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1、培养基的制备实验报告材料篇一：培育基的制备与灭菌试验报告(具体) 一、试验题目：培育基的制备与灭菌 二、试验目的： 1、明确培育基的配置原则，驾驭配置方法。 2、了解灭菌的原理，学习驾驭灭菌器的运用方法。 三、试验器材： 1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。 2、仪器：三角瓶、培育皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。 四、试验原理： 1、培育基的制备 包括一下几种成分： （1）水分：主要成分。 （2）N源：包括无机氮和有机氮。 （3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。 （4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。 微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。 有
2、些还须要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。 2、培育基配置的原则 依据不同的培育对象及培育目的，选用不同的培育基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。 培育基有以下分类： 按成分：自然培育基、合成培育基、半合成培育基 按状态：固体培育基、半固体培育基、液体培育基 按用途：基础培育基、养分培育基、鉴别培育基、选择培育基 培育基配好后应马上灭菌，防止养分物质中的微生物富集。 3、灭菌： 用理化手段杀灭一切微生物的养分体，包括芽孢和孢子，在试验中应对全部仪器、操作场所、药品及培育基灭菌或消毒。 （1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产
3、生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121、1530min可以彻底灭菌，本次试验灭菌20min。若是含糖培育基，110、30min。 （2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。 （3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。 （4）过滤除菌：试验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22m）。除病菌需更小。 五、试验步骤： 1、牛肉膏蛋白胨培育基的制备 依次精确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入101mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加
4、入1.5g琼脂。加上棉塞，快速拔出能发出嘹亮声响即可，用报纸包住并系好麻绳。 2、包移液管和培育皿 （1）包一包培育皿（一包五个）：用手压紧、塞好，折出棱角，包好后摇摆没有培育皿相互碰撞的声音即可。 （2）包2支移液管：用棉花塞好移液管尾部，露出12cm即可。取长条报纸，一端折 90角，紧密严实沿30角卷好移液管，尾部叠好防止散开。 3、高压蒸汽灭菌 （1）灭菌前要先看水位是否合适。 （2）将包好的待灭菌物品放入内层锅，不要装得太挤，棉塞不应染上培育基。 （3）加盖，两两对称旋紧螺栓。 （4）设定条件：0.1MPa、121、20min，进行加热。 （5）先打开排气阀，待空气排尽后，关上排气阀。
5、 （6）结束后，自然降温，压力降为0后，打开排气阀取出物品。 4、干热灭菌 （1）将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好门箱。 （2）设定条件：160173，恒温2h。 （3）结束后，切断电源，自然降温，降到73以下后开箱取物。 六、思索题： 1、你配制的是什么培育基？ 选择培育基。 2、选择培育基与鉴别培育基的区分？这两种培育基的应用状况。 选择培育基是指依据某种微生物的特别养分要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培育基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。如以纤维素作唯一碳源的培育基可分散到分解纤维素的微生物分散酵母菌或霉菌时，可添加适量的青霉素、四环素或
6、链霉素，以抑制细菌和放线菌的生长。 鉴别培育基是在成分中加入有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能便利地从近似菌落中找到目的菌菌落的培育基，此类培育基一般用于鉴定不同微生物。如EMB即伊红美乳糖造就基。大肠杆菌分解乳糖产生大量混合酸，可染上酸性伊红，伊红和美兰结合，菌落被染成深紫色，从菌落外貌的放射光中还可以看到绿色金属发光。 篇二：培育基的制备与消毒灭菌 试验报告 培育基的制备与消毒灭菌 试验报告 试验目的 1.学习和驾驭配制培育基（以牛肉膏蛋白胨培育基的配制为例）的一般方法和原理。 2.了解消毒和灭菌的原理，驾驭常用灭菌方法的操作步骤。 试验原理 培
7、育基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的养分基质，用以培育、分别、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中微生物种类繁多，养分类型多样，加之试验和探讨的目的不同，所以培育基的种类许多。但是，不同种类的培育基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对PH要求不一样雷菌和酵母的培育基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培育基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培育基时，都要依据不同微生物的要求将培育基的pH调到合适的范围。此外，由于配制培育的各类养分物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培育基必需马上灭菌假如来不及灭菌，
