用，也会影响腐乳的风味或质量4.防止杂菌污染（1）用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。（2）装瓶时，操作要迅速小心。加放卤汤后，要用胶条将瓶口密封。封瓶口时,最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。针对训练2（2012.海南单科，30,15分）回答下列关于腐乳制作的问题：（1）腐乳是豆腐经微生物发酵后制成的食品。多种微生物参与了该发酵过程，其中 起 主 要 作 用 的 微 生 物 是，其产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解为 和;其产生的 能将豆腐中的脂肪水解为和 0发酵完成
18、后需加盐腌制，加盐还可以抑制_ _ _ _ _ _ _ _ 生长。（3）腐乳制作的后期可加入由酒和多种香辛料配制而成的卤汤。卤汤除具有一定的防腐作用外，还能使腐乳具有独特的 o【答案】（1）毛 霉 小 分 子 的 肽 氨 基 酸 脂 肪 酶 甘 油 脂 肪 酸（2）微生物（3）风味四、泡菜的制作1.制作原理：在无氧情况下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。2.制作流程加入调味一料、装坛测定亚硝酸盐含员|原料加工|修整、洗涤、晾晒、一切分成条状或片状3.泡菜腌制过程中，乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的含量变化I加盐盐水砺|H泡菜盐水发酵时期乳酸菌乳酸亚硝酸盐发酵初期少（有。2,乳酸菌活动受抑制）少增加（硝酸盐还
19、原菌的作用）4.操作注意事项发酵中期最多(乳酸抑制其他菌活动)积累、增多、p H下降下降(硝酸盐还原菌受抑制，部分亚硝酸盐被分解)发酵后期减少(乳酸继续积累，p H继续下降，抑制其活动)继续增多，pH继续下降下降至相对稳定(硝酸盐还原菌被完全抑制)含量变化曲巍 发酢时间V 发薛时间L 发酵时间注意亚硝酸盐是硝酸盐还原菌促进硝酸盐还原形成的，而不是硝化细菌氧化氨形成的项目注意事项材料的选择与处理(1)蔬菜应新鲜，若放置时间过长，蔬菜中的硝酸盐易被还原成亚硝酸盐(2)清水和盐的质量比为的_ _ _ _ _ _ _ _配制盐水，将盐水煮沸后冷却。煮沸的作用是除去水中_ _ _ _ _ _ _ _,并
20、杀灭盐水中的微生物。冷却后使用的目的是防止温度过高杀死乳酸菌菌种防止杂菌污染每次取样用具要洗净，取样结束要迅速封口发酵条件的控制(1)创造缺氧环境：要选择合格的泡菜坛，不能漏气，以便创造无氧环境，有利于乳酸菌发酵，防止蔬菜腐烂。泡菜坛坛盖边缘内要注满水，以保证坛内乳酸菌发酵所需要的,在发酵过程中要注意补水(2)控制食盐的用量：盐的用量宜控制在10%15%之间，用量过多，乳酸发酵_ _ _ _ _ _ _,风味欠佳。用量过少，杂菌易繁殖，易引起泡菜变质(3)控制温度：温 度 为18 20 C为宜，偏高时有害菌活动旺盛，偏低时乳酸发酵慢(4)控制发酵时间：亚硝酸盐含量在10 d后开始下降容易造成细
21、菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加针对训练3(2015.广东理综，29,16分)泡菜是我国的传统食品之一，但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害。某兴趣小组准备参加“科技创新大赛”，查阅资料得到下图。用Hd，(、一EO-U娼券海里就宣代辐趣看学4035302520151050(1)制作泡菜时，泡菜坛一般用水密封，目的是，乳酸菌发酵第一阶段的产物有 o(2)据图，与第3天相比，第8天后的泡菜更适于食用，因为后者_;pH值呈下降趋势，原因是_ O 该 小 组 得 到 一 株“优选”乳酸菌(亚硝酸盐还原酶活力比普通乳酸菌高5倍)，拟参照资料的实验方案和食盐浓度(4%10%),探究与普通乳酸菌相比用
22、“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低，并确定其最适条件。请你设计一个实验结果记录表，并推测实验结论。【答案】(1)创 造 无 氧 环 境 丙 酮 酸、H、ATP(2)亚硝酸盐含量已接近最低 水 平 乳 酸 积 累(3)结果记录表亚硝酸盐含量(单位：mg/kg)食盐浓度/%乳酸菌发酵时间/d123456789104普通优选7普通优选10普通优选注：其他合理答案也可。推测实验结论：用“优选”乳酸菌制作泡菜，亚硝酸盐含量更低最适条件是亚硝酸盐含量最低时的食盐浓度和发酵时间18 25 c30 35 c15 18 c室温前期需氧，后期不需氧 无 氧 20 c 重 铭 酸 钾 灰 绿 色 pH试
23、纸葡萄酒葡萄醋用来排出CO2防止空气中微生物的污染 7 0%1/3 1012天 78 天附着在葡萄皮上的野生型酵母菌人工培养的酵母菌红葡 萄 皮 的 色 素 缺氧、呈 酸 性 毛 霉 蛋 白 酶 脂 肪 酶 1518 析 出 豆 腐 中 的 水 分 抑 制 微 生 物 的 生 长 酒 香辛料1 2%防 腐 杀 菌 4：1 氧 气 须无氧 环 境 受 抑 制 劭温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短第0步过摸拟1.（2017.辽宁东北育才中学模拟，39）根据下面的实验装置图（甲）和果酒的生产工艺流程简图（乙）回答问题：（1）制作果酒时可选用图甲的装置，为适当提高果酒的生产速率，进气口应;排气口要通