8、应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和变更培育的酸碱度所带来不利的影响。 高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀接着加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于101的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 牛肉膏蛋白胨培育基是一种应用最广泛和最一般的细菌基础培育基，有时又称为一般培育基。由于这种培育基中含有一般细菌生长繁殖所须要的最基本的养分物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培育基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛
9、肉膏为微生物供应碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要供应氮源和维生素，而NaCl供应无机盐。在配制固体培育基时还要加入肯定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培育基中琼脂的含量依据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培育基多用于培育细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 牛肉膏蛋白胨培育基的配方如下： 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0 g NaCl 5.0g 水1010ml pH7.47.6 试验仪器与药品 1.溶液或试剂：牛肉膏
10、、蛋白胨、NaCl、琼脂、1molL NaOH、1molL HCl。 2.仪器或其他用具：试管、三角瓶、1010ml烧杯（或1010ml刻度搪瓷杯）、量筒、玻棒、培育基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（pH 5.5-9.0）、一般棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。 试验步骤 （一）牛肉膏蛋白胨培育基的制备 1.称量（假定配制1010ml培育基） 按培育基配方比例依次精确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯（或1010ml刻度搪瓷杯）中牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后干脆放人水中，这时如略微加热，牛肉膏便会与称量纸分别
11、，然后马上取出纸片。 2.溶化 在上述烧杯中先加入少于所须要的水量（如约730ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1010ml）；假如配制固体培育基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最终补足所损失的水分。 3.调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培育基的原始pH，假如偏酸用滴管向培育基中逐滴加入1molLNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其PH，直至pH达7.4-7.6。反之，用1molLHCl进行调整。 4.过滤 趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些试验结果的视察。可以省去(本试验勿需过滤)。 5.分装 液体分装 分
12、装高度以试管高度的14左右为宜。分装三角瓶的虽则依据须要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，假如是用于振荡培育用，则依据通气量的要求酌情削减；有的液体培育基在灭菌后，须要补加肯定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量肯定要精确。 固体分装 分装试管，其装量不超过管高的15，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 半固体分装 一般以试管高度的13为宜，灭菌后垂直待凝。 6.加塞 培育基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞(或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等)，以阻挡外界微生物进入培育基内面造成污染，并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本试验后面)。 7.包扎 加塞
13、后，将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培育基名称、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，运用时简单解开，同样用记号笔注明培育基名称、配制日期。 8.灭菌 将上述培育基以0.103MPa，l21，20min高压蒸气灭菌。 9.摆斜面 将灭菌的试管培育基冷至50左右(以防斜面上冷凝水太多)，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜 l0.无菌检查 将灭菌培育基放入37的恒温箱中培育24-48h以捡查灭菌是否彻底。 留意事项 1.蛋白胨很简单吸湿，在称
14、取时动作要快速，另外，称量时严防药品混杂一把牛角匙用于一种药品或称取一种药品后，洗净擦干再称职另一药品瓶盖也不要盖错。 2.在琼脂溶化过程中应限制火力，以免培育基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，制培育基时，不行用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培育基中，影响细菌生长。 3.对于有些要求PH较精确的微生物，其PH的调整可用酸度计进行(运用方法、可参考有关说明书)。pH不要调过头，以避开回调而影响培育基内各离子的浓度。配制pH低的琼脂培育基时若预先记好PH并在高压蒸汽下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培育基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整pH。