24、过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的原因是o(2)图乙为樱桃果酒生产工艺流程简图，其中冲洗的目的是 o樱桃榨汁前 需 要 除 去 果 柄，此操作是在冲洗之_ _ _ _ _ _ _ _进 行 的。这样做的原因是(3)若是从混杂的微生物中分离酵母菌应使用 培养基。从微生物培养的角度分析，樱桃果汁能够为酵母菌的生长提供水、无机盐和 o(4)樱桃果酒制作是否成功，发酵后可在酸性条件下用 溶液来鉴定。在酒精发酵旺盛时，醋酸菌(填“能”或“不能”)将果汁中的糖发酵成醋酸，乳酸菌(填“能”或“不能”)将乳酸分解成C 0 2和水。【答案】(1)先打开后关闭既可以放气，又可防止污染(2)洗 去 浮 尘 后
25、 防 止 果 汁 流 失 和 杂 菌 污 染(只 答 出 防 止 杂 菌 污 染 也 可)(3)选 择 碳 源、氮 源(4)重 铭 酸 钾 不 能 不 能2.(2 0 1 6山西康杰中学等四校联考，3 9)下图是果酒、果醋的制作流程。请据图回答以下问题：忧氧卜诞一r画-v一i|p胡W卜|彘M卜l|赢1卜|M藁l|在葡萄酒制作过程中出现葡萄酒变酸现象，其原因可能是发酵液中混有_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 菌发酵产生乳酸；也可能是,导致菌生长繁殖，产生醋酸。(2)某同学尝试用罐头瓶制作果酒，在培养过程中，每 隔1 2 h左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧，这样做的主要目的：一是；
26、二是避免氧气进入和杂菌污染。(3)在酸性条件下，可用 来检测果酒发酵是否成功。若要进一步检测所得果酒中活体酵母菌的密度时，一般采用 法，但此种方法最终计算得出的菌体数往往比实际数目低。(4)在果酒制作中，加入的新鲜葡萄汁没有经过灭菌处理，但是在制出的果酒中基本检测不出酵母菌以外的杂菌，从生态学角度分析：一是酵母菌与杂菌之间存在_ _ _ _ _ _ _ _关系；二是 的发酵液令绝大多数其他微生物无法适应而受到抑制；三是由于果酒中的 不利于杂菌的生长。【答案】（1）乳 酸 发 酵 装 置 密 闭 不 严 醋 酸（2）放掉发酵产生的C OK 答案合理即可，如排气、防止装置爆裂、降压等）（3）重铭酸
27、钾稀释涂布平板（4）竞 争 无 氧、呈 酸 性 酒 精3.（2 0 1 7.山东济南一模，3 5）腐乳是我国古代劳动人民创造出的一种经过微生物发酵的大豆食品。下面是腐乳制作的实验流程示意图。请回答下列相关问题。（1）从微生物培养的角度分析，豆腐块是毛霉等微生物的培养基，按照其状态称为 培养基。现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以 o（2）用盐腌制时，应注意控制；配制卤汤时，要使卤汤中酒的含量控制在%左右。腐乳制作过程中，加盐的作用是和O（3）吃腐乳时，会发现腐乳外部有一层致密的“皮”，其实质是微生物的，对人体无害；各地腐乳风味迥异，在原料和菌种相同时，可通
28、过_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _制作出不同风味的腐乳。【答案】（1）固体避免其他菌种的污染，保证产品的质量（2）盐 的 用 量 1 2析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬 抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质（3）（匍匐）菌丝控制发酵的条件4.（2 0 1 7.广西柳州中学模拟，2 8）如图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图，请据图回答下面的问题：（1）选用新鲜蔬菜做泡菜，原因是 o 为了保证既无杂菌，又能使发酵菌发挥正常作用，泡菜所用盐水应_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 再使用O（3）在
29、泡菜腌制过程中经常向坛口边缘的水槽中补充水分，目的是提供环境。(4)在泡菜腌制过程中定期测定亚硝酸盐含量的目的是_ 9泡菜腌制过程中 等因素容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。(5)同样的材料和腌制条件，不同坛中各时期测得亚硝酸盐含量不同，最可能的原因是不同O(6)在果醋的制作过程中酒精浓度较高时，通常不适宜进行醋酸发酵，原因是较高浓度的酒精会_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，使产酸量下降。(7)在制作腐乳、果醋、泡菜的过程中，需要氧气的
30、是_ O【答案】(1)亚硝酸盐的含量低(2)先煮沸杀灭杂菌，后冷却至室温 无 氧(4)把握取食的最佳时间温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短(5)各坛中微生物的种类和数量(6)抑制醋酸菌的生长和代谢(7)腐乳和果醋微生物的培养与应用 H4第 c步试真题1.（20 1 7.课标I ,37,1 5分）某些土壤细菌可将尿素分解成C O 2和N%,供植物吸收和利用。回答下列问题：（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_ _ _ _ _ _ _ _o能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物C O2作为碳源，原因是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
31、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _（答出两点即可）。（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择（填“尿素”
32、“N H 4 N O 3”或“尿素+N H 4 N O 3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是（3）用 来 筛 选 分 解 尿 素 细 菌 的 培 养 基 含 有KH 2P。4和N a2H P O4）其作用有_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _（答出两点即可）。【答案】（1）胭酶分解尿素的细菌是异养生物，不 能 利 用C O 2来合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料（2）尿 素 其 他两 组 都 含 有N H 4 N O 3,能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用N H 4 N O 3,不 能 起 到 筛 选 作 用（
33、3）为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中p H稳定2.（20 1 7.江苏单科，31,7分）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：W E T 飞活 性 污 泥 富集培养 1 0-10-2 1 0-3 10Y 10-5（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白陈、K2H P O4 M g S O 4、苯酚和水，其中可作为碳源的有。(2)将采集到的样品接种培养，苯 酚 用 量 应 随 转 接 次 数 增 加 而 逐 渐,以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步，以便
34、于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加 o 右图为连续划线法示意图，在图中(填图 始处中序号)区域更易获得单菌落。(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先 制 作 系 列 浓 度 梯 度 并 进 行 显 色 反 腿 乂 应，下 表 中1 5号比色管的苯酚浓度应分别为【解析】(1)酚降解菌培养基中的蛋白陈和苯酚为酚降解菌生长提供碳源。(2)转接的目的之一是富集降解苯酚能力强的酚降解菌，随转接次数增多，培养基中的苯酚含量应逐渐增加。若平板中菌落过于密集，则需进一步稀释，降低菌体密度后再涂布培养，以便于菌落分离与计数。制备平板培养基时，需添
35、加琼脂等凝固剂。(3)连续划线时，在划线的末端菌体密度最低，即在划线的末端最易获得单菌落。(4)1号比色管应为空白对照组，由6号比色管中苯酚浓度知，1 5号比色管苯酚浓度应为0.2 mg/L、0.4 mg/L.0.6 mg/L、0.8 mg/L0废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后残留的苯酚浓度约为50X21%=10.5(mg/L),则需对残留液进行20倍稀释后10.5+20=0.525(mg/L),才可以进行比色。【答案】蛋白陈、苯 酚 增 加 稀 释 涂 布 凝 固 剂(3)(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8(3)3.(2016四川理综，10,1 2分)图甲是从土壤中筛选产胭酶
36、细菌的过程，图乙是胭酶基因转录的mRNA部分序列。土壤样品 培养基 培养基 培养基 菌种甲 CUGAGUGAGAAAUUUGGU-271(表示从起始密码开始算起的碱基序号)乙图中选择培养基应以 为唯一氮源；鉴别培养基还需添加作指示剂，产麻酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_ _ _ _ _ _ _ _色。(2)在5个细菌培养基平板上，均 接 种 稀 释 倍 数 为 的 土 壤 样 品 液o.im L,培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是，每克土壤样品中的细菌数量为X 1()8个；与血细胞计数板计数法相比
37、，此计数方法测得的细菌数较(3)现有一菌株的胭酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了 7 0个核昔酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。突变基因转录的mRNA中，终止密码为,突变基因表达的蛋白质含 个氨基酸。【解析】(1)臊酶能够催化尿素分解为氨，故图中选择培养基应以尿素作为唯一氮源。由于尿素被分解成了氮，氮会使培养基的碱性增强，p H升高，使酚红指示剂变红色。(2)用于计数细菌菌落数的接种方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于30 300之间，故选择细菌菌落数为156、178和191的平板计数，每克土壤样品中的细菌数量为(156+