15、 4.分装过程中，留意不要使培育基沾在管(瓶)口上，以免沾污面塞而引起污染。 （二）高压蒸汽灭菌法步骤 1.加水 运用前在锅内加入适量的水，加水不行过少，以防将灭菌锅烧干，引起炸裂事故。加水过多有可能引起灭菌物积水。水面与三角架相平为宜 2.装料 将灭菌物品放在灭菌桶中，不要装得过满。 3.加盖 盖好锅盖，按对称方法旋紧四周固定螺旋，打开排气阀。 4.加热排气 加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出，待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，排出的气流很强并有嘘声时，维持23min以解除冷空气。如灭菌物品较大或不易透气，应适当延长排气时间，务必使空气充分解除，然后将排气阀关闭。 5.加压 将排气阀关闭
16、 6.保压 当压力升至0.1MPa时，温度达121，此时应留意视察，限制热源。保持压力稳定，维持20-30min后，切断热源。 7.自然降压 当压力表降至“0”处，稍停，使温度接着降至101以下后，打开排气阀，旋开固定螺旋，开盖，取出灭菌物。留意：切勿在锅内压力尚在“0”点以上，温度也在101以上时开启排气阀，否则会因压力隧然降低，而造成培育基猛烈沸腾冲出管口或瓶口，污染棉塞，以后培育时引起杂菌污染。压力降到“0”时，方可打开排气阀。 8.保养 灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，以保持内壁及内胆干燥，盖好锅盖。 9.培育基无菌检查 五、关键步骤及留意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不
17、要过头。 3.干热灭菌要留意物品不要堆放过紧，留意温度的时间限制，73oC以下放物、取物。 4.高压灭菌要留意物品不要过多，加热后解除冷空气，到时降压回零取物。 5.过滤除菌要留意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不行太猛太快，滤膜要留意清洗保存。 陕西师范高校远程教化学院 生物学试验报告 报告题目 培育基的制备与消毒灭菌 姓 名学 号 专 业 批次/层次 指导老师 学习中心试验报告 篇三：选择性培育基的配制试验报告 试验4选择性培育基的配制 【目的】 了解选择性培育基的原理，并掌撮配制选择性培育基的方法和步骤。 【概述】 选择性培育基是一类依据某微生物的特别养分要求或对某化学、物理因素的抗性而
18、设计的培育基，具有使混合苗样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。选择性培育基均含有增菌剂和选择剂Y样接种子这类培育基后，由于抑荫剂的选择性抑制作用.使所要分别的目的菌得到较好的繁殖，而其他菌被抑制。经过肯定的培育时间后.再将目的菌接种到鉴别培育基上，可以提高目的菌的分别阳性率。抑菌剂的种类许多，如孔雀绿、煌绿、亚硒酸钠、去氧胆酸钠、胆盐、四硫磺酸钠或抗生素等，但加人量需精确，有的可以水溶液无菌配制冷藏备用。以上成分的用量、加人方法均按各类配方进行。 马丁氏培育基常用于从自然环境中分别真菌，培育基中的去氧胆酸钠和链霉素不是微生物的养分成分。由于去氧胆酸钠为表面活性剂，不仅可防止霉
19、菌菌丝扩散，还可抑制G一细菌生长，而链霉素对多数G一细菌具抑制生长作用，所以它们是用于抑制细菌和放线菌的生长，而对于真菌的生长则没有影响，从而达到分别真菌的目的。 Ashby无氮培育基常用于从自然界环境中分别固氮菌。培育基中只含有基本的碳源和无机盐，没有氮源。一般的细菌不能在此培育基上生长，一些固氮的细菌可以利用空气中的氮气作为氮源，可以在此培育基上生长，从而达到分别固氮菌的目的。 【材料和器皿】 (1)试剂:蛋白胨，葡萄糖，甘露醇，孟加拉红，链霉素，去氧胆酸钠，KH2PO4，MgSO47H2O, NaC1，CaSO42H2O，CaCO3，琼脂。 (2)器皿:台秤，烧杯，共角烧瓶，量筒，漏斗，
20、试管，玻棒，加压蒸汽灭菌锅等。 (3)其他:药匙，pH试纸，称量纸，记号笔，棉花塞，纱布，线绳，不锈钢试管帽，牛皮纸，报纸等。 【方法和步骤】 1.马丁氏培育基的配制 (l)培育基成分: 葡萄糖 10g 蛋白胨5g KH2PO4 1g MgSO47H2O 0.5g 0.1孟加拉红溶液3.3ml 琼脂 16g 蒸馏水1010ml 自然PH 2去氧胆酸钠溶液20ml（预先灭菌，临用前加入） 链霉素溶液(10100U/ml) 3.3ml（临用前加入） (2)配制方法: 称量:称取培育基各成分的所需量。 溶化:在烧杯中加入约2/3所需水量，然后依次逐一加人并溶化培育基各成分，再按每1010ml培育基加
21、人3.3 ml的0.1%孟加拉红溶液。 定容:待各成分完全溶化后，补足水量至所需体积。 加琼脂:加人所需琼脂量，加热溶化，补足失水。 分装，加塞，包扎。 加压蒸汽灭菌;12I灭菌20min。 临用前，加热溶化培育基，待冷至60左右，按每1010ml培育基以无菌操作加入20ml 2%去氧胆酸钠溶液及3. 3ml的链霉素溶液，快速混匀。 2.Ashby氏无氮培育基的配制 (l)培育基成分: 甘露醇10g KH2PO4 0.2g MgSO47H2O 0.2g NaCl0.2ml CaSO42H2O 0.1g CaCO3 5g 琼脂 1520g 蒸馏水1010ml pH 7.27.4 (2)配制方法:
22、 称量:称取培育墓各成分的所需量。 溶化:在烧杯中加人约2/3所需水量，依次逐一溶化培育基各成分。 定容。 调pH至7 .2一7 .4。 加琼脂:加入所需琼脂量，加热溶化，补足失水。 分装，加塞，包扎。: 加压蒸汽灭菌;121(0.07MPa)灭菌20min。 【结果记录】 记录本试验配制培育基的时问、名称和数量。 【留意事项】 1.称药品用的牛角匙不要混用。 2.称完药品应刚好盖紧瓶盖。 3.调pH时要当心操作，避开回调。 【思索题】 1.何谓选择性培育基? 2.在马丁氏培育基中的孟加拉红、链霉素各起什么作用? 3. Ashby氏无氮培育基为什么可以分别固氮菌? 第17页 共17页第 17 页 共 17 页第 17 页 共 17 页第 17 页 共 17 页第 17 页 共 17 页第 17 页 共 17 页第 17 页 共 17 页第 17 页 共 17 页第 17 页 共 17 页第 17 页 共 17 页第 17 页 共 17 页