38、178+191)/3+0.1 X 1()5=1 75 X 1()8。由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，故用此方法测得的细菌数偏低。(3)密码子由三个相邻的碱基组成，271个碱基和后面2个碱基一起共构成91个密码子，插 入 的70个核昔酸和后面2个碱基一起共构成24个密码子，后 面 是U G A,是终止密码，翻译结束，表达的蛋白质含115个氨基酸。【答案】（1）尿 素 酚 红 红 稀 释 涂 布 平 板 法 1.7 5 少（3）U G A 1 1 54.（2 0 1 6.课标I ,3 9,1 5 分）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室
39、空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：配制培养基（成分：牛肉膏、蛋白陈、N a C k X、H2O）；制作无菌平板；设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；将各组平板置于3 7 恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题：（1）该 培 养 基 中 微 生 物 所 需 的 氮 来 源 于。若要完成步骤，该培养基中的成分X通常是 O（2）步骤中，实验组的操作是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
40、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ O（3）若在某次实验中，某一实验组平板上菌落平均数为3 6 个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了 6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了现象。若 将 3 0（即 3 6 6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法（填“正确”或“不正确”）。【解析】（1）牛肉膏和蛋白月东都含有蛋白质的水解产物，都可以作为氮源；平板为固体培养基，故需要
41、加入琼脂。（2）实验探究的是教室内不同高度空气中微生物的分布，其中自变量为不同高度，故需在不同高度下放置开盖平板。同时，为了保证单一变量，需要保证开盖放置时间一致。为了保证实验可靠，需要设置多个平行实验。（3）在完全正确操作的情况下，空白对照组中不应出现菌落。若出现菌落，说明操作过程中存在微生物污染，属于实验失误，所得实验数据均不应采用。【答案】（1）牛肉膏、蛋 白 陈 琼 脂（2）将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段 时 间（3）污 染 不 正 确5.（2 0 1 6 课标I I I,3 9,1 5 分）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培
42、养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用 对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _（2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有 和-分离纯化时应挑选出_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _的菌落作为候选菌。（3）乳酸菌在一2 0 长期保存时，菌 液 中 常 需 要
43、加 入 一 定 量 的（填“蒸储水”“甘油”或“碳酸钙”）o【解析】（1）分离纯化乳酸菌时，由于泡菜滤液中菌的浓度高，因此需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，其目的是将聚集在一起的乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单菌落。（2）乳酸菌代谢过程中可产生乳酸，若在培养基中加入碳酸钙，则碳酸钙既可以中和乳酸，又可以在乳酸菌菌落的周围出现明显透明圈，据此可以用于乳酸菌的鉴别。（3）乳酸菌在一20c长期保存时，为了避免水结冰产生冰晶损伤细胞，在菌液中常需栗加入一定量的甘油。【答案】（1）无菌水泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落（2）鉴别乳酸菌中和产生的乳酸（或酸）具 有 透 明 圈
44、（3）甘油6.（2 0 1 5.课标I,3 9,1 5 分）已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用 染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用（填“萃取法”或“水蒸气蒸储法”）从菌体中提取。（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B 的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以 为碳源的固体培养基进行培养。（3）若要测定培养液中微生物B 的菌体数，可在显微镜下用直接计数；若要测定其活菌数量，可选用 法进行计数。（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时
45、间内，在3 5 、4 0 、4 5 温度下降解1 0 g油脂所需酶量依次为4 m g、1 m g、6 m g,则上述三个温度中，C 条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕设计后续实验。【解析】本题主要考查了植物油脂的染色和提取方法、选择培养基的配制、微生物的计数以及确定酶的最适温度的实验设计等。（1）脂肪可用苏丹HI 染液（或苏丹I V 染液）进行染色。微生物A产生的油脂不易挥发，不能用水蒸气蒸储法提取，应用萃取法加以提取。（2）能产生脂肪酶的微生物B 可存在于含有油料作物种子的腐烂物的土壤中，为了选择培养，固体培养基上应以油脂作为唯一碳源。（3）测定培养液中的微生物的菌体数
46、，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数；而要测定活菌数，则可利用稀释涂布平板法进行计数。（4）酶量需要最多的温度下，其酶活力最小，即酶活力最小的温度应为4 5 。三个温度下酶活力最大的温度是4 0 C,但 4 0 不一定是该酶的最适温度，故应围绕4 0 设计后续实验。【答案】（1）苏丹1 1 1（或苏丹I V）萃 取 法（2）油 脂（3）血细胞计数板稀释涂布 平 板（4）4 5 4 07.（20 1 4.课标I,3 9,1 5 分）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖甘酶可将 分解成 o（2）
47、在含纤维素的培养基中加入刚果红（C R）时，CR 可与纤维素形成_ _ _ _ _ _ _ _ 色复合物。用含有CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌 的 菌 落 为 中 心 的。（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：项目酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR 溶液水培养基甲+培养基乙+注：“+”表示有，“一”表示无。据表判断，培养基甲（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是；培养基乙_ _ _ _ _ _ _ _ _ _（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_ _ _ _ _ _
48、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ C【解析】（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分：C I酶、C x酶和葡萄糖昔酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，葡萄糖首酶将纤维二糖分解成葡萄糖。（2）刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。用含有刚果红的纤维素培养基培养纤维素分解菌时，由于纤维素被分解，红色复合物无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌
49、为中心的透明圈。（3）培养基甲未使用琼脂，为液体培养基，不能用于分离单菌落。培养基乙中未添加纤维素，不能和刚果红（C R）形成红色复合物，即使出现单菌落也不能确定为纤维素分解菌。含有纤维素和刚果红（C R）的固体培养基可分离和鉴别纤维素分解菌。【答案】（1）纤 维 二 糖 葡 萄 糖 红 透 明 圈 不 能液体培养基不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素，不会形成C R一纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌8.（2 0 1 4.课标H,3 9,1 5分）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：（1）该小组采
50、用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若 干 灭 菌 后 的 空 白 平 板 先 行 培 养 了一段时 间，这样做的目的是；然后，将1 mL水样稀释1 0 0倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为3 9、3 8和3 7。据 此 可 得 出 每 升 水 样 中 的 活 菌 数 为。（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